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阿仑膦酸钠对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞影响的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2011年第1期25卷 50-55页

作者：王哲彦王文雅张柳田发明程潭杨林华北煤炭医学院病理教研室河北唐山063000 华北煤炭医学院附属医院骨外科成都大学医护学院药理教研室

目的二膦酸盐类药物可抑制骨重塑,通过观察阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞的影响,探讨ALN治疗骨性关节炎(osteoarthritis,OA)的可行性。方法取15只1月龄SPF级SD大鼠(雌雄不限,体重100～150g)膝... 详细信息

目的二膦酸盐类药物可抑制骨重塑,通过观察阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞的影响,探讨ALN治疗骨性关节炎(osteoarthritis,OA)的可行性。方法取15只1月龄SPF级SD大鼠(雌雄不限,体重100～150g)膝关节软骨,体外培养软骨细胞并传至第3代。倒置相差显微镜下观察细胞形态并进行鉴定。将第3代软骨细胞分为3组:空白对照组(A组)软骨细胞用常规DMEM完全培养液培养5d;IL-1β诱导组(B组)软骨细胞以10ng/mL重组人IL-1β培养2d后更换为常规DMEM完全培养液培养3d;IL-1β诱导后加ALN培养组(C组)软骨细胞以10ng/mL重组人IL-1β培养2d后更换为浓度为1×10-6mol/L的ALN培养3d。培养后取各组细胞进行免疫细胞化学染色及实时PCR检测,观察细胞中Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,ColⅡ)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase13,MMP-13)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。结果甲苯胺蓝染色示培养的细胞呈异染性,证实为软骨细胞。免疫细胞化学染色显示:A、B、C组ColⅡ表达积分吸光度(IA)值分别为15.3770±0.5718、5.4632±0.4504、10.2907±0.4992,C组高于B组,但低于A组,差异有统计学意义(P0.05);β-catenin表达IA值分别为4.3903±0.5519、11.7999±0.3487、6.6117±0.3818,C组低于B组,但高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时PCR检测示,C组ColⅡmRNA表达高于B组,MMP-13及β-catenin的mRNA表达低于B组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);ColⅡ和β-catenin mRNA表达高于A组,MMP-13mRNA表达低于A组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ALN可能通过抑制IL-1β诱导的大鼠膝关节软骨细胞中ColⅡ的降解并下调MMP-13及β-catenin因子的表达,对软骨细胞具有一定的保护作用。

关键词：骨性关节炎阿仑膦酸钠软骨细胞 Ⅱ型胶原基质金属蛋白酶13 β-连环蛋白大鼠

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表皮生长因子与器官纤维化

现代预防医学 2008年第7期35卷 1398-1400页

作者：刘岩王献华周玮玮华北煤炭医学院病理教研室唐山063000 华北煤炭医学院病理教研室

表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是Cohen(1962)首次在小鼠的颌下腺中发现的一种小分子蛋白。1975年从人尿中提取出人表皮生长因子(humanEGF,hEGF),由于其可抑制胃酸分泌,又称抑胃素。因其具有多种生物学活性

关键词：表皮生长因子纤维化

SiO2对血小板源性生长因子蛋白表达及胶原合成的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2009年第4期27卷 218-221页

作者：王献华郝小惠赵静马小兵朱兰孙影华北煤炭医学院病理学教研室唐山063000 华北煤炭医学院实验中心唐山063000

目的探讨SiO2刺激矽肺患者的肺泡巨噬细胞（AM）及其介导的人胚肺成纤维细胞（HELF）血小板源性生长因子（PDGF）的蛋白表达及胶原合成。方法收集矽肺患者AM，体外经SiO2刺激3、6、12、18、24、36h，收集培养上清，用ELISA法检测AM上清... 详细信息

