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鲍曼不动杆菌相关耐药机制及新型治疗手段

西南医科大学学报 2025年第1期48卷 97-104页

作者：史欣玥(综述) 张定宇(审校) 华中科技大学同济医学院附属武汉金银潭医院湖北省传染病临床医学研究中心中国医学科学院武汉传染性疾病诊治研究中心中国科学院武汉病毒研究所&武汉市金银潭医院感染性疾病与健康联合实验室武汉430023 华中科技大学同济医学院附属协和医院重症医学科武汉430022

鲍曼不动杆菌在重症监护病房中是一种常见的多重耐药病原体,对危重患者构成显著威胁。面对有限的有效抗生素选择,鲍曼不动杆菌感染治疗面临诸多挑战,导致较高的感染率和死亡率。其耐药性归因于多种机制,包括外排泵作用、靶点突变、抗生... 详细信息

鲍曼不动杆菌在重症监护病房中是一种常见的多重耐药病原体,对危重患者构成显著威胁。面对有限的有效抗生素选择,鲍曼不动杆菌感染治疗面临诸多挑战,导致较高的感染率和死亡率。其耐药性归因于多种机制,包括外排泵作用、靶点突变、抗生素修饰酶的活化、生物膜形成及群体感应系统的调控。随着世界卫生组织将不动杆菌列为优先研发抗生素病原体,开发新抗生素的紧迫性显而易见。本文主要关注当前新型抗生素的开发、非传统抗菌药物的研究、潜在的疫苗以及多模式感染控制策略的推进。这些方法既是预防措施,也是应对抗生素耐药性不断升级挑战的替代治疗手段。

关键词：鲍曼不动杆菌耐药机制多模式感控

鼠巨细胞病毒感染RAW264．7细胞的体外实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第3期28卷 226-231页

作者：罗丹方峰舒赛男刘兴楼田佳王慧李革华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科临床病毒研究室武汉430030

目的体外观察鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus，MCMV）对鼠巨噬细胞株RAW264．7的感染特点及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法分别以感染复数（muniplicity of infection，MOI）为1、0．1、0．01的MCMVSmith株感染RAW细胞，于感染... 详细信息

目的体外观察鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus，MCMV）对鼠巨噬细胞株RAW264．7的感染特点及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法分别以感染复数（muniplicity of infection，MOI）为1、0．1、0．01的MCMVSmith株感染RAW细胞，于感染后6、12、24、36、48、72、96和120h收集细胞和培养上清，光镜下观察细胞病变，透射电镜观察感染细胞内病毒颗粒和细胞超微结构变化；免疫细胞化学检测MCMV早期抗原（early antigen，EA）表达以及蚀斑形成实验监测病毒增殖情况；MTT法和流式细胞术分别评估感染细胞增殖与凋亡的改变，以MCMV敏感的鼠胚胎成纤维细胞为阳性对照。结果MCMV感染后24～48h可见RAW细胞肿胀和脱落，电镜显示RAW胞浆中存在完整的病毒颗粒且细胞器肿胀明显；病毒感染RAW细胞后6h（MOI=1和0．1）～12h（MOI=0．01）可见病毒EA的阳性表达；感染后24h培养上清中病毒滴度即明显上升，至96～120h达高峰；RAW细胞增殖在感染后72～120h受到明显抑制；当MOI=0．1时，感染后72～120h细胞死亡率明显增高，但凋亡率改变不显著。结论巨噬细胞株RAW264．7在体外对MCMV易感，较鼠胚胎成纤维细胞更快形成溶细胞性的产毒性感染；病毒可抑制细胞增殖但不影响细胞凋亡，为深入探讨CMV相关免疫学致病机制提供了一个良好的体外细胞模型。

关键词：巨细胞病毒巨噬细胞产毒性感染

小鼠巨细胞病毒抑制神经干细胞分化及其机制研究

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中华儿科杂志 2006年第7期44卷 505-508页

作者：周玉峰方峰董永绥周华甄宏刘瑾李革华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科临床病毒研究室武汉430030

目的探讨小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSCs)分化的影响及其机制。方法体外分离、培养BABL／c胎鼠NSCs,利用NSCs向神经细胞分化模型,用感染复数(MOI)为1的含Lacz报告基因的重组MCMV毒株RM461进行感染,通过免疫组化、流... 详细信息

