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大黄酸衍生物的合成及其抗炎活性评价

华南农业大学学报 2024年

作者：李志鹏谭露露邓尧任昊廖晓萍孙坚韩璐华南农业大学兽医学院

【目的】大黄酸具有抗癌、抗菌、抗炎等多种生物活性，但其溶解性差、毒性作用强、生物利用度低，限制了临床应用；本研究选择羟基癸酸和癸醇作为修饰物对大黄酸进行结构修饰，以提高脂溶性、降低毒副作用、提高抗炎抗氧化活性，促进临... 详细信息

【目的】大黄酸具有抗癌、抗菌、抗炎等多种生物活性，但其溶解性差、毒性作用强、生物利用度低，限制了临床应用；本研究选择羟基癸酸和癸醇作为修饰物对大黄酸进行结构修饰，以提高脂溶性、降低毒副作用、提高抗炎抗氧化活性，促进临床应用。【方法】首先，基于大黄酸构效关系，选择大黄酸的羧基与十碳羟基癸酸和癸醇进行酯化反应，合成4种大黄酸衍生物——大黄酸-5-癸醇（R-5HD）、大黄酸-癸醇（R-DA）、大黄酸-10-羟基癸酸（R-10HA）、大黄酸-10-羟基-2-癸烯酸（R-10HDA），通过核磁共振氢谱(1H nuclear magnetic resonance，1H NMR)、傅里叶变换红外光谱（Fourier transfrom infrared spectroscopy，FTIR）确定大黄酸衍生物的化学结构特征。其次，采用CCK-8试剂盒法测定大黄酸及其衍生物对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7存活率的影响，确定大黄酸及其衍生物的适用浓度范围。最后，为了验证大黄酸衍生物的抗炎活性，构建脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的RAW 264.7细胞模型，测定其对活性氧（Reactive oxygen species，ROS）、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）表达量的影响。通过ROS荧光探针双氯荧光黄乙酸乙酯（2， 7-dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA）分析大黄酸衍生物的抗氧化活性。【结果】通过1H NMR和FTIR方法证明4种大黄酸衍生物成功制备。与大黄酸相比，大黄酸衍生物显著提高了RAW 264.7细胞存活率。通过LPS诱导的RAW 264.7细胞模型发现，4种大黄酸衍生物均能显著降低NO的释放量，R-DA显著降低了TNF-α和IL-6以及IL-1β的表达量。与大黄酸相比，R-5HD和R-DA显著抑制ROS的产生。【结论】大黄酸与十碳羟基癸酸或者癸醇发生酯化反应，经过体外抗炎模型验证，大黄酸经修饰后能显著降低大黄酸的细胞毒性，在LPS处理的RAW 264.7细胞模型中更好地发挥抗炎抗氧化活性。本研究聚焦于十碳羟基癸酸或者癸醇对大黄酸进行结构修饰，通过体外实验证实，R-DA具有较强的抗炎、抗氧化活性，为后续大黄酸衍生物的研究和开发提供理论依据。

关键词：大黄酸羟基癸酸癸醇大黄酸衍生物抗炎抗氧化

改良育阴方对非洲猪瘟病毒感染PAMs的cGAS-STING通路影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：陈晓丽周佳浩周静屈倩王志华熊鹰朱咏琪贾伟新吕伟杰郭世宁华南农业大学兽医学院华南农业大学国际中兽医研究所

为评价中药体外对非洲猪瘟病毒的抑制作用，本研究将5种试验用药：连翘、马勃、改良育阴方（MYY）、复方鱼腥草（复方2）和银翘马勃散（复方3），通过qPCR检测不同中药在被非洲猪瘟病毒（ASFV）感染的猪肺泡巨噬细胞（PAMs)中，对ASFV... 详细信息

