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慢性复合应激增强大鼠海马Doublecortin的表达

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解剖学报 2007年第1期38卷 18-22页

作者：周艳玲刘能保张敏海李晓恒陈鸿伟洪小平孙臣友华中科技大学同济医学院解剖学系组织学与胚胎学教研室

目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义。方法成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周... 详细信息

目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义。方法成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周。实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩。运用免疫细胞化学方法观察海马DG新生神经元数量的变化,同时运用Westernblotting和RT-PCR技术分别检测DCX在海马的表达及其mRNA水平的变化。结果与对照组相比,复合应激组动物的学习与记忆成绩优于对照组(P学习与记忆能力增强,海马DG内DCX阳性细胞数增多,提示新生神经元数量增加是导致大鼠学习记忆能力增强的原因之一。

关键词：慢性复合应激学习与记忆海马 Doublecortin 免疫细胞化学免疫印迹 RT-PCR 大鼠

慢性复合应激对学习记忆的影响及cAMP/PKA-CREB信号通路的作用

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解剖学报 2006年第6期37卷 611-616页

作者：刘能保洪小平李晓恒张敏海孙臣友华中科技大学同济医学院解剖学系组织学胚胎学教研室武汉430030

目的探讨慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和cAMP/PKA-CREB信号系统在此机制中的作用。方法将成年雄性Wistar大鼠分为对照组:不作任何处理;慢性单一应激组:每天捆绑6 h,持续6周;慢性复合应激组:每天随机暴露于4种应激原中,持续6周。... 详细信息

目的探讨慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和cAMP/PKA-CREB信号系统在此机制中的作用。方法将成年雄性Wistar大鼠分为对照组:不作任何处理;慢性单一应激组:每天捆绑6 h,持续6周;慢性复合应激组:每天随机暴露于4种应激原中,持续6周。应激结束后,用Morris水迷宫(MWM)测试大鼠空间学习与记忆成绩;免疫组织化学方法观察大鼠海马PKA-Cβ和磷酸化的CREB的表达水平;应用RT-PCR法半定量检测海马组织内BDNF和Bcl-2的mRNAs水平。结果应激后在MWM寻找平台潜伏期,与对照组(18.9±13.0)s相比,慢性复合应激组(14.2±5.8)s明显缩短(P0.05);慢性复合应激组大鼠海马CA1和CA3区PKA-Cβ的表达以及CA1区和齿状回pCREB的表达明显上调(P0.05)。BDNF和Bcl-2mRNAs的表达水平3组间差别无显著性(P>0.05)。结论慢性复合应激可增强海马依赖的学习与记忆功能,多元的环境刺激可能是其增强的主要原因。PKA-CREB信号通路在其影响机制中发挥了一定的作用。

关键词：慢性复合应激学习与记忆蛋白激酶A-Cβ亚基 cAMP反应元件结合蛋白海马免疫组织化学 RT-PCR 大鼠

连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及相互关系研究

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解剖学报 2006年第4期37卷 412-416页

作者：吕世军李和华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学系

目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Wes... 详细信息

目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western blotting,双标记免疫荧光和免疫沉淀分析HeLa细胞Cx36和ZO-1表达及关系。结果构建了重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的HeLa细胞获得稳定表达Cx36的克隆,Western blotting显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白。双标记免疫荧光染色显示,HeLa细胞膜之间Cx36呈点状或线状表达,在Cx36表达部位也同样表达ZO-1。免疫沉淀显示细胞裂解液分别与抗ZO-1或抗Cx36抗体共沉淀,抗Cx36或抗ZO-1抗体进行免疫检测,前者在36kD有特异性Cx36蛋白带,后者在220kD处有ZO-1蛋白带。结论转染Cx36的HeLa细胞表达Cx36和ZO-1,两者共表达并且相互结合。

关键词：连接蛋白36(Cx36) 闭锁小带蛋白1(ZO-1) HeLa细胞 RT-PCR Westem blotting 双标记免疫荧光免疫沉淀

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一种应用振荡切片显示神经元的Cox染色法

解剖学报 2008年第5期39卷 779-781页

作者：汪薇曦杨世明叶翠芳李宏莲李和华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室武汉430030

目的探索一种快捷、简便的大脑锥体细胞和小脑普肯耶细胞的染色方法。方法取猫、家兔、大鼠和豚鼠的大脑和小脑组织,升汞-重铬酸钾-铬酸钾固定液固定、浸染后,部分组织按传统的Cox法制片,即固定后进行火棉胶包埋、滑式切片机切片;部分... 详细信息

