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抑癌基因PTEN真核表达质粒的构建及对乳腺癌MDA468细胞的影响

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中华肿瘤杂志 2005年第4期27卷 216-219页

作者：陈庆永陈道达王春友周友生华中科技大学同济医学院附属协和医院急诊外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022

目的　研究外源性PTEN基因稳定转染对人乳腺癌MDA4 6 8细胞体外生长的影响。方法　先构建PTEN基因的真核表达质粒pcDNA3.1 - PTEN ,应用重组质粒pcDNA3.1 - PTEN和pcDNA3.1(- )空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人乳腺癌细胞株MD... 详细信息

目的　研究外源性PTEN基因稳定转染对人乳腺癌MDA4 6 8细胞体外生长的影响。方法　先构建PTEN基因的真核表达质粒pcDNA3.1 - PTEN ,应用重组质粒pcDNA3.1 - PTEN和pcDNA3.1(- )空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人乳腺癌细胞株MDA4 6 8,以未转染组为对照。应用RT PCR、免疫组化和免疫印迹方法分析目的基因及其蛋白表达,MTT法分析细胞生长抑制作用,AnnexinV FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果　稳定转染PTEN基因的细胞株有外源目的基因的整合和相应mRNA及其蛋白的高表达。MTT检测表明,pcDNA3.1 - PTEN转染组活细胞数低于未转染组和pcDNA3.1 - MDA4 6 8细胞转染组。流式细胞术显示,pcDNA3.1 - PTEN转染组凋亡率高于未转染组和pcDNA3.1 -MDA4 6 8细胞转染组。结论　外源性PTEN基因稳定转染可抑制人乳腺癌细胞的恶性表型。

关键词：真核表达质粒抑癌基因PTEN 外源性PTEN基因 pcDNA3 人乳腺癌细胞株 Annexin 流式细胞术检测细胞体外生长稳定转染脂质体转染法 RT-PCR 生长抑制作用目的基因细胞转染 MTT检测载体质粒重组质粒体外培养蛋白表达

腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统体内外旁观者效应的观察

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中华外科杂志 2002年第4期40卷 301-303页

作者：高国栋黄韬陈思远华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科

目的　观察腺病毒介导的HSV tk/GCV自杀基因系统的体外、体内接触及体内远端旁观者效应。　方法　采用向体外培养的tk阴性人肝癌BEL 74 0 2细胞中加入不同比例tk阳性同种细胞 ;向荷tk阴性BEL 74 0 2瘤小鼠瘤体内注射不同数量tk阳性同种... 详细信息

目的　观察腺病毒介导的HSV tk/GCV自杀基因系统的体外、体内接触及体内远端旁观者效应。　方法　采用向体外培养的tk阴性人肝癌BEL 74 0 2细胞中加入不同比例tk阳性同种细胞 ;向荷tk阴性BEL 74 0 2瘤小鼠瘤体内注射不同数量tk阳性同种细胞 ;向双侧荷瘤小鼠一侧瘤体内注射重组腺病毒 ,GCV作用后用不同方法来观察不同情况下的旁观者效应。　结果　体外组中观察到明显旁观者效应 ,当tk阳性细胞占 10 %时 ,混合细胞存活率为 36 6 % ;体内接触组中也观察到旁观者效应 ,实验组瘤体生长明显受到抑制 (P 0 0 5 )。结论　腺病毒介导的HSV

关键词：基因疗法胸腺嘧啶核苷酸类自杀基因旁观者效应

短发夹状RNA抑制SMYD3基因在HepG2细胞中的表达

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中华肝脏病杂志 2006年第2期14卷 105-108页

作者：徐鋆耀陈立波徐鋆阳杨镇魏海燕许荣华华中科技大学同济医学院附属同济医院综合外科武汉430030 华中科技大学附属协和医院普外科华中科技大学附属协和医院神经内科

目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA (shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间... 详细信息

