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蛋白激酶Cα-胞外调节蛋白激酶1／2与人气道平滑肌细胞中周期蛋白D1及P21^cip1表达的关系

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中华结核和呼吸杂志 2008年第12期31卷 915-920页

作者：杜春玲徐永健刘先胜谢俊刚张珍祥张建乔礼芬倪望陈士新华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科卫生部呼吸疾病重点实验室武汉430030

目的探究蛋白激酶C（PKC）α-胞外调节蛋白激酶（ERK）1／2级联对支气管哮喘（简称哮喘）患者血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMC）周期蛋白D1（cyclinD1）、周期蛋白依赖性激酶（CDK）抑制剂P21^cip1的调节作用及细胞增殖的影响。... 详细信息

目的探究蛋白激酶C（PKC）α-胞外调节蛋白激酶（ERK）1／2级联对支气管哮喘（简称哮喘）患者血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMC）周期蛋白D1（cyclinD1）、周期蛋白依赖性激酶（CDK）抑制剂P21^cip1的调节作用及细胞增殖的影响。方法用含10％哮喘患者血清的DMEM培养基被动致敏HASMC后，按随机数字表法分为对照组、12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯（PMA）处理组、PMA±PKCα错配寡核苷酸组、PMA±PKCα反义寡核苷酸组以及PMA±U0126组，每组4个样本。用Westernblot方法检测各组细胞磷酸化PKCα（p-PKCα）、ERK1／2、磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）、cyclinDl和P21eipI的蛋白表达水平，用流式细胞术和四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测HASMC增殖。结果PMA处理组p-PKCα水平、ERK1／2和p-ERKl／2蛋白水平高于对照组，cyclinD1、P21^rip1表达明显强于对照组（相对于各对照组的A值分别为2．10±0．29、1．67±0．19、2．20±0．27、1．99±0．22和3．11±0．29，均P〈0．05），HASMC的增殖[S期细胞比例为（30．3±2．4）％，A490值为0．80±0．06]高于对照组[S期细胞比例为（13．9±2．6）％，A490值为0．41±0．04]，均P〈0．05；PMA±PKCct反义寡核苷酸组中p-PKCot水平低于PMA处理组，ERK1／2和p-ERK1／2表达明显弱于PMA处理组，cyclinD1和P21cipl表达也明显低于PMA处理组（相对于各对照组的A值分别为1．23±0．19、1．34±0．18、1．52±0．20、1．45±0．18和1．49±0．18，均P〈0．05），HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为（21．2±2．8）％，A490值为0．51±0．04；g值分别为6．07，12．63；均P〈0．05]；同样与PMA处理组相比，PMA±U0126组中P-PKCα水平无明显改变（A值为1．99±0．18，g=0．94，P〉0．05），但ERK1／2、P—ERKI／2的表达，cyclinD1和P21^eip1的表达明显低于PMA处理组（A值分别为0．95±0．21、1．15±0．19、1．37±0．15和1．96±0．21，均P〈0．05），HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为（22．0±3．2）％，A490值为0．49±0．03；g值分别为5．51、13．45，均P〈0．05]。结论ERK1／2是PKCα的下游信号分子，PKCα-ERK1／2级联参与了PMA所诱导的哮喘患者血清被动致敏的人气道平滑细胞cyclinD1、P21cip1的表达上调及细胞增殖。

关键词：蛋白激酶Cα 细胞外信号调节MAP激酶类细胞周期蛋白D1 肌细胞平滑肌

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转染IκBα基因抑制NF-κB活性对A549细胞侵袭行为的影响

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癌症 2008年第7期27卷 710-715页

作者：张建徐永健熊维宁张珍祥杜春玲乔礼芬倪望陈士新华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科卫生部呼吸疾病重点实验室湖北武汉430030

背景与目的:近年来的研究显示核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的活化能够调节肿瘤细胞的侵袭和转移。本研究探讨抑制NF-κB的活性对A549细胞侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建表达NF-κB抑制物α同分异构体(inhibitor of ... 详细信息