目的探讨小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSCs)分化的影响及其机制。方法体外分离、培养BABL／c胎鼠NSCs,利用NSCs向神经细胞分化模型,用感染复数(MOI)为1的含Lacz报告基因的重组MCMV毒株RM461进行感染,通过免疫组化、流式细胞术和RT-PCR检测MCMV感染后Nestin、GFAP和NSE阳性细胞比率及对神经干细胞分化相关信号分子Wnt-1和neurogenin 1(Ngn1)基因表达的影响。结果体外分离培养的NSCs,神经干细胞特异性标志Nestin表达强阳性,并可进一步分化为GFAP阳性的星形胶质细胞和NF-200、NSE阳性的神经元。当NSCs分化培养2 d,感染组和未感染组Nestin阳性细胞分别为(62．2±1．8)％和(37．2±2．4)％(t= 4．62,P<0．01),差异有统计学意义;而GFAP阳性细胞的比例分别为(37．4±1．6)％和(50．3±1．8)％(t=9．89,P<0．01),NSE阳性细胞的比例分别为(8．9±0．8)％和(23．4±1．3)％(t=5．09, P<0．01),差异均有统计学意义。感染组和未感染组Wnt-1基因的相对表达量分别为0．14±0．03和0．32±0．04(t=7．21,P<0．01),Ngn1基因的相对表达量分别为0．09±0．01和0．21±0．02(t= 10．73,P<0．01),差异均有统计学意义。结论(1)CMV可抑制NSCs分化,这可能是CMV致脑发育异常的重要机制;(2)CMV感染可抑制Wnt-1和Ngn-1的基因表达而影响NSCs分化,人为调控这两条通路可能为探寻防治CMV感染致脑发育异常的方法提供新策略。

关键词：巨细胞病毒干细胞细胞分化胞间信号肽类和蛋白质类神经组织蛋白质类转录因子

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小鼠巨细胞病毒感染神经干细胞的体外研究

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第2期26卷 169-173页

作者：周玉峰方峰甄宏付劲蓉易文龙李革董永绥华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科临床病毒研究室武汉430030

目的研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSC)增殖和分化的影响,为研究先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常的机制奠定理论基础。方法体外分离、培养和鉴定BABL/c胎鼠NSC,用含LacZ报告基因的重组小鼠巨细胞病毒RM461感染NSC,... 详细信息

目的研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSC)增殖和分化的影响,为研究先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常的机制奠定理论基础。方法体外分离、培养和鉴定BABL/c胎鼠NSC,用含LacZ报告基因的重组小鼠巨细胞病毒RM461感染NSC,X-gal染色监测感染过程,透射电镜观察超微结构改变,PCR检测受染细胞及培养上清中病毒DNA及观察培养上清接种到小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的细胞病变效应,了解RM461对NSC的感染情况。通过绘制生长曲线、流式细胞术检测分化细胞比率,研究RM461对NSC增殖和分化的影响。结果RM461感染NSC48h后细胞出现肿胀、体积增大、神经球边缘的细胞发生脱落和死亡,细胞形态的改变随感染复数(MOI)的增加而更加明显;X-gal染色,24h受染细胞即可出现阳性改变,48h达高峰;RM461感染72h时,受染细胞及培养上清中病毒DNA呈阳性,培养上清接种到MEF后可出现明显的细胞病变效应,电镜下受染细胞胞浆中存在病毒颗粒,细胞器肿胀明显;RM461可明显抑制NSC的增殖和分化,当MOI为1时,分化培养2d,感染组胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇酶(NSE)阳性细胞的比例分别为(37.4±1.6)%和(8.9±0.8)%,远较未感染组[分别为(50.3±1.8)%和(23.4±1.3)%]低(P病毒感染致脑发育异常有关。

关键词：巨细胞病毒神经干细胞脑发育异常先天性感染

大蒜新素治疗小鼠巨细胞病毒性心肌炎作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第6期25卷 476-480页

作者：徐翼方峰董永绥向稚丹甄宏易文龙李革华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科临床病毒研究室武汉430030

目的探讨大蒜新素对小鼠巨细胞病毒(MCMV)性心肌炎治疗作用及其抗CMV机制。方法60只BALB/c小鼠随机分成大蒜新素治疗组(20只)、安慰剂组(20只)和正常对照组(20只)。大蒜新素治疗组接种MCMVK181后24h开始用大蒜新素一般剂量(25mg/kg)腹... 详细信息

