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与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1127-1136页

作者：梁灿新郑小雪舒雪利周婉怡廖明曹伟胜华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业部兽用疫苗创制重点实验室广州510642

本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡... 详细信息

本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus, FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。

关键词：黄羽肉鸡鸡内皮血管瘤 K亚群禽白血病病毒遗传进化分析

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基于猪流行性腹泻病毒GⅡb亚型重组荧光病毒中和抗体检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1649-1660页

作者：林莉莉张梦迪朱琳琳马海龙孙琪何启盖张梦佳李文涛华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室武汉430070 农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070

2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)GⅡ型变异毒株的出现,导致全世界范围内猪流行性腹泻(PED)的病死率显著增加。疫苗免疫是PED有效防控的重要策略之一,疫苗诱导的中和抗体水平是免疫效果评价和疫苗质量评估的重要指标。然而,在Vero-CC... 详细信息

2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)GⅡ型变异毒株的出现,导致全世界范围内猪流行性腹泻(PED)的病死率显著增加。疫苗免疫是PED有效防控的重要策略之一,疫苗诱导的中和抗体水平是免疫效果评价和疫苗质量评估的重要指标。然而,在Vero-CCL81上开展的PEDV经典中和试验中所添加的胰酶会导致试验结果不稳定等问题。本研究拟在构建稳定表达绿色荧光蛋白的重组病毒基础上,建立一种能准确评估样品中和抗体的检测方法。本研究在pUC57载体上克隆插入GⅡb亚型PEDV-GDU株部分ORF1a和ORF1b基因片段与其他结构基因片段,并通过无缝克隆技术将ORF3基因替换为EGFP基因,构建辅助质粒pUC57-PEDV-GDU-dORF3-EGFP,通过RNA定向重组技术拯救重组荧光病毒rPEDV-GDU-dORF3-EGFP。进一步通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blot和病毒生长曲线测定等方法,比较重组荧光病毒和亲本病毒生物学特性。最终利用重组荧光工具病毒筛选在不添加胰酶的条件下仍能支持PEDV有效增殖的细胞系,并建立中和试验方法。结果表明,成功拯救重组荧光病毒rPEDV-GDU-dORF3-EGFP,且在Vero-CCL81细胞上,重组荧光病毒与亲本病毒呈现相似的生物学特性。利用该重组荧光病毒筛选到一株亚克隆Huh7.10细胞可支持PEDV在无外源胰酶添加条件下的有效感染与复制。并利用Huh7.10细胞和重组荧光病毒成功建立了PEDV中和试验方法,相关性试验分析表明,该方法测定结果与ELISA抗体检测结果相关性高于PEDV经典中和试验。以上试验结果表明,本研究成功建立了PEDV-GDU毒株的反向遗传操作平台,为PED新型疫苗候选毒株的快速制备提供了有力的工具。此外,基于重组荧光病毒在Huh7.10细胞上建立的中和试验方法能更准确地测定血清中和抗体水平,为疫苗免疫效果的评估提供了有效的技术支持手段。

关键词：猪流行性腹泻病毒反向遗传学胰蛋白酶报告病毒中和试验

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三株鸡传染性支气管炎病毒优势流行毒株全基因组分析及其致病性

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2109-2122页

作者：熊挺何献铭赵希雅庄婷婷黄美珍梁世金余传照梁雪静陈瑞爱岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心肇庆526238 华南农业大学兽医学院广州510642

为调查研究禽传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及优势毒株致病特性,本研究对实验室分离的IBV毒株进行了遗传演化研究和致病性研究,旨在了解我国当下IBV流行毒株基因型、生物学特性以及为新疫苗的研制提供借鉴参考。首先对56株IBV分离毒株S... 详细信息

为调查研究禽传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及优势毒株致病特性,本研究对实验室分离的IBV毒株进行了遗传演化研究和致病性研究,旨在了解我国当下IBV流行毒株基因型、生物学特性以及为新疫苗的研制提供借鉴参考。首先对56株IBV分离毒株S1全长核苷酸序列进行遗传演化分析,从中挑选了MH20、KC和JS96 3株优势基因型毒株进行全基因组测序分析,然后选取毒力较强的JS96毒株进行了SPF鸡致病性试验。结果表明:遗传演化分析结果显示GI-19是我国主要流行毒株,占比约53.57%,同时变异毒不断涌现,GVI(新基因型)明显的流行增多。3株优势基因型分离毒株的全长基因组与QX-like毒株相似性最高,达到97%以上,但与国内外疫苗株、经典毒株的相似性低,仅为77%左右。抗原表位分析同样表明了分离株与疫苗毒株、经典毒株的B细胞抗原表位数量和序列都存在差异。3株分离毒株均可导致SPF鸡胚矮化和致死,其中JS96对1日龄SPF鸡的致病率高于15日龄SPF鸡,1日龄SPF鸡100%死亡率,15日龄SPF鸡出现生长显著迟缓和个别鸡症状明显,发病鸡剖检均可见“花斑肾”。本研究表明,QX-like基因型IBV毒株是现下IBV的主要流行毒株,对低日龄鸡致病性强,易发生基因重组,与疫苗毒株、经典毒株S蛋白相似性低,适配性较差,急需选择合适疫苗及研发新型疫苗,才能控制当下IBV疫病流行,减少养禽业的损失。