目的探讨SiO2刺激矽肺患者的肺泡巨噬细胞（AM）及其介导的人胚肺成纤维细胞（HELF）血小板源性生长因子（PDGF）的蛋白表达及胶原合成。方法收集矽肺患者AM，体外经SiO2刺激3、6、12、18、24、36h，收集培养上清，用ELISA法检测AM上清中PDGF的蛋白表达，用其表达峰值时的培养上清与HELF共同孵育6、12、18、24、36、48h，用免疫细胞化学法及Western blot法分别检测HELF及其培养上清中PDGF的蛋白表达情况，用^3H-脯氦酸掺入法检测HELF胶原的合成与分泌情况。结果经SiO2刺激的矽肺患者AM条件上清中PDGF的蛋白表达量在作用24h时最高（平均吸光度值为0．282±0．019），与同期对照组（平均吸光度值为0．214±0．014）相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。用AM上清作用于HELF后，HELF细胞内及其培养上清中PDGF的蛋白表达均升高，与对照组比较，HELF培养上清中PDGF蛋白表达于12、18、24、36、48h时明显增高，HELF中PDGF蛋白表达于18、24、36、48h时明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。矽肺患者AM培养上清与HELF共同孵育不同时间后，HELF细胞内及培养上清中胶原明显增加。结论SiO2通过AM的介导影响了HELF中PDGF的蛋白表达与胶原合成及分泌。

关键词：二氧化硅成纤维细胞受体血小板源生长测子胶原

乳腺癌中KiSS-1与核因子-κBp50和基质金属蛋白酶9的表达之相互关系及其临床病理意义

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中华病理学杂志 2008年第4期37卷 238-242页

作者：伊雪李常颖张素华王献华李占清杨方华北煤炭医学院病理学教研室唐山063000

目的探讨KiSS-1、核因子（NF）-κBp50和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在乳腺癌组织中的表达和相互关系及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学EliVision法检测152例标本（乳腺癌92例，乳腺增生30例，癌旁乳腺30例）和伴有癌转移的腋窝淋巴... 详细信息

目的探讨KiSS-1、核因子（NF）-κBp50和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在乳腺癌组织中的表达和相互关系及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学EliVision法检测152例标本（乳腺癌92例，乳腺增生30例，癌旁乳腺30例）和伴有癌转移的腋窝淋巴结54枚中KiSS-1、NF—κBp50及MMP-9蛋白表达情况。应用原位杂交方法检测50例乳腺癌组织、20例癌旁乳腺组织中KiSS-1 mRNA的表达。应用CMIAS真彩图像分析仪对免疫组织化学和原位杂交结果进行积分吸光度（IA）值测定，并计算其平均IA值。结果（1）与癌旁乳腺组织表达比较，KiSS-1基因在乳腺癌组织学分级Ⅰ～Ⅱ级中（13．59±6．24）明显高于Ⅲ级（9．53±4．57）、TNM分期高（Ⅰ～Ⅱ期12．35±6．15，Ⅲ～Ⅳ期7．53±4．93）、在淋巴结转移率高的乳腺癌中的表达减弱（9．61±5．25，无转移组为13．06±5．89）甚至缺失；其在淋巴结转移灶（3．47±1．59）中的表达（IA值）明显低于其相应的原发灶（10．02±3．80）。乳腺癌组织中KiSS-1mRNA表达（10．84±4．90）与KiSS-1蛋白表达（11．67±6．22）有较好的一致性。（2）NF-κBp50、MMP-9在乳腺癌组织中表达上调，其上调程度随着乳腺癌分化程度的降低、TNM分期的增加、淋巴结转移及瘤块增大而逐渐增高。结论KiSS-1蛋白在乳腺癌分化程度低、淋巴结转移组中的表达下降，并分别与NF—κBp50、MMP-9蛋白表达呈负相关；NF-κBp50与MMP-9蛋白在乳腺癌中表达呈正相关，KiSS-1蛋白可能参与了乳腺癌的转移扩散。

关键词：乳腺肿瘤基因 KiSS-1 NF—κB 明胶酶B 肿瘤转移转录因子TFⅢ类

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牛磺酸对Ⅱ型糖尿病大鼠血液流变学的影响

中国应用生理学杂志 2010年第4期26卷 474-476页

作者：张菲菲张艳敏门秀丽赵利军孔小燕董淑云华北煤炭医学院病理生理教研室华北煤炭医学院附属医院河北唐山063000

目的：探讨牛磺酸（taurine）对Ⅱ型糖尿病（diabetes mellitus,DM）大鼠血液流变学及氧化应激的影响。方法：将40只Wistar大鼠随机取10只为正常对照组（control组）、其余30只大鼠中取20只符合模型标准的大鼠随机分为糖尿病组（DM组）... 详细信息