为评价中药体外对非洲猪瘟病毒的抑制作用，本研究将5种试验用药：连翘、马勃、改良育阴方（MYY）、复方鱼腥草（复方2）和银翘马勃散（复方3），通过qPCR检测不同中药在被非洲猪瘟病毒（ASFV）感染的猪肺泡巨噬细胞（PAMs)中，对ASFV编码的衣壳蛋白p72的影响，筛选出可以显著降低ASFV-p72基因表达的中药为改良育阴方（MYY)。采用LC-MS分析检测出改良育阴方的主要化学成分；采用CCK8法观察改良育阴方对猪肺泡巨噬细胞(PAMs)活力的影响；荧光定量PCR检测ASFV-p72基因的表达；Western blot和ELISA检测CGAS-STING信号通路蛋白表达水平；RU.521作为cGAS抑制剂用于验证MYY在cGAS-STING通路中对ASFV的作用。结果表明，在PAMs中，MYY可以显著降低ASFV-p72基因表达，在ASFV感染2 h给药效果最佳，对ASFV感染PAMs后的细胞活力具有浓度依赖性改善作用。攻毒后2 h使用MYY发现PAMs细胞上清液中干扰素基因刺激蛋白（STING）、TANK结合激酶1（TBK1）、干扰素调节因子3（IRF3）、干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）表达量的下降，PAMs细胞内环状GMP-AMP合成酶（cGAS）、干扰素β（IFNβ）蛋白量表达增加，MYY可激活cGAS-STING-TBK1-IRF3-IFNβ信号通路，促进IFITM3的表达。经RU.521处理后，MYY仍能提高细胞活力，降低ASFV-p72基因的表达。综上所述，MYY具有抑制ASFV的潜在作用，可能与cGAS-STING信号通路的激活促进IFITM3的表达有关。

关键词：改良育阴方非洲猪瘟病毒 LC-MS分析 ASFV-p72基因 CGAS-STING信号通路

沉默PREX1表达对CHMp细胞增殖及侵袭性的影响

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3706-3713页

作者：徐禧莹王毅恒区倩婷洪琳媛刘栩靖卢羡盈贾坤华南农业大学兽医学院广州510642

犬乳腺肿瘤是犬常发肿瘤之一,且有50%左右为恶性,其转移倾向明显,易引起动物死亡。Rho-GTPase蛋白家族中的PREX1蛋白,过度激活会导致Rac-GEF功能紊乱,影响细胞周期,改变细胞生理功能,PREX1的改变可能对细胞癌变有促进作用。为探讨PREX1... 详细信息

犬乳腺肿瘤是犬常发肿瘤之一,且有50%左右为恶性,其转移倾向明显,易引起动物死亡。Rho-GTPase蛋白家族中的PREX1蛋白,过度激活会导致Rac-GEF功能紊乱,影响细胞周期,改变细胞生理功能,PREX1的改变可能对细胞癌变有促进作用。为探讨PREX1对犬乳腺肿瘤细胞生理功能的影响,本研究使用shRNA沉默PREX1表达,利用Western blot试验检测沉默后细胞PREX1蛋白表达量的变化,通过CCK-8试验、克隆形成试验探究其对犬乳腺肿瘤细胞系CHMp增殖能力的影响,通过划痕试验和Transwell试验探索沉默其对犬乳腺肿瘤细胞系CHMp侵袭性的影响。研究结果表明,PREX1的低表达,可以抑制CHMp的增殖及侵袭能力。