背景与目的:近年来的研究显示核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的活化能够调节肿瘤细胞的侵袭和转移。本研究探讨抑制NF-κB的活性对A549细胞侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建表达NF-κB抑制物α同分异构体(inhibitor of NF-κB,α isoform,IκBα)的真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/IκBα。体外培养A549细胞,分为未转染组(不转染质粒)、转染pcDNA3.1(+)组、转染pcDNA3.1(+)/IκBα组,分别转染相应的质粒。应用RT-PCR、Westernblot检测各组细胞IκBα的表达情况,应用凝胶电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测各组细胞NF-κB的活性,应用Transwell侵袭小室检测各组细胞的侵袭能力,应用RT-PCR方法检测各组细胞MMP-2、MMP-9的mRNA水平,应用明胶酶谱法检测各组细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的活性。结果:酶切鉴定结果显示pcDNA3.1(+)/IκBα质粒构建成功。RT-PCR和Westernblot检测结果表明构建的pcDNA3.1(+)/IκBα质粒能够在A549细胞中表达IκBα。转染pcDNA3.1(+)/IκBα组A549细胞NF-κΒ活性、侵袭细胞数目、MMP-2活性及MMP-9活性均低于未转染组和转染pcDNA3.1(+)组(P值均0.05)。结论:转染IκBα基因能够抑制A549细胞中NF-κB的活性。NF-κB的活性下降能够抑制A549细胞的侵袭能力,其机制可能与MMP-2、MMP-9表达下调有关。

关键词：肺肿瘤核因子-KB A549细胞侵袭明胶酶A 明胶酶B

慢性间歇低氧大鼠的血压变化及其颈动脉体中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的表达

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中华结核和呼吸杂志 2011年第1期34卷 26-29页

作者：刘辉国吴怀敏徐永健华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科卫生部呼吸疾病重点实验室武汉430030

目的探讨慢性间歇低氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）大鼠的血压变化及其颈动脉体中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶的表达情况,以明确CIH致血压升高的可能机制.方法清洁级雄性SD大鼠30只按随机数字表法分为CI... 详细信息

目的探讨慢性间歇低氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）大鼠的血压变化及其颈动脉体中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶的表达情况,以明确CIH致血压升高的可能机制.方法清洁级雄性SD大鼠30只按随机数字表法分为CIH组、慢性持续缺氧组及对照组.尾袖法测量大鼠尾动脉收缩压,采用RT-PCR法检测大鼠颈动脉体中NADPH氧化酶各亚基gp91 phox、p22phox及p47phox mRNA的表达,对颈动脉体行免疫组织化学染色,并对p22phox的表达情况行半定量分析.结果 CIH组大鼠的尾动脉收缩压为[（145±11）mm Hg,1 mm Hg=0.133kPa],较CIH组（129±9）mm Hg及对照组（124±7）mm Hg显著升高（F值为19.895,P＜0.01）,CIH组gp91phox、p22phox及p47phox mRNA的表达（分别为2.82±0.51、2.74±0.45和2.88±0.47）较慢性持续缺氧组（分别为2.35±0.42、2.25±0.38和2.41±0.43）及对照组（分别为2.23±0.35、2.16±0.30和2.30±0.36）显著升高（F值分别为5.794、6.854和7.163,P＜0.01）免疫组织化学检查结果显示CIH组p22phox蛋白相对表达量（99±12）较其他两组（分别为38±7和34±8）增多.结论 CIH可刺激大鼠颈动脉体中NADPH氧化酶的表达上调并使血压升高,NADPH氧化酶在颈动脉体中的过度表达可能与OSAHS患者发生高血压病存在相关联系.

关键词：间歇缺氧血压 NADPH氧化酶

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的临床识别和简易实验诊断

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中华结核和呼吸杂志 2007年第12期30卷 886-888页

作者：刘辉国徐永健华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科卫生部呼吸疾病重点实验室武汉430030

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）在临床上较为常见，人群患病率较高，成年男性患病率约为2％～4％^[1]。诊断OSAHS主要依赖于多导睡眠图（PSG）监测，PSG不仅可以诊断OSAHS，还可用于判断病情的程度和指导治疗。然而，PSG所需... 详细信息

