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转望江南核糖体失活蛋白基因cassin烟草及其对烟草花叶病毒的抗性

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植物生理与分子生物学学报 2007年第6期33卷 517-523页

作者：阮小蕾刘丽芳李华平华南农业大学植物病毒研究室广州510642

通过构建植物表达载体,由农杆菌介导,将望江南核糖体失活蛋白基因cassuin转入烟草。PCR和Southern blot杂交结果证明:外源基因已经以单拷贝整合到烟草基因组内,并且在后代发生遗传分离。RT-PCR和Northern blot杂交结果显示:外源基因可... 详细信息

通过构建植物表达载体,由农杆菌介导,将望江南核糖体失活蛋白基因cassuin转入烟草。PCR和Southern blot杂交结果证明:外源基因已经以单拷贝整合到烟草基因组内,并且在后代发生遗传分离。RT-PCR和Northern blot杂交结果显示:外源基因可以正常转录。用不同浓度的TMV机械摩擦接种转基因T_1、T_2代各3个自交株系,以非转基因烟草为阴性对照,实验结果表明转基因烟草对TMV表现出不同程度的抗性。

关键词：转基因烟草核糖体失活蛋白抗病性评价烟草花叶病毒

侵染广州番木瓜的曲叶病毒DNA-A分子特征及生物学测定

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中国农业科学 2005年第9期38卷 1805-1810页

作者：张鲁斌周国辉李华平张曙光华南农业大学植物病毒研究室华南农业大学植物病毒研究室广州510642

从中国广州番木瓜上检测获得双生病毒分离物GT,核苷酸序列测定表明,GT分离物DNA-A全长2769个核苷酸,编码6个ORFs,其中病毒链编码AV1(CP)和AV2两个ORFs,互补链编码AC1～AC4四个ORFs。DNA-A全序列、基因间隔区核苷酸序列及各ORF编码的氨... 详细信息

从中国广州番木瓜上检测获得双生病毒分离物GT,核苷酸序列测定表明,GT分离物DNA-A全长2769个核苷酸,编码6个ORFs,其中病毒链编码AV1(CP)和AV2两个ORFs,互补链编码AC1～AC4四个ORFs。DNA-A全序列、基因间隔区核苷酸序列及各ORF编码的氨基酸序列比较表明,GT与广东番木瓜曲叶病毒分离物GD2亲缘关系最近(96.7%)。生物学初步测定表明,该病毒可通过烟粉虱(Bemisiatabaci)传播到番木瓜、烟草和番茄植株上。

关键词：番木瓜番木瓜曲叶病毒 DNA-A 生物学测定

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香蕉束顶病毒株系生物学特性的研究

植物病理学报 2001年第1期31卷 50-55,62页

作者：何自福李华平肖火根范怀忠华南农业大学植物病毒研究室广州510642

在广东香蕉束顶病株症状基本相同的情况下 ,在 8个产区分别随机采集 11～ 15个标样共 111个分离物 ,接种在香蕉苗上 ,其后又从 8个产区的分离物中各选取 1个代表分离物用于进行各项研究。寄主范围试验结果 ,这 8个代表分离物可分为能侵... 详细信息

在广东香蕉束顶病株症状基本相同的情况下 ,在 8个产区分别随机采集 11～ 15个标样共 111个分离物 ,接种在香蕉苗上 ,其后又从 8个产区的分离物中各选取 1个代表分离物用于进行各项研究。寄主范围试验结果 ,这 8个代表分离物可分为能侵染粉蕉的 NSP株系 (以广州天河分离物为代表的 7个分离物 )和不能侵染粉蕉的 NS株系 (高州代表分离物 )。用 Eco RI对 8个毒源地的 111个分离物 DNA组分 1进行酶切分析 ,结果表明 :所有高州分离物共 15个和信宜分离物 14个中的 9个都可以被酶切 ,应属 NS株系 ;而其余 6个毒源地的所有分离物及信宜分离物中的另外 5个都不能被酶切 ,应属 NSP株系。在病害潜育期方面 ,2个株系在大蕉上的差异达到显著水平 ;在香蕉 4个品种上 ,2株系也存在较明显的差异 ,但其中有些差异未达到显著水平。在病毒增殖、运转速度及病毒达到高浓度所需的时间上 ,2个株系也存在显著的差异。