目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA (shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间的核苷酸片断,并定向克隆到仅表达EGFP的空载体pGenesil-1的U6启动子下,构建重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2；不针对任何序列的重组质粒pGenesil-1-hk作为对照。通过脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,应用逆转录聚合酶链反应,western blot蛋白免疫印迹法分别从mRNA、蛋白水平检测阻抑效应。结果酶切鉴定和测序结果证实了pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2、pGenesil-1-hk的成功构建,转染HepG2细胞后,pGenesil-1- s1、pGenesil-1-s2组SMYD3 mRNA和蛋白表达均明显下调,与pGenesil-1-hk组及pGenesil-1对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论构建的重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2能特异性抑制SMYD3 在HepG2细胞中的表达。

关键词： RNA 癌肝细胞

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新生儿脐血Toll样受体变化及其意义

中华儿科杂志 2007年第5期45卷 365-368页

作者：王琳徐建波田元刘亚兰吴河水华中科技大学同济医学院附属协和医院儿科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022

目的观察新生儿脐血单个核细胞(MNC)TLR4、TLR2 mRNA 的表达。方法将46例无窒息新生儿及40例窒息新生儿根据胎龄分组,分离脐血 MNC,测定其 TLR4/2 mRNA 表达及上清中 TNF-α水平。另外将 TLR4/2 mRNA 表达水平与 TNF-α水平进行相关分... 详细信息

目的观察新生儿脐血单个核细胞(MNC)TLR4、TLR2 mRNA 的表达。方法将46例无窒息新生儿及40例窒息新生儿根据胎龄分组,分离脐血 MNC,测定其 TLR4/2 mRNA 表达及上清中 TNF-α水平。另外将 TLR4/2 mRNA 表达水平与 TNF-α水平进行相关分析。结果无窒息新生儿中足月儿TLR4/2 mRNA 及 TNF-α水平分别为0.75±0.12、0.63±0.08、2502.6±273.1 ng/L,胎龄≥32周但<37周早产儿分别为0.37±0.04、0.32±0.03、1218.8±145.7 ng/L,胎龄<32周早产儿分别为0.26±0.03、0.20±O.03、811.8±105.2 ng/L;窒息新生儿中足月儿 TLR4/2 mRNA 及 TNF-α水平分别为0.58±0.07、0.50±0.06、1946.4±244.2 ng/L,胎龄≥32周但<37周早产儿分别为0.29±0.03、0.26 0.03、970.0±94.3 ng/L,胎龄<32周早产儿分别为0.17±0.02、0.14±0.02、652.6±60.3 ng/L;成人 TLR4/2 mRNA 及 TNF-α水平分别为2.71±0.75、2.61±0.33、9270.1±1098.3 ng/L。早产儿、足月儿 TLR4/2 mRNA 及 TNF-α水平均低于成人,胎龄越低,TLR4/2 mRNA 及 TNF-α水平越低。窒息新生儿 TLR4/2 mRNA 及 TNF-α的表达水平均低于同胎龄无窒息新生儿(P<0.01)。TLR4/2 mRNA 表达水平与 TNF-α水平呈正相关关系。结论新生儿,特别是早产儿,TLR 水平低下,可能是新生儿天然免疫能力低下,容易患败血症等严重感染性疾病的重要原因之一。

关键词：婴儿新生受体细胞表面膜糖蛋白类肿瘤坏死因子

煅烧牛松质骨的制备、理化性能及生物相容性研究

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生物医学工程学杂志 2005年第1期22卷 95-98页

作者：郑启新刘苏南华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院急诊外科武汉430022

探索一种新的植骨材料— β-磷酸三钙 (β- TCP)型煅烧牛松质骨的制备方法 ,研究其孔径、孔隙率、材料的成分、抗压和抗折强度等理化性能 ,并通过溶血试验、微核试验、全身急性毒性试验、局部刺激试验、热源检测试验、体内植入试验等研... 详细信息