关键词：犬乳腺肿瘤 CHMp细胞增殖迁移侵袭

一株铜绿假单胞菌噬菌体全基因组分析及与抗生素体外联合应用效果

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 727-738页

作者：王晋宇张凯川王芮杰高铎蒋祺丰贾坤华南农业大学兽医学院广州510642

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分... 详细信息

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分离到一株铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB,TEM显示病毒颗粒具有一个平均直径为73.02 nm的二十面体头部和一个平均长度为155.57 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,具有双链DNA基因组,宿主谱较窄,耐低温(-20℃)并且在37℃达到最适温度,有良好的酸碱耐受性,在pH为3~12时保持活性,最佳MOI为0.001,一步生长曲线显示潜伏期为10 min,爆发量为50 PFU·cell^(-1),吸附性试验表明PaVOB在10 min的吸附率为99.1%。PaVOB基因组全长为72179 bp,(G+C)%含量为54.81%,与VB PaeP FBPa1亲缘关系小于0.1,ORF预测显示,PaVOB包括74个ORF,软件预测均未发现毒力基因、耐药基因和tRNA存在。此外,抗生素联合应用结果显示,PaVOB与头孢曲松联合应用有协同作用,在效价为107 PFU·mL^(-1)时与恩诺沙星产生协同作用,与庆大霉素产生无关作用。铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB对环境适应能力强,且基因组信息清晰,能够选择性地与不同抗生素联合应用发挥协同作用,具有治疗临床耐药铜绿假单胞菌感染的可能性。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体生物学特性基因组学抗生素联合应用

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高硼暴露通过诱导细胞焦亡加剧鸡肝细胞损伤

畜牧兽医学报 2024年第10期 4747-4759页

作者：何婷刘思颖全锦雯苏伟谦黄江利李玙萌刘忠华余文兰华南农业大学兽医学院华南农业大学实验动物中心

旨在探索硼暴露诱导鸡肝细胞损伤的作用机制。试验选取30只AA肉鸡随机分为对照组（control group, CG）、低硼组（low boron group, LBG）和高硼组（high boron group, HBG）,在基础日粮中分别添加不同剂量硼进行饲喂：基础日粮(硼0 mg... 详细信息

旨在探索硼暴露诱导鸡肝细胞损伤的作用机制。试验选取30只AA肉鸡随机分为对照组（control group, CG）、低硼组（low boron group, LBG）和高硼组（high boron group, HBG）,在基础日粮中分别添加不同剂量硼进行饲喂：基础日粮(硼0 mg·kg-1),低硼日粮(硼120 mg·kg-1)、高硼日粮(硼240 mg·kg-1),处理7及14 d后采集肝组织。使用ICP-MS测定肝组织中的硼含量，全自动血生化分析仪检测ASL及ALT水平，HE染色观察肝组织病理变化，透射电镜观察肝细胞超微结构变化，免疫组化和免疫荧光检测肝细胞焦亡相关蛋白NLRP3及IL-1β定位表达情况，RT-qPCR和Western blot检测NLRP3、Casapse-1、IL-1β、IL-18和GSDMD的mRNA和蛋白表达水平。结果显示，蓄积于肝组织中的硼含量随着硼暴露时间和剂量的增加而增加。此外，14 d-低硼组（14 d-LBG）和高硼组（14 d-HBG）的肝组织结构明显破坏，并且细胞焦亡水平随硼剂量的增加而加剧；与同时间的CG相比，14 d-LBG中NLRP3、Caspase-1、IL-18的mRNA表达水平显著上升（P<0.05）,14 d-HBG的NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18及GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著上升（P<0.05）。高硼暴露可通过诱导细胞焦亡进而造成鸡肝细胞损伤。

关键词：硼细胞焦亡鸡肝细胞

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鸡主要组织相容性复合体分子结构与抗病性关系研究进展

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中国畜牧兽医 2024年第1期51卷 242-254页

作者：贾玉生廖明代曼曼华南农业大学兽医学院广州510642

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为鸡免疫系统中的一个重要部分,主要负责将抗原表位递呈到特异性T淋巴细胞中,诱导免疫应答反应。鸡MHC优势表达1个MHCⅠ分子BF2和1个MHCⅡ分子BLB2,其中MHCⅠ分子结合来... 详细信息

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为鸡免疫系统中的一个重要部分,主要负责将抗原表位递呈到特异性T淋巴细胞中,诱导免疫应答反应。鸡MHC优势表达1个MHCⅠ分子BF2和1个MHCⅡ分子BLB2,其中MHCⅠ分子结合来自细胞质中蛋白多肽,MHCⅡ分子结合来自细胞内囊泡中蛋白多肽和细胞外源性多肽。MHC等位基因多态性对其分子空间结构和结合肽段特性非常重要。不同单倍型MHC由于等位基因的差异其肽结合基序也存在差异,进而影响MHC分子递呈抗原肽数量,影响T细胞免疫应答强度,最终导致不同单倍型鸡对同一病原体表现出抗性或易感性。与人MHC分子相比,紧凑且简单的鸡MHC优势表达单个Ⅰ类分子的特性可以决定鸡是否会对某种病原体存在抗性。为了更好地认识鸡MHC分子在病毒感染过程中的作用及抗病性机制,解析其结构并进行功能研究非常必要。作者主要介绍了鸡MHC的分子结构特征,重点比较了不同单倍型MHC分子结构差异与抗病性的关系,总结了鸡MHC肽结合基序和禽流感病毒抗原肽的鉴定工作,为进一步理解MHC分子递呈肽给T淋巴细胞的机制和开发T细胞表位疫苗奠定基础。