目的探讨大蒜新素对小鼠巨细胞病毒(MCMV)性心肌炎治疗作用及其抗CMV机制。方法60只BALB/c小鼠随机分成大蒜新素治疗组(20只)、安慰剂组(20只)和正常对照组(20只)。大蒜新素治疗组接种MCMVK181后24h开始用大蒜新素一般剂量(25mg/kg)腹腔注射,每天1次,共14d;安慰剂组和正常对照组仅用等量生理盐水。各组分别于治疗后第3、5、7、14天各处死5只小鼠,观察小鼠心肌组织病理损害;用双抗体夹心ELISA法检测小鼠心肌组织细胞因子IFNγ表达水平;用RTPCR方法检测小鼠脾核转录因子TbetmRNA表达强度。结果MCMV感染下调小鼠TbetmRNA和TH1类细胞因子IFNγ的表达(P<0.01);大蒜新素能诱导MCMV性心肌炎模型小鼠转录因子TbetmRNA和细胞因子IFNγ的表达显著增加(P<0.01),并显著改善MCMV感染小鼠心肌组织病理损害(P<0.05)。结论大蒜新素通过上调转录因子TbetmRNA表达进而促进TH1类细胞因子IFNγ分泌,诱导和促进TH1优势应答反应,增强机体特异性细胞免疫功能而发挥抗MCMV作用。

关键词：病毒性心肌炎作用研究 TH1类细胞因子素治疗 IFN-γ T-bet BALB/c小鼠 ELISA法检测 RT-PCR方法 mRNA表达小鼠巨细胞病毒大蒜新素 CMV感染组织细胞因子细胞免疫功能 MCMV 病理损害心肌组织正常对照组双抗体夹心

大蒜新素对MCMV感染小鼠转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第12期24卷 950-954页

作者：徐翼方峰董永绥向稚丹甄宏李革华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科临床病毒研究室武汉430030

目的探讨大蒜新素(即大蒜素注射液)对鼠巨细胞病毒(murinecytomegalovirus,MCMV)感染小鼠脾转录因子Tbet和GATA3基因表达的影响。方法20只BALBc小鼠被随机分成大蒜新素治疗组(10只)和安慰剂组(10只)。均在MCMVSmith株接种24h后分别用大... 详细信息

目的探讨大蒜新素(即大蒜素注射液)对鼠巨细胞病毒(murinecytomegalovirus,MCMV)感染小鼠脾转录因子Tbet和GATA3基因表达的影响。方法20只BALBc小鼠被随机分成大蒜新素治疗组(10只)和安慰剂组(10只)。均在MCMVSmith株接种24h后分别用大蒜新素一般剂量(每天25mgkg)和等量生理盐水腹腔注射,每天1次,连续2周。另设正常对照组(10只)不接种病毒,仅用等量生理盐水治疗。用PFUml测定小鼠脾组织病毒滴度;用RTPCR方法检测小鼠脾转录因子TbetGATA3mRNA表达强度;用双抗体夹心ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清细胞因子IFNγ和IL10表达水平。结果MCMV感染小鼠14d,TbetmRNA和IFNγ的表达基本下降至基线水平,而GATA3mRNA和IL10的表达显著增强;大蒜新素能诱导MCMV感染模型鼠转录因子TbetmRNA和IFNγ的表达显著增加(P病毒滴度(P<0.01)。结论MCMV感染可导致TH1TH2类细胞因子表达失衡,主要表现为IFNγ表达明显降低和IL10表达明显增高;大蒜新素通过上调转录因子TbetmRNA的表达促进IFNγ的分泌,并下调转录因子GATA3mRNA的表达抑制IL10的分泌。

关键词：大蒜新素 GATA-3 T-bet 小鼠转录因子 IL-10 基因表达 RNA 分泌表达水平

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞抑制效应性T细胞在MCMV感染中的免疫作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第3期28卷 234-238页

作者：李亚男方峰甄宏舒赛男周玉峰董永绥华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科临床病毒研究室武汉430030

目的通过细胞水平探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）在T淋巴细胞与感染小鼠巨细胞病毒（MCMV）的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）共培养体系中发挥的免疫作用。方法建立小鼠T细胞与感染MCMV的同系MEF（MEFMCMV）体外共培养细胞模型。通... 详细信息