目的：探讨牛磺酸（taurine）对Ⅱ型糖尿病（diabetes mellitus,DM）大鼠血液流变学及氧化应激的影响。方法：将40只Wistar大鼠随机取10只为正常对照组（control组）、其余30只大鼠中取20只符合模型标准的大鼠随机分为糖尿病组（DM组）和牛磺酸治疗组（Tau组,采用20g/L牛磺酸生理盐水溶液治疗,200mg/kgbw）,前两组注射等体积的生理盐水溶液。8周后,测3组大鼠血浆葡萄糖、糖化血红蛋白、超氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及血液流变学指标。结果：与对照组相比,糖尿病大鼠血糖、MDA及糖化血红蛋白明显升高,SOD活性降低,全血粘度、红细胞聚集指数、红细胞压积明显增大,红细胞变形指数减小;牛磺酸能明显降低糖尿病大鼠的血糖、MDA和糖化血红蛋白（P〈0.05或P〈0.01）,显著升高造模大鼠SOD（P〈0.01）;并且明显降低大鼠全血黏度（P〈0.05）、降低红细胞聚集指数（P〈0.05）,提高红细胞变性指数（P〈0.05）。结论：牛磺酸改善糖尿病大鼠的血液流变性可能与其提高大鼠的抗氧化能力有关,对防治糖尿病血管并发症有较好作用。

关键词：牛磺酸大鼠糖尿病血液流变学

NO对大鼠肢体缺血/再灌注后肾脏P-选择素表达的影响及意义

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中国应用生理学杂志 2007年第4期23卷 456-461页

作者：段国贤赵利军张连元董淑云周洪霞张娜王银环门秀丽李宏杰华北煤炭医学院病理生理教研室河北唐山063000

目的:探讨一氧化氮(NO)对大鼠LI/R后肾脏P-选择素表达的影响及意义。方法:采用本室常规方法复制大鼠LI/R模型。将大鼠随机分为四组:对照组,LI/R组,L-Arg组和L-NAME组。观察肢体缺血4h再灌注4h后各组动物血浆NO及肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)... 详细信息

目的:探讨一氧化氮(NO)对大鼠LI/R后肾脏P-选择素表达的影响及意义。方法:采用本室常规方法复制大鼠LI/R模型。将大鼠随机分为四组:对照组,LI/R组,L-Arg组和L-NAME组。观察肢体缺血4h再灌注4h后各组动物血浆NO及肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的变化;观察肾组织NO、髓过氧化物酶(MPO)、总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、结构型一氧化氮合酶(cNOS)的改变;测定尿蛋白含量、利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测尿蛋白性质;免疫组织化学方法检测肾组织P-选择素(P-selectin)的蛋白表达,结合自动图象分析系统对其结果进行定量分析;肾组织切片经六氨银染色在光镜下观察其形态学改变。结果:与control组比较,LI/R组大鼠血浆NO、BUN、Cr均明显升高;肾组织MPO、NO、tNOS、iNOS均明显增加,而cNOS明显下降;尿蛋白含量增多,电泳显示,有大分子量蛋白排出;光镜下可见肾小管上皮细胞水肿,有炎细胞浸润;免疫组化结果显示:P-selectin蛋白表达明显较control组增强。与LI/R组相比,L-Arg组各项损伤指标明显减轻;肾组织P-selectin蛋白表达明显减弱;L-NAME组血浆和肾组织各项损伤指标明显加重;肾组织P-selectin蛋白表达明显增加。结论:大鼠LI/R后急性肾损伤的发生可能与P-selectin的表达有关;NO可能通过减弱P-selectin的表达及中性粒细胞的浸润,减轻LI/R后肾脏组织形态学及肾功能的损伤性变化。

关键词：一氧化氮 L-精氨酸 P-选择素 N^ω-硝基-L-精氨酸甲酯缺血佴灌注损伤

p38MAPK信号通路在人胚肺成纤维细胞表达Ⅰ型胶原中的调控作用

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第8期26卷 820-822页

作者：彭海兵王献华冯莉华北煤炭医学院病理学教研室

目的：探讨p38MAPK信号通路在调控人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖和Ⅰ型胶原表达中的作用。方法：收集矽肺患者肺泡巨噬细胞（AM），在体外用含有SiO2的DMEM培养液和不含SiO2的DMEM培养液培养18h，然后收集培养的AM上清液。用该上清培养H... 详细信息