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）在临床上较为常见，人群患病率较高，成年男性患病率约为2％～4％^[1]。诊断OSAHS主要依赖于多导睡眠图（PSG）监测，PSG不仅可以诊断OSAHS，还可用于判断病情的程度和指导治疗。然而，PSG所需的仪器设备昂贵，且需专门的睡眠监测场所和技术人员，在基层医院不易普及，因此也使OSAHS的诊治受到限制。为此，笔者拟探讨各种可用于诊断OSAHS的方法和技术，并对其临床价值进行评价。

关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征实验诊断临床识别 OSAHS 睡眠监测多导睡眠图指导治疗仪器设备

非小细胞肺癌组织中核因子κB的活性及其与肿瘤细胞增殖的关系

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中华结核和呼吸杂志 2007年第10期30卷 771-775页

作者：张建徐永健张珍祥杜春玲乔礼芬倪望陈士新华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科卫生部呼吸疾病重点实验室武汉430030

目的研究非小细胞肺癌组织中核因子κB(nuclear Factor-κB,NF-κB)的活性及其与细胞增殖、自发性细胞凋亡的关系。方法 2006年5至10月收集30例非小细胞肺癌组织标本及15例肺癌患者癌旁5 cm 肺组织标本。NF-κB活性通过凝胶电泳迁移率... 详细信息

目的研究非小细胞肺癌组织中核因子κB(nuclear Factor-κB,NF-κB)的活性及其与细胞增殖、自发性细胞凋亡的关系。方法 2006年5至10月收集30例非小细胞肺癌组织标本及15例肺癌患者癌旁5 cm 肺组织标本。NF-κB活性通过凝胶电泳迁移率改变试验(EMSA)检测,用 RT-PCR 和 Western blot 方法检测 CyclinD1含量,免疫组织化学染色法检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白含量,TUNEL 法检测细胞凋亡。结果癌旁肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中 NF-κB活性(吸光度,A 值)分别为24 826±3724、28 028±4204、35 425±5317,三组比较差异有统计学意义(F=78.96,P<0.01)。鳞癌组织、腺癌组织中 NF-κB活性高于癌旁肺组织中 NF-κB活性,腺癌组织中 NF-κB活性高于鳞癌组织中 NF-κB活性。健康肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中 CyclinD1 mRNA 表达量分别为2.04±0.24、2.91±0.37、4.13±0.36,三组比较差异有统计学意义(F=62.43,P<0.01)。癌旁肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中 CyclinD1蛋白表达量分别为0.31±0.06、0.43±0.07、0.58±0.08,三组比较差异有统计学意义(F=89.24,P<0.01)。癌旁肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中 PCNA 蛋白表达量分别为0.32±0.09、0.42±0.10、0.54±0.16,三组比较差异明显。癌旁肺组织、鳞癌组织、腺癌组织中凋亡指数分别为(2.58±0.39)%、(2.27±0.34)%、(2.92±0.59)%,三组比较无明显差异。鳞癌组织中NF-κB活性与 CyclinD1 mRNA、CyclinD1蛋白、PCNA 蛋白均呈正相关(r 值分别为0.51、0.54和0.60,P 均<0.05);腺癌组织中 NF-κB活性与 CyclinD1 mRNA、CyclinD1蛋白、PCNA 蛋白均呈正相关(r 值分别为0.60、0.64和0.68,P 均<0.05);鳞癌、腺癌组织中 NF-κB活性与细胞凋亡指数无相关关系。结论在非小细胞肺癌组织中 NF-κB活性增高。非小细胞肺癌组织中 NF-κB的异常活化可能与细胞增殖有关,但不影响自发性细胞凋亡。

关键词： NF—κB 癌,非小细胞肺细胞增殖脱噬作用

钙激活氯离子通道对大鼠肺动脉张力的调节作用

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中国应用生理学杂志 2006年第2期22卷 215-218页

作者：杨朝张珍祥徐永键叶涛李亚清华中科技大学同济医学院附属同济医院卫生部呼吸疾病重点实验室湖北武汉430030

目的:研究钙激活氯离子通道及其通道阻断剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)i、ndaryloxyacetic acid(IAA-94)在苯福林(phenylephrine,PE)引起的肺动脉收缩中的作用。方法:常规离体血管灌流法检测肺动脉环张力;采用钙荧光探针(Fura-2/AM)负... 详细信息