关键词：香蕉束项病毒株系生物学特性香蕉束顶病酶切分析病害潜育期

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香蕉3种病毒的多重PCR检测体系

园艺学报 2010年第5期37卷 829-834页

作者：谭小勇阮小蕾吴丽婷翟国会李华平华南农业大学植物病毒研究室广州510642

根据GenBank中已发表的香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)﹑黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和香蕉线条病毒(Banana streak virus,BSV)的基因序列,找出保守序列分别设计出特异引物,在建立各种病毒单项PCR技术的基础... 详细信息

根据GenBank中已发表的香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)﹑黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和香蕉线条病毒(Banana streak virus,BSV)的基因序列,找出保守序列分别设计出特异引物,在建立各种病毒单项PCR技术的基础上,通过优化多重PCR反应条件,建立了能同时检测3种病毒的多重PCR检测体系。该体系可同时扩增BBTV的615bp、CMV的480bp和BSV的945bp的特异片段。这些片段克隆测序结果表明,多重PCR扩增的不同病毒片段是特异和专化的,其核苷酸序列与相应的病毒基因片段的相似性都达91%以上。该体系的灵敏度测定结果表明,从相当于或大于10-2mg感病植物组织中均能检测到这3种病毒。

关键词：香蕉病毒黄瓜花叶病毒香蕉束顶病毒香蕉线条病毒多重PCR

番木瓜抗环斑病毒突变体抗性遗传及RAPD标记

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植物病理学报 2001年第2期31卷 157-163页

作者：周国辉李华平张曙光饶雪琴王振中范怀忠华南农业大学植物病毒研究室广州510642

:60 Coγ-射线处理番木瓜种子 ,从诱变一代中筛选到 1株耐环斑病毒 ( PRSV)的变异植株 ( M1) ,其侧芽组培后代 ( VM1)部分植株也表现出了耐病性 ,以 VM1为母本进行回交 ,人工接种病毒鉴定回交后代 ( BM2 )的抗病性 ,结果为 :在出自部分... 详细信息

:60 Coγ-射线处理番木瓜种子 ,从诱变一代中筛选到 1株耐环斑病毒 ( PRSV)的变异植株 ( M1) ,其侧芽组培后代 ( VM1)部分植株也表现出了耐病性 ,以 VM1为母本进行回交 ,人工接种病毒鉴定回交后代 ( BM2 )的抗病性 ,结果为 :在出自部分回交果实的 BM2 群体中 ,包含有对 PRSV Ys和 Vb株系具抗性的植株 ,抗感分离比为 1∶ 1,但未发现抗 Sm株系的植株 ;BM2 抗病两性株自交或以其为母本进行回交 ,分别获得诱变第三代 ( M3)及回交诱变第三代 ( BM3) ,人工接种 PRSV Ys株系 ,结果表明 ,BM3抗感分离比也为 1∶ 1,因而认为辐射处理突变产生了具 PRSV株系专化性的显性抗病基因 ,命名为 Rys;但 M3抗感分离比不符合显性单基因 3∶ 1理论值 ,认为是单倍体选择的结果。运用 BSA法 ,在 BM2 中寻找到一个与抗病性密切相关的 RAPD标记 ,经在 BM2 、M3及 BM3抗感群体中检验 ,可作为抗病育种的辅助选择标记。Rys是番木瓜栽培种中发现的第一个抗

关键词：番木瓜环斑病毒抗病突变体 RAPD分子标记抗性遗传

BBTV两个株系DNA组分1的克隆及序列分析

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植物病理学报 2000年第4期30卷 364-369页

作者：何自福李华平肖火根范怀忠华南农业大学植物病毒研究室广州 510642

对在生物学特性特别是寄主范围上存在明显差异的 NSP株系和 NS株系的代表分离物 (广州天河分离物和高州分离物 )的 DNA组分 1进行了克隆和序列分析 ,结果表明 :2个代表分离物的DNA组分 1全序列、ORF及其编码的氨基酸序列的变异率分别为 ... 详细信息

对在生物学特性特别是寄主范围上存在明显差异的 NSP株系和 NS株系的代表分离物 (广州天河分离物和高州分离物 )的 DNA组分 1进行了克隆和序列分析 ,结果表明 :2个代表分离物的DNA组分 1全序列、ORF及其编码的氨基酸序列的变异率分别为 3.2 %、3.1%和 2 .8% ,从而进一步确证了可以用寄主范围来作上述 2个株系的鉴定。此外 ,这 2个株系的 DNA组分 1、ORF及其编码的氨基酸序列分别与肖火根等报道的中国 (广东 )分离物、以及亚洲组和南太平洋组各分离物进行比较 ,结果表明 :NS株系与肖火根等报道的中国 (广东 )分离物的亲缘关系很密切 ;这 2个株系与亚洲组各分离物的差异均较小 ,而与南太平洋组各分离物的差异均较大。