目的：探讨p38MAPK信号通路在调控人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖和Ⅰ型胶原表达中的作用。方法：收集矽肺患者肺泡巨噬细胞（AM），在体外用含有SiO2的DMEM培养液和不含SiO2的DMEM培养液培养18h，然后收集培养的AM上清液。用该上清培养HELF，WST-1法检测HELF增殖情况，用免疫细胞化学法检测HELF中Ⅰ型胶原的表达。结果：经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF增殖和Ⅰ型胶原的表达（平均A值为0．304±0．032），与空白对照组（平均4值为0．153±0.021）、对照组（平均吸光度值为0．213±0．021）比较增加，差异有统计学意义（P〈0．01）；预处理组加入了10μmol／L p38 MAPK特异性抑制剂SB203580后，HELF增殖能力和Ⅰ型胶原的表达下降（平均A值为0．176±0．020），与处理组相比差异明显（P〈0．01）。结论：经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF增殖和Ⅰ型胶原的表达，p38MAPK信号通路在此过程中起重要的调控作用。

关键词： SiO2 p38MAPK 肺纤维化肺泡巨噬细胞人胚肺成纤维细胞 Ⅰ型胶原

细胞外信号调节激酶通路对二氧化硅活化的肺成纤维细胞增殖的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2010年第8期28卷 565-568页

作者：冯莉王献华彭海兵朱兰华北煤炭医学院病理学教研室唐山063000 冀唐学院

目的探讨细胞外信号调节激酶（ERK）信号转导通路对经SiO2活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞（AM）条件上清刺激的人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖的影响.方法将矽肺患者支气管肺泡灌洗液中的AM体外再次染尘,取其上清与HELF共同孵育,用特异性... 详细信息

目的探讨细胞外信号调节激酶（ERK）信号转导通路对经SiO2活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞（AM）条件上清刺激的人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖的影响.方法将矽肺患者支气管肺泡灌洗液中的AM体外再次染尘,取其上清与HELF共同孵育,用特异性阻断剂PD98059进行干预,实验分为空白对照组、AM对照组、SiO2处理组、PD98059干预组,通过噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术法及免疫印迹（Western blot）法观察成纤维细胞细胞增殖活性及p-ERK1/2蛋白表达情况.结果 SiO2处理组及AM对照组细胞增殖的吸光度（A值）增高,分别是空白对照组的2.6和2.0倍,差异有统计学意义（P＜0.05）.25和50 μmol/L PD98059组HELF细胞增殖的A值分别是SiO2处理组的72.1%和48.5%,差异有统计学意义（P＜0.05）.经SiO2粉尘刺激的AM培养上清作用于HELF后,p-ERK1/2表达明显上调,15min时已有表达,30min时活化明显,表达最强（A值为0.4653±0.0265）,60min后仍处于较高的状态而表达有所减弱.除15 min外,SiO2处理组各时间点ERK1/2的蛋白表达分别是同期AM对照组的1.25、1.23、1.25倍,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论加尘AM培养上清可能通过ERK1/2信号途径促进HELF的增殖及ERK1/2的活化,而参与矽肺的发生发展.

关键词：细胞外信号调节激酶二氧化硅巨噬细胞,肺泡成纤维细胞

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肺纤维化相关因子研究进展

现代预防医学 2011年第10期38卷 1953-1955+1964页

作者：徐慧蓉马小兵王献华华北煤炭医学院病理学教研室

肺纤维化是多种疾病共有的、不明原因的、以胶原在肺组织沉积为特征的一种病理过程,多种因子,诸如细胞因子、蛋白酶系统及转录因子在肺纤维化的发生、发展过程中起着重要的作用。本文对肺纤维化相关因子的研究进展作一综述,以期进一步... 详细信息

肺纤维化是多种疾病共有的、不明原因的、以胶原在肺组织沉积为特征的一种病理过程,多种因子,诸如细胞因子、蛋白酶系统及转录因子在肺纤维化的发生、发展过程中起着重要的作用。本文对肺纤维化相关因子的研究进展作一综述,以期进一步揭示肺纤维化发病机制,并探索有效的防治措施。

关键词：肺纤维化细胞因子蛋白酶系统转录因子