目的:研究钙激活氯离子通道及其通道阻断剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)i、ndaryloxyacetic acid(IAA-94)在苯福林(phenylephrine,PE)引起的肺动脉收缩中的作用。方法:常规离体血管灌流法检测肺动脉环张力;采用钙荧光探针(Fura-2/AM)负载急性酶分离法(胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶)获得的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),观察NFA和IAA-94对PE诱导的PASMCs胞浆游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,用荧光分光光度计法检测[Ca2+]i。结果:钙激活氯离子通道阻断剂NFA和IAA-94可以舒张PE引起的肺动脉环收缩;NFA和IAA-94对KCl引起的血管收缩无影响;PE可以引起[Ca2+]i升高,NFA和IAA-94对PE诱导[Ca2+]i升高无影响。结论:钙激活氯离子通道在生理状态下与血管活性药(PE)引起的肺动脉张力变化有关,这为研究其在低氧肺血管收缩中的作用提供了新的线索。

关键词：钙激活氯离子通道钙阴离子通道阻断剂血管张力低氧肺血管收缩

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清晚期氧化蛋白产物水平与认知功能的相关性研究

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中华结核和呼吸杂志 2013年第4期36卷 274-279页

作者：杨秀红刘雪尚进刘辉国徐永健华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸与危重症医学科卫生部呼吸疾病重点实验室武汉430030

目的观察OSAHS患者认知功能及血清晚期氧化蛋白产物（AOPP）水平的变化，并分析其相关性。方法顺序纳入2011年2-6月武汉同济医院呼吸科就诊的67例OSAHS患者（OSAHS组），其中男49例，女18例，年龄21～67岁，平均（44±9）岁；同期收集2... 详细信息

目的观察OSAHS患者认知功能及血清晚期氧化蛋白产物（AOPP）水平的变化，并分析其相关性。方法顺序纳入2011年2-6月武汉同济医院呼吸科就诊的67例OSAHS患者（OSAHS组），其中男49例，女18例，年龄21～67岁，平均（44±9）岁；同期收集20名健康志愿者（对照组），其中男14名，女6名，两组体重指数及一般情况相匹配；分别进行多导睡眠图（PSG）监测，根据睡眠呼吸暂停指数（AHI）分为轻中重度；应用Epworth嗜睡评分量表（ESS）、简易智能状态量表（MMSE）及画钟试验评估白天嗜睡程度及认知功能，并检测血清氧化应激指标晚期氧化蛋白产物（AOPP）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛的水平。OSAHS组中15例经持续正压通气（CPAP）治疗（治疗组），观察上述指标治疗前后的变化。结果与对照组比较，OSAHS组及治疗组的MMSE、画钟试验评分降低。与重度OSAHS组比较，治疗组MMSE、画钟试验评分升高。OSAHS组MMSE评分中注意力及计算力、记忆（尤其是短时记忆）评分明显降低[分别为（4．73±0．81）一（2．69±1．38）和（2．85±0．61）-（1．92±0．62）]。与对照组比较，OSAHS组及治疗组的血清AOPP和丙二醛水平升高[分别为（78±20）-（117±20）¨moyL和（2．9±1．0）～（6．1±3．0）μmoL／L]，而SOD水平降低[（89±8）-（57±9）U／m1]。与重度OSAHS组比较，治疗组血清AOPP、丙二醛水平降低，SOD水平升高。所有受试者（指OSAHS组及治疗组，不包括对照组，下同）MMSE、画钟试验评分与PSG相关指标（基础SaO：、最低SaO：、AHI、LA／HT、SLTg0％）均分别相关。所有受试者血清AOPP、丙二醛、SOD水平与PSG相关指标（最低Sa02、AHI、LA／HT、SLTg0％）均分别相关，且有统计学意义。血清AOPP、丙二醛、SOD水平与MMSE、画钟试验评分相关，血清AOPP水平与丙二醛、SOD相关，差异有统计学意义。结论OSAHS患者认知功能障碍与病情的严重程度有关，且主要表现为短时记忆能力和计算能力等方面受损；AOPP是反映OSAHS患者体内蛋白氧化损伤的早期敏感指标，且与其认知功能障碍密切相关。