目的通过细胞水平探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）在T淋巴细胞与感染小鼠巨细胞病毒（MCMV）的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）共培养体系中发挥的免疫作用。方法建立小鼠T细胞与感染MCMV的同系MEF（MEFMCMV）体外共培养细胞模型。通过噬斑法检测共培养上清中感染性病毒量；Western blot方法检测辅助性T细胞亚群TH1／TH2特异性转录因子T-bet／GATA-3蛋白表达水平；ELISA法检测共培养上清中细胞因子IL4、IL-10和IFN-γ表达水平。结果去除Treg的T细胞（TdepTreg）与MEFMCMV共培养3d后可显著减少上清中的感染性病毒量；同时TH1／TH2上游特异性转录因子T-bet／GATA-3和下游细胞因子IL4、IL-10和IFN-γ的蛋白质表达水平显著升高。向共培养体系中添加Treg后病毒负荷量显著增加；T-bet／GATA-3和IFN-γ蛋白表达水平下降；IL-10蛋白表达水平在Treg比率为1％～2％时与TdepTreg组比较无显著差异，在Treg比率增至5％～20％时较TdepTreg组显著增加；而IL-4表达水平与TdepTreg组比较无显著差异，上述效应均与Treg添加比率成剂量相关性。结论巨细胞病毒感染小鼠成纤维细胞后能激活效应性T细胞增殖活化，而Treg可抑制效应性T细胞在MCMV感染中的免疫保护作用。

关键词：巨细胞病毒调节性T细胞效应细胞 T—bet GATA-3

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从病毒分类学认识儿科的常见致病病毒

中华儿科杂志 2004年第1期42卷 7-9页

作者：董永绥方峰华中科技大学同济医学院同济医院儿科临床病毒研究室武汉430030

国际病毒分类学委员会 (International Committee on Taxonomy of Viruses, ICTV)是一个国际性组织,每隔若干年对世界上所发现的各种病毒,根据其本质和特性、尤其是分子生物学资料,对原有分类进行不断修改和完善, 并对新发现的病毒予以... 详细信息

国际病毒分类学委员会 (International Committee on Taxonomy of Viruses, ICTV)是一个国际性组织,每隔若干年对世界上所发现的各种病毒,根据其本质和特性、尤其是分子生物学资料,对原有分类进行不断修改和完善, 并对新发现的病毒予以命名, 重新提出分类报告.ICTV于2000年发表了第七次报告[1],将在1970～1999年,被其认可的所有门类(taxa)和病毒株重新进行分类.此次报告将所有病毒分成3目(order)、56科(family)、9亚科(subfamily)、233属(genus)和1550种(species).与1995年发表的第六次报告[2]相似,仍将病毒分成三目:第一目为DNA病毒,包括双链DNA病毒和单链DNA病毒; 第二目为DNA和RNA逆转录病毒 (包括HBV等嗜肝DNA病毒科和HIV等逆转录病毒科); 第三目为RNA病毒,包括双链RNA病毒、单负链RNA病毒和单正链RNA病毒.然而, 两次分类报告比较, 病毒的总科数则从上次的50科增加到56科; 此外, 此次报告还就某些科以下的病毒属和病毒种的归类作了一些修改.查阅此次报告, 发现其中有一些儿科常见致病病毒在分类和命名上进行了更改,增加了一些新的致病病毒, 兹结合新近文献,进行概要介绍.

关键词：病毒分类学儿科 ICTV 分子生物学肠道病毒分子病毒学

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小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型的建立

中华心血管病杂志 2005年第4期33卷 360-363页

作者：徐翼方峰向稚丹甄宏李革华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科临床病毒室武汉430030

目的用小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus, MCMV)K181株建立BALB/c小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型.方法 25只健康纯系5周龄BALB/c小鼠腹腔接种MCMV K181病毒悬液(1×104PFU/只),观察小鼠血清cTnI浓度变化和心肌组织MCMV病毒滴度及病... 详细信息

目的用小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus, MCMV)K181株建立BALB/c小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型.方法 25只健康纯系5周龄BALB/c小鼠腹腔接种MCMV K181病毒悬液(1×104PFU/只),观察小鼠血清cTnI浓度变化和心肌组织MCMV病毒滴度及病理改变.结果小鼠腹腔接种病毒悬液后第3天即可在心肌组织中检测到低滴度MCMV,第5～7天达高峰,随后迅速下降,第10天时已不能检测到MCMV;小鼠心肌组织病理改变出现在MCMV感染后第3天,7～10天达高峰,随后逐渐减轻,病变可持续到病毒感染后3～4个月;血清cTnI水平在MCMV感染后第3天即有升高,7～10天达高峰,14天仍维持较高水平.结论成功建立小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型,可为巨细胞病毒性心肌炎的治疗、药物筛选、疾病发病机制以及疾病预后评估提供一个良好研究平台.

关键词：病毒性心肌炎模型 BALB/c小鼠小鼠巨细胞病毒 MCMV 组织病理改变小鼠腹腔心肌组织 cTnⅠ 病毒感染后病发病机制病毒滴度浓度变化小鼠血清小鼠心肌药物筛选研究平台预后评估低滴度高峰高水平悬液接种