探索一种新的植骨材料— β-磷酸三钙 (β- TCP)型煅烧牛松质骨的制备方法 ,研究其孔径、孔隙率、材料的成分、抗压和抗折强度等理化性能 ,并通过溶血试验、微核试验、全身急性毒性试验、局部刺激试验、热源检测试验、体内植入试验等研究表明 ,β- TCP型煅烧牛松质骨具有一定的强度 ,合适的孔径 ,微孔互相连通 ,有可靠的生物安全性 ,可作为植骨材料 ,用于临床。

关键词：煅烧技术牛松质骨制备工艺理化性能生物相容性植骨材料

N-乙酰半胱氨酸对新生小鼠肝细胞内毒素损伤的保护作用

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中华儿科杂志 2007年第1期45卷 30-33页

作者：王琳徐建波田元吴河水刘亚兰华中科技大学同济医学院附属协和医院儿科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022

目的探讨 N-乙酰半胱氨酸对新生小鼠肝细胞内毒素损伤时的保护作用,为新生小鼠内毒素肝损伤的防治研究提供理论依据。方法采用胶原酶消化组织块法分离新生小鼠的肝细胞,将细胞分内毒素处理组(LPS 组)及 N-乙酰半胱氨酸预处理组(NAC 组)... 详细信息

目的探讨 N-乙酰半胱氨酸对新生小鼠肝细胞内毒素损伤时的保护作用,为新生小鼠内毒素肝损伤的防治研究提供理论依据。方法采用胶原酶消化组织块法分离新生小鼠的肝细胞,将细胞分内毒素处理组(LPS 组)及 N-乙酰半胱氨酸预处理组(NAC 组)。LPS 组培养基中加入 LPS10μg/ml;NAC 组先在培养基中加入 N-乙酰半胱氨酸5 mmol/L,孵育1 h 后再加入 LPS 10μg/ml。分别于加入 LPS 0、6和12 h 收集各组肝细胞上清和肝细胞,每组12例,以生化法检测培养上清的丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferasc,ALT)和一氧化氮(nitric oxide,NO)的水平,并以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞诱导型一氧化氮合成酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)mRNA 的表达。结果 LPS 组在0、6、12 h 的 ALT 值分别为(21.1±4.78)U/L、(59.8±8.59)U/L、(89.6±15.30)U/L,NO 水平分别为(1.6±0.31)μmol/L、(6.6±0.81)μmol/L、(7.8±1.01)μmol/L,iNOS mRNA 水平分别为0.17±0.023、0.71±0.091、0.71±0.097。LPS 组的 ALT 和 NO、iNOSmRNA 水平在6、12 h较0 h 明显升高,差异有极显著统计学意义(P<0.01);NAC 组上清中 ALT 和NO 水平在0、6、12 h 分别为(20.6±5.98)U/L、(40.8±7.30)U/L、(55.4±5.48)U/L 和(1.7±0.26)μmol/L、(3.2±0.71)μmol/L、(4.0±0.71)μmol/L,肝细胞 iNOSmRNA 的表达水平在0、6、12h 分别为0.18±0.026、0.41±0.060、0.40±0.067。经 NAC 预处理后,在6、12 h 上清中 ALT 的水平与 LPS 组比较明显降低,而且 NO 水平以及肝细胞 iNOS mRNA 的表达与 LPS 组比较也明显降低,差异均有极显著统计学意义(P<0.01)。结论 NAC 对新生小鼠肝细胞内毒素损伤有保护作用,NAC可能通过抑制 LPS 激活 iNOS 而发挥保护作用。

关键词： N-乙酰半胱氨酸内毒素肝细胞一氧化氮诱导型一氧化氮合成酶

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青少年鼻咽癌治疗现状

中华放射医学与防护杂志 2021年第5期41卷 390-395页

作者：廖芷芸吴边杨坤禹华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心武汉430022

鼻咽癌(NPC)是一种起源于鼻咽部上皮细胞的恶性肿瘤,是青少年人群头颈部最常见的恶性肿瘤之一。青少年鼻咽癌的治疗通常参照成人治疗指南,但是青少年鼻咽癌有其自身的临床特点。对于处于发育阶段的青少年患者来说,治疗的晚期不良反应也... 详细信息