关键词：睡眠呼吸暂停综合征晚期氧化蛋白产物认知功能障碍氧化应激

香烟提取物经级联反应促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖

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中华结核和呼吸杂志 2009年第5期32卷 390-393页

作者：张晓宇徐永健刘先胜张珍祥倪望陈仕新华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸科卫生部呼吸疾病重点实验室武汉430030

吸烟是影响支气管哮喘（简称哮喘）发生、发展的重要危险因素。香烟烟雾能增加卵清白蛋白（OVA）致敏豚鼠气道急性变应性炎症。我们既往的研究结果证实蛋白激酶C（PKC）信号通路在香烟提取物（CSE）促哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）... 详细信息

吸烟是影响支气管哮喘（简称哮喘）发生、发展的重要危险因素。香烟烟雾能增加卵清白蛋白（OVA）致敏豚鼠气道急性变应性炎症。我们既往的研究结果证实蛋白激酶C（PKC）信号通路在香烟提取物（CSE）促哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）的增殖过程中起重要作用。细胞周期蛋白（cyclin）D1是调节细胞周期G1期向S期转变的关键因子，但是目前尚不清楚PKC在参与CSE促哮喘大鼠ASMCs的增殖过程中是否涉及cyclinD1。

关键词：气道平滑肌细胞增殖支气管哮喘香烟提取物大鼠级联反应 cyclinD1 细胞周期蛋白增殖过程

M受体拮抗剂对提高慢性阻塞性肺疾病患者调节性T细胞表达的影响

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中华结核和呼吸杂志 2010年第1期33卷 33-36页

作者：张建初王佩熊先智邓莉辛建保马万里施焕中华中科技大学同济医学院附属协和医院呼吸科卫生部呼吸系疾病重点实验室武汉430022

目的观察COPD稳定期患者体内是否存在CD8^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg细胞），以及M受体拮抗剂噻托溴铵对其表达的影响。方法2007年10月至2008年3月，选择23例COPD稳定期患者，每日1次吸入噻托溴铵18μg，连续治疗3个月。分别... 详细信息

目的观察COPD稳定期患者体内是否存在CD8^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg细胞），以及M受体拮抗剂噻托溴铵对其表达的影响。方法2007年10月至2008年3月，选择23例COPD稳定期患者，每日1次吸入噻托溴铵18μg，连续治疗3个月。分别在治疗前后检查患者的肺功能和检测外周血中T细胞亚群的数量。两组间均数比较采用配对t检验，相关分析采用直线相关分析。结果COPD稳定期患者在吸入噻托溴铵治疗后，外周血中CD4为（36±6）％，CD8^＋CD25^＋Treg细胞为（21±21）％，明显高于治疗前的（28±10）％和（8±8）％；CD4^＋CD25^＋为（4±3）％，明显低于治疗前的（10±7）％，差异均有统计学意义（t值为2．72—3．78，P〈0．01和P〈0．05）。CD8、CD8^＋CD25^＋和CD4^＋CD25^＋Treg细胞均有表达，但治疗前后无明显变化。治疗后肺通气功能得到明显改善，FEV1、FEV1占预计值％和FEV1／FVC分别由（1．0±0．3）L、（35±10）％和（41±8）％提高到（1．1±0．3）L、（40±11）％和（45±11）％，差异均有统计学意义（t值为2．37～2．65，均P〈0．05）。相关分析结果表明，治疗前后CD4^＋和CD25^＋的变化差值与CD8^＋CD25^＋Treg细胞的变化率呈显著负相关（r值分别为-0．61和-0．72，P〈0．05和P〈0．01）。结论M受体拮抗剂噻托溴铵可能具有增强细胞免疫和免疫抑制的功能。CD8^＋CD25^＋Treg和CD4^＋CD25^＋Treg可能成为了解患者免疫状况，判断疗效和疾病免疫分型的一组新指标。

关键词：肺疾病,慢性阻塞性 T淋巴细胞,调节性受体,毒蕈碱