关键词：香蕉束顶病毒株系基因克隆序列分析

广州地区SCMV玉米分离物外壳蛋白基因的序列分析及其引致的生理病变

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华中农业大学学报 2007年第2期26卷 151-156页

作者：陈晓琴伦璇周凌云许东林周国辉华南农业大学植物病毒研究室广州510642 华南农业大学电镜室广州510642

外壳蛋白(CP)基因序列分析结果表明,广州地区甜玉米上的甘蔗花叶病毒(SCMV)分离物属于玉米变异组,与我国其他地区玉米上的SCMV分离物有较大差异。其CP基因核苷酸同一率与广东甜玉米分离物(AJ310105)为91.6%,而与我国其他地区玉米分离物... 详细信息

外壳蛋白(CP)基因序列分析结果表明,广州地区甜玉米上的甘蔗花叶病毒(SCMV)分离物属于玉米变异组,与我国其他地区玉米上的SCMV分离物有较大差异。其CP基因核苷酸同一率与广东甜玉米分离物(AJ310105)为91.6%,而与我国其他地区玉米分离物同一率为85.1%-87.1%。通过对该分离物侵染甜玉米所致的细胞病变进行超薄切片电镜观察,结果表明,除多种细胞器病变外,还有4种类型的内含体,即风轮体、卷筒体、束状体和片层集聚体,部分束状体与胞间连丝相连,可能与病毒胞间运转有关。该分离物机械摩擦接种侵染甜玉米后,引致寄主植物叶组织PAL和SOD酶活性较大的变化,其中PAL活性在侵染早期比对照低,随后比对照高,SOD活性比对照稍高,而POD和CAT酶活则与对照无显著差异。

关键词：甘蔗花叶病毒外壳蛋白基因序列分析细胞病变

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病毒在植物体内的运转

病毒学报 2001年第3期17卷 282-287页

作者：肖火根周国辉范怀忠华南农业大学植物病毒研究室广东广州510642

病毒能否引致植物发病,取决于病毒侵入植物后能否运转到植物的其它部分.一般认为病毒是通过由生物介体或机械磨擦造成的机械损伤而侵入植物细胞的.从初始侵染的细胞开始,大多数病毒在植物体内有两种运转方式:在薄壁细胞间进行的缓慢的... 详细信息

病毒能否引致植物发病,取决于病毒侵入植物后能否运转到植物的其它部分.一般认为病毒是通过由生物介体或机械磨擦造成的机械损伤而侵入植物细胞的.从初始侵染的细胞开始,大多数病毒在植物体内有两种运转方式:在薄壁细胞间进行的缓慢的短距离运转;在输导组织间进行的快速的长距离运转.80年代中期认识到病毒的体内运转需要其基因产物(运动蛋白,movement protem,MP)的参与,证实了烟草花叶病毒(TMV)的30kD蛋白即为TMV的MP[1,2].之后有关病毒MP及对病毒如何在植物体内进行运转的研究取得很大的进展.有关这方面的综述文章有Hull R、Atabekov等、Lucas等和Carrington等[3-6]的.本文主要综述近五年来的研究进展,但为了其完整性,也包含了一些上述综述的主要有关内容.

关键词：植物病毒细胞间转运运动蛋白

VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性

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华中农业大学学报 2009年第4期28卷 418-422页

作者：阮小蕾王加峰李华平华南农业大学植物病毒研究室广州510642

将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完... 详细信息

将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完整的Rep mRNA,但接种后不同时间在接种叶以上部位陆续出现了Rep mRNA的降解;接种后30 d内,接种叶下部第1片叶上始终未出现Rep mRNA的降解;另外,在发生mRNA降解的叶片上都能相继检测到小分子干涉RNA(short interferring RNA,si RNA)的产生。这说明转基因番木瓜的抗病性与mRNA的降解及siRNA的积累有着密切的关系。这种抗性发生在转录后水平上,是由病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)介导产生的。

关键词：番木瓜环斑病毒病毒诱导的基因沉默抗病机制