鼻咽癌(NPC)是一种起源于鼻咽部上皮细胞的恶性肿瘤,是青少年人群头颈部最常见的恶性肿瘤之一。青少年鼻咽癌的治疗通常参照成人治疗指南,但是青少年鼻咽癌有其自身的临床特点。对于处于发育阶段的青少年患者来说,治疗的晚期不良反应也不可忽视。寻找适合青少年的治疗方案具有重要意义。本文对青少年鼻咽癌的流行病学、临床特点、治疗现状和有前景的降低治疗强度的策略作一论述,旨在为今后的治疗研究提供思路。

关键词：青少年鼻咽癌诱导化疗放射治疗免疫治疗

抗血管生成小分子酪氨酸激酶抑制剂在软组织肉瘤中的应用现状及展望

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中华医学杂志 2022年第31期102卷 2405-2410页

作者：范丽叶挺陈静华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心武汉430022

晚期软组织肉瘤患者的系统性治疗以化疗为主,免疫治疗仅对部分亚型有效,以培唑帕尼和安罗替尼为代表的抗血管生成小分子酪氨酸激酶抑制剂作为靶向治疗的主要药物,已被国内外指南明确推荐为非特指型软组织肉瘤的二线治疗。近年来这类药... 详细信息

晚期软组织肉瘤患者的系统性治疗以化疗为主,免疫治疗仅对部分亚型有效,以培唑帕尼和安罗替尼为代表的抗血管生成小分子酪氨酸激酶抑制剂作为靶向治疗的主要药物,已被国内外指南明确推荐为非特指型软组织肉瘤的二线治疗。近年来这类药物除了用于晚期二线单药治疗,其在二线联合治疗、维持治疗、一线治疗和新辅助治疗等方面也陆续开展了相关研究。本文现就抗血管生成小分子酪氨酸激酶抑制剂在软组织肉瘤中的应用现状及展望做简要述评。

关键词：软组织肿瘤软组织肉瘤小分子酪氨酸激酶抑制剂抗血管生成靶向治疗联合治疗

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液氮冻存瘤块构建VX2肝癌模型效果研究

介入放射学杂志 2019年第2期28卷 151-155页

作者：余文仙郭小朋何晓俊熊宇郑传胜华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院介入科武汉430022

目的观察液氮冻存的活性良好VX2兔肝癌瘤块复苏后构建兔肝癌模型的效果,并与常规方法构建兔肝癌模型作比较。方法选取生长状态良好的VX2瘤块,剔除坏死组织并用锡箔纸包裹,液氮冻存3个月。20只日本大耳白兔随机分为两组,A组(对照组,n=10... 详细信息

目的观察液氮冻存的活性良好VX2兔肝癌瘤块复苏后构建兔肝癌模型的效果,并与常规方法构建兔肝癌模型作比较。方法选取生长状态良好的VX2瘤块,剔除坏死组织并用锡箔纸包裹,液氮冻存3个月。20只日本大耳白兔随机分为两组,A组(对照组,n=10)予新鲜瘤块肝脏原位种植法构建兔肝癌模型,B组(实验组,n=10)予新鲜瘤块液氮冻存3个月复苏后肝脏原位种植法构建兔肝癌模型。2周后作增强CT扫描和DSA血管造影观察成瘤效果及瘤体血供情况。荷瘤兔处死后观察大体标本并作苏木精-伊红(HE)染色、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和CD31免疫荧光染色,后者用于计算微血管密度(MVD)。结果 A组和B组建模成功率均为100%。两组肿瘤生长、VEGF和MVD表达均无明显差异。结论液氮冻存瘤块构建的兔VX2肝癌模型CT、DSA影像学表现及组织学特征与常规方法无显著差异,瘤块整体冻存法可较好地保存瘤株活性,从而节省人力物力。

关键词：肝癌动物模型 VX2肿瘤