关键词：禽传染性支气管炎病毒基因测序演化与相似性分析致病性

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鸡传染性支气管炎CK/CH/GD/W0712株的分离鉴定和基因序列分析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：杜孝文周江涛黄光宇江丹莉袁朝霞华南农业大学兽医学院人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业农村部人畜共患病重点实验室仲恺农业工程学院动物科技学院

对广州某已接种疫苗鸡场采集疑似感染传染性支气管炎病毒(IBV)的病鸡进行病毒分离及全基因测序，了解鸡传染性支气管炎病流行情况，为其防控提供理论依据。通过SPF鸡胚接种、鸡胚尿囊液的RT-PCR鉴定和全基因测序，对分离病毒进行遗传变... 详细信息

对广州某已接种疫苗鸡场采集疑似感染传染性支气管炎病毒(IBV)的病鸡进行病毒分离及全基因测序，了解鸡传染性支气管炎病流行情况，为其防控提供理论依据。通过SPF鸡胚接种、鸡胚尿囊液的RT-PCR鉴定和全基因测序，对分离病毒进行遗传变异分析，进行S1基因和全基因组同源性分析，并构建遗传进化树；采用RDP4.95、Simplot3.5软件分析分离病毒株S1基因的重组事件。IBV分离株命名为CK/CH/GD/W0712，基因组全长为27 664 bp，不包含ployA尾，其中S1基因1620 bp，编码540个氨基酸，裂解位点为HRRKR，属于GI-19谱系（QX型）。S1基因重组分析结果显示，分离株可能是由QXIBV株与I0118/14株重组而成。分离株CK/CH/GD/W0712属于基因型GI，除QX型疫苗株以外，与其他疫苗株S1基因同源性只有78.1%～86.0%，与疫苗株相比存在不同程度的变异，常用疫苗不能对其提供完全有效的保护。统计近五年中国在NCBI提交的IBV分离株，构建S1基因系统进化树，并绘制基因型与提交地域的IBV流行图，为广州地区IB的流行病学提供参考，也为IB的防控和疫苗研制选择提供指导。

关键词：传染性支气管炎病毒分离鉴定 S1基因序列分析重组

广东地区人工驯养灵长动物的病毒组特征及猴痘病毒筛查

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中国人兽共患病学报 2024年第5期40卷 391-400页

作者：李娜任照文张翩袁子国陈晓凡廖明王晓虎广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640 华南农业大学兽医学院广州510640

目的明确广东地区灵长动物携带病毒群落的结构特征,并评估重要人兽共患病毒猴痘病毒(MPXV)通过人工驯养灵长动物传入我国的风险。方法在广东省14个地级市的20个野生动物救护中心或动物园采集灵长动物样品,通过Illumina测序技术鉴定广东... 详细信息

目的明确广东地区灵长动物携带病毒群落的结构特征,并评估重要人兽共患病毒猴痘病毒(MPXV)通过人工驯养灵长动物传入我国的风险。方法在广东省14个地级市的20个野生动物救护中心或动物园采集灵长动物样品,通过Illumina测序技术鉴定广东地区人工驯养灵长动物携带病毒组的结构特征;并通过荧光定量PCR方法,对MPXV进行检测,以确认MPXV经广东省人工驯养灵长动物传入的风险。结果共收集灵长动物口咽拭子和粪便489份。高通量测序结果显示,广东地区人工驯养灵长动物粪便中的病毒组结构复杂且具有地区差异,其中丰度最高的是Alphaflexiviridae和Virgaviridae的成员,其次为Parvoviridae和Genomoviridae成员。荧光定量PCR结果显示,广东省内野生动物救护中心或动物园的灵长动物全部为MPXV阴性。结论广东省人工驯养灵长动物携带病毒引起动物源性人兽共患病的风险极低,且MPXV通过广东省人工驯养灵长动物传入我国的风险几乎为零。

关键词：灵长动物宏病毒组猴痘病毒人兽共患病荧光定量PCR

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旋毛虫免疫逃避机制的研究进展

中国人兽共患病学报 2024年第1期40卷 70-75页

作者：钱艳红宋帅温肖会贾春玲吕殿红袁子国罗胜军华南农业大学兽医学院广州510642 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640

旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种全球分布的食源性人兽共患寄生虫病,对动物生产和人兽公共卫生安全造成严重危害。旋毛虫发育史复杂,整个生命周期都在同一宿主体内完成,为了能与宿主相互共存,其进化出各种免疫逃避机制来躲避宿主的免疫清... 详细信息

旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种全球分布的食源性人兽共患寄生虫病,对动物生产和人兽公共卫生安全造成严重危害。旋毛虫发育史复杂,整个生命周期都在同一宿主体内完成,为了能与宿主相互共存,其进化出各种免疫逃避机制来躲避宿主的免疫清除,从而建立长期的慢性感染。本研究从旋毛虫抗原变异、对宿主的免疫调节作用和通过形成包囊产生免疫隔离3个方面,对其免疫逃避机制进行阐述,将为深入了解旋毛虫的致病机制提供重要帮助。

关键词：旋毛虫感染免疫逃避

非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2024年

作者：杜晨暄邹亚文张颜王智勇李丹彤喻蓓蕾蒋一凡王瑀琦何庆杨毅王乃东湖南农业大学动物医学院兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心湖南派智生物科技有限公司

为了获得特异性针对非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）CD2v蛋白单链抗体（scFv），本研究以CD2v阳性单克隆抗体杂交瘤细胞为模板，通过PCR扩增得到抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因，利用Overlap-PCR在VH和V... 详细信息

为了获得特异性针对非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）CD2v蛋白单链抗体（scFv），本研究以CD2v阳性单克隆抗体杂交瘤细胞为模板，通过PCR扩增得到抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因，利用Overlap-PCR在VH和VL基因间引入短肽（Gly4Ser）2连接形成scFv。将其插入原核表达载体pET28a（+）中，并转化至大肠杆菌BL21（DE3），经1 mmol/L IPTG于25 ℃条件下诱导表达，通过ELISA对复性scFv蛋白进行反应活性评价。结果显示，通过CD2v蛋白的阻断ELISA筛选出分泌阻断效果良好的单抗杂交瘤细胞株4B8，并成功扩增获得单克隆抗体4B8的重链可变区（VH，399 bp）、轻链可变区（VL，369 bp）及由GS Linker连接而成的4B8-scFv基因（744 bp）；SDS-PAGE结果显示，4B8-scFv在大肠杆菌BL21（DE3）中以包涵体形式表达，通过尿素变性及透析复性，得到纯度较高的4B8-scFv（相对分子质量约为34 ku）；间接ELISA结果表明，4B8-scFv与CD2v蛋白具有良好的反应活性。

关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体单链抗体 CD2v蛋白

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禽霍乱的诊断与防治措施

养禽与禽病防治 2024年第1期 24-30页

作者：王清义袁为锋陈礼斌林秋燕任涛华南农业大学兽医学院农业农村部兽用疫苗创制重点实验室人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室、广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642

禽霍乱是由多杀性巴氏杆菌感染引起的一种常见传染病,家禽和野禽都易感,国内外流行,我国各地均有发生,给养禽业带来巨大损失。对于禽霍乱的诊断,目前主要通过临床症状、病理剖检和实验室检查方法;对于该疾病的预防和治疗,主要通过生物... 详细信息

禽霍乱是由多杀性巴氏杆菌感染引起的一种常见传染病,家禽和野禽都易感,国内外流行,我国各地均有发生,给养禽业带来巨大损失。对于禽霍乱的诊断,目前主要通过临床症状、病理剖检和实验室检查方法;对于该疾病的预防和治疗,主要通过生物安全、抗菌药物和疫苗使用。本文将聚焦禽霍乱的诊断方法、抗菌药物和疫苗种类,并对禽霍乱与其他疫病混合感染的情况进行论述。本文旨在对养殖中出现的禽霍乱提供诊断和防治措施,为禽类养殖提供预防与解决方案。

关键词：禽霍乱巴氏杆菌诊断防治疫苗

艾美耳球虫的遗传操作：平台建立、应用与展望

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畜牧兽医学报 2024年

作者：梁瑞英索静霞梁琳刘贤勇丁家波索勋汤新明中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方)农业农村部兽用生物制品与化学药品重点实验室中国农业大学动物医学院兽医公共卫生安全全国重点实验室农业农村部国家动物寄生原虫实验室

艾美耳属球虫是畜牧生产中最常见的寄生虫，引起鸡、兔、羊、牛等养殖动物严重消化系统疾病，影响动物健康和养殖效益。随着分子生物学技术的飞速发展，研究者们先后建立了艾美耳球虫的瞬时转染、稳定筛选和基因编辑等遗传操作平台，实... 详细信息

艾美耳属球虫是畜牧生产中最常见的寄生虫，引起鸡、兔、羊、牛等养殖动物严重消化系统疾病，影响动物健康和养殖效益。随着分子生物学技术的飞速发展，研究者们先后建立了艾美耳球虫的瞬时转染、稳定筛选和基因编辑等遗传操作平台，实现了艾美耳球虫的基因过表达、基因敲除和基因编辑等操作，极大推进了艾美耳球虫基础生物学和作为新型真核载体疫苗的研究进展，但仍面临一些挑战。本文围绕艾美耳球虫遗传操作平台建立的关键技术、创新性设计、存在的技术瓶颈以及应用前景进行系统梳理和总结，为其他畜禽寄生虫遗传操作平台的构建提供参考，也为球虫病新型防控制剂的研制提供新的思路。

关键词：艾美耳球虫遗传操作基因编辑技术瓶颈疫苗载体