关键词：鸡主要组织相容性复合体(MHC) 结构抗病性

IL-23、VEGFA和TGF-β对小鼠肿瘤免疫微环境的影响

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中国兽医科学 2024年

作者：苏伟谦刘泳琪刘思颖何婷全锦雯黄江利李玙萌刘忠华华南农业大学兽医学院华南农业大学实验动物中心

为探究白介素-23（IL-23）、血管内皮生长因子（VEGFA）、转录生长因子β（TGF-β）过表达对于肿瘤生长以及肿瘤免疫微环境的影响，采用慢病毒转染构建稳定过表达IL-23、VEGFA、TGF-β的B16小鼠黑色素瘤和MC38小鼠结肠癌细胞株，建立小... 详细信息

为探究白介素-23（IL-23）、血管内皮生长因子（VEGFA）、转录生长因子β（TGF-β）过表达对于肿瘤生长以及肿瘤免疫微环境的影响，采用慢病毒转染构建稳定过表达IL-23、VEGFA、TGF-β的B16小鼠黑色素瘤和MC38小鼠结肠癌细胞株，建立小鼠皮下移植瘤模型，定期记录肿瘤生长情况，流式细胞仪检测肿瘤中免疫细胞浸润水平；HE染色检测肿瘤组织结构及病理；RT-qPCR法检测肿瘤中相关炎症因子的表达。结果显示，与对照组相比，IL-23过表达后，B16和MC38肿瘤生长速度下降并且CD8+T细胞与DC细胞浸润比例均显著上升；VEGFA过表达后，B16肿瘤生长速度显著下降，部分抗肿瘤作用的免疫细胞比例显著上升，微血管数量显著多于对照组；TGF-β过表达后，MC38肿瘤生长速度显著下降，CD8+T细胞及DC细胞的浸润比例显著上升，TNF-α表达水平与对照组相比显著下降。以上结果表明，IL-23、VEGFA和TGF-β过表达对B16肿瘤和MC38肿瘤的抑制程度有差异，VEGFA可能通过改变微血管数量的方式改变B16肿瘤免疫微环境从而显著抑制肿瘤生长，TGF-β可能通过直接作用于肿瘤免疫细胞改变免疫微环境与抑制TNF-α表达显著抑制MC38肿瘤生长，IL-23可能通过增加免疫微环境中部分免疫细胞浸润从而一定程度抑制B16和MC38肿瘤的生长。本研究为细胞因子免疫治疗提供了新的实验依据，同时也为不同恶性程度的肿瘤提供免疫治疗参考。

关键词：肿瘤肿瘤免疫微环境细胞因子肿瘤模型基因过表达

单病毒示踪SADS-CoV通过网格蛋白介导的内吞入胞

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病毒学报 2024年

作者：洪文广安达裴义杨永乐李燕单衍可黄耀伟刘斐南京农业大学动物医学院浙江省湘湖实验室华南农业大学兽医学院

猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine acute diarrhoea syndrome coronavirus, SADS-CoV）是一种能够引起仔猪急性腹泻的新发冠状病毒，因其在体外广泛的物种嗜性，具有潜在的跨种传播风险。本研究首先利用单病毒示踪技术平台实现了对SADS-... 详细信息

猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine acute diarrhoea syndrome coronavirus, SADS-CoV）是一种能够引起仔猪急性腹泻的新发冠状病毒，因其在体外广泛的物种嗜性，具有潜在的跨种传播风险。本研究首先利用单病毒示踪技术平台实现了对SADS-CoV入胞动态过程的可视化；接着，结合网格蛋白介导的内吞途径（Clathrin-mediated endocytosis, CME）抑制剂（氯丙嗪）和表皮生长因子通路底物15突变体质粒确定了SADS-CoV依赖CME的入胞路径。通过对SADS-CoV依赖CME的入胞动态事件进行可视化分析，发现SADS-CoV入胞后形成的网格蛋白包被的囊泡（Clathrin-coated vesicle, CCV）发生了去包被的现象，并进一步发现SADS-CoV依赖CME内化后可快速进入早期内体，同时CME介导SADS-CoV入胞后的CCV去包被现象是发生在早期内体中。综上，本研究基于单病毒示踪技术，解析了SADS-CoV依赖CME内化后快速进入早期内体中发生CCV去包被的动态过程，进一步加深了对SADS-CoV感染过程的理解，同时也为抗病毒药物的研发提供了理论依据。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒网格蛋白内吞单病毒示踪

积雪草酸通过抑制氧化应激和铁死亡减轻脂多糖诱导的肉鸡心肌损伤的研究

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1787-1799页

作者：章心婷邱文粤庞晓玥苏依曼叶嘉莉黄健佳周水莲唐兆新王荣梅苏荣胜华南农业大学兽医学院广州510642 韶关学院英东生物与农业学院韶关512005

旨在探讨不同浓度积雪草酸(AA)对脂多糖(LPS)诱导肉鸡心肌氧化应激和铁死亡的影响。选取50只1日龄肉鸡适应性饲养至7日龄,并随机分为5组,即对照组(Control)、LPS组(LPS)、低剂量AA组(LPS+AA 15 mg·kg^(-1))、中剂量AA组(LPS+AA 30 mg·... 详细信息

旨在探讨不同浓度积雪草酸(AA)对脂多糖(LPS)诱导肉鸡心肌氧化应激和铁死亡的影响。选取50只1日龄肉鸡适应性饲养至7日龄,并随机分为5组,即对照组(Control)、LPS组(LPS)、低剂量AA组(LPS+AA 15 mg·kg^(-1))、中剂量AA组(LPS+AA 30 mg·kg^(-1))、高剂量AA组(LPS+AA 60 mg·kg^(-1))。所有AA组用相应剂量的AA连续灌胃14 d。在16、18和20日龄时,所有LPS组肉鸡腹腔注射0.5 mg·kg^(-1) LPS以建立急性心肌损伤(AMI)模型并于21日龄时处死肉鸡并采集心肌样品。通过苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化;使用谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)试剂盒检测心肌组织氧化应激指标;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测心肌组织氧化应激和铁死亡相关基因和蛋白的表达情况;通过免疫组织化学法检测心肌组织中Nrf2和SLC7A11的阳性表达率;通过免疫荧光法检测心肌组织中GPX4的阳性表达率。结果发现,AA预处理可以减轻LPS诱导的心肌病理损伤;与LPS组相比,中剂量AA预处理后心肌中GSH-Px的活性显著升高(P<0.01),AA预处理均显著降低MDA的含量(P<0.05);此外,AA预处理降低了LPS诱导的心肌Keap1、HMGB1和PTGS2的mRNA表达(P<0.05),促进了Nrf2、HO1、NQO1、GCLC、GCLM、SLC7A11、FTH1和GPX4的mRNA表达(P<0.05),同时,也降低了Keap1、HMGB1的蛋白表达,促进了Nrf2、HO1、NQO1、SLC7A11、FTH1和GPX4的蛋白表达(P<0.05);免疫组织化学和免疫荧光结果表明,AA预处理可促进Nrf2(P<0.01)、SLC7A11(P<0.01)和GPX4(P<0.05)的表达。本结果首次表明,AA可通过调节氧化应激和铁死亡缓解LPS诱导的急性心肌损伤(AMI)。AA有望成为未来预防LPS诱导肉鸡AMI的潜在食品添加剂。

关键词：积雪草酸急性心肌损伤脂多糖氧化应激铁死亡

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