目的探索一种快捷、简便的大脑锥体细胞和小脑普肯耶细胞的染色方法。方法取猫、家兔、大鼠和豚鼠的大脑和小脑组织,升汞-重铬酸钾-铬酸钾固定液固定、浸染后,部分组织按传统的Cox法制片,即固定后进行火棉胶包埋、滑式切片机切片;部分组织用改良法制片,即组织不经包埋而直接进行振荡切片。结果与传统Cox法相比,应用振荡切片的Cox法减少了操作程序,大大缩短了制片时间,神经元染色均匀,神经元突起更为完整,小突起细节显示更为满意,且背景浅淡,非特异性沉淀颗粒极少。结论应用振荡切片的Cox改良法快捷、简便,神经元染色效果明显优于传统Cox法。

关键词：神经元改良振荡切片 Cox染色法猫兔大鼠豚鼠

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慢性复合应激增强大鼠空间学习和记忆能力

生理学报 2004年第5期56卷 615-619页

作者：刘能保李辉刘向前孙臣友陈少容张敏海刘少纯汪薇曦华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室武汉430030

本文观察了慢性复合应激对大鼠学习与记忆功能的影响。实验采用成年 Wistar 大鼠, 将其随机分成应激组和对照组。采用垂直旋转、睡眠剥夺、噪音刺激和夜间光照4 种应激原, 无规律地交替刺激动物 6 周, 每天6 h, 制作慢性复合应激动物模... 详细信息

本文观察了慢性复合应激对大鼠学习与记忆功能的影响。实验采用成年 Wistar 大鼠, 将其随机分成应激组和对照组。采用垂直旋转、睡眠剥夺、噪音刺激和夜间光照4 种应激原, 无规律地交替刺激动物 6 周, 每天6 h, 制作慢性复合应激动物模型。采用 Morris 水迷宫和 Y- 迷宫测试大鼠学习与记忆成绩,并用 Cresyl violet 染色法对大鼠海马结构进行神经细胞计数。结果显示,应激组动物慢性复合应激后, 在 Morris 水迷宫内寻找隐蔽平台所需的时间(潜伏期)比对照组的明显地短(P学习能力明显强于对照鼠; 应激鼠慢性复合应激后, 其海马结构齿状回、CA3 和CA1 区神经细胞密度极明显地高于对照鼠(P学习能力。本文并对慢性复合应激模式增强大鼠学习和记忆能力的可能原因进行了讨论。

关键词：慢性复合应激学习与记忆 Morris水迷宫 Y-迷宫海马

正丁醇替代无水乙醇和二甲苯在制作大鼠全胚切片中的应用

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解剖学报 2012年第6期43卷 864-867页

作者：杨世明李和华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室武汉430030

目的探索一种以正丁醇替代无水乙醇和二甲苯制作不同胎龄大鼠全胚切片的简便方法。方法收集胚龄14d(E14)、E16、E18、E20大鼠胚胎,固定及低浓度乙醇脱水后,部分标本按传统方法用无水乙醇脱水和二甲苯透明(无水乙醇-二甲苯法),另一部分... 详细信息

目的探索一种以正丁醇替代无水乙醇和二甲苯制作不同胎龄大鼠全胚切片的简便方法。方法收集胚龄14d(E14)、E16、E18、E20大鼠胚胎,固定及低浓度乙醇脱水后,部分标本按传统方法用无水乙醇脱水和二甲苯透明(无水乙醇-二甲苯法),另一部分标本用正丁醇脱水、透明(正丁醇法)。所有标本进行石蜡包埋、切片、HE染色。对两种方法从蜡块质量和切片质量等方面进行比较和评价。结果正丁醇法大大简化了操作步骤,标本处理时间容易控制,包埋块的切割性能及对肝脏组织的保存优于无水乙醇-二甲苯制片法。结论正丁醇法步骤简单且制片安全可靠,可替代无水乙醇-二甲苯法制作大鼠全胚切片。

关键词：全胚切片正丁醇无水乙醇二甲苯苏木素-伊红染色大鼠

利用醛复红染色法制作家兔皮下疏松结缔组织铺片标本

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解剖学报 2014年第3期45卷 421-423页

作者：杨世明华中科技大学同济医学院解剖学系组织学胚胎学教研室武汉430030

目的：探讨适用于家兔皮下疏松结缔组织铺片标本的制片方法。方法家兔3只，分别经腹腔注射10g/L锥虫蓝生理盐水溶液10-12ml。每天1次，连续注射3d后，于第4天取皮下疏松结缔组织进行铺片。待铺片晾干后，用福尔马林-酒精固定液固定约6h... 详细信息

目的：探讨适用于家兔皮下疏松结缔组织铺片标本的制片方法。方法家兔3只，分别经腹腔注射10g/L锥虫蓝生理盐水溶液10-12ml。每天1次，连续注射3d后，于第4天取皮下疏松结缔组织进行铺片。待铺片晾干后，用福尔马林-酒精固定液固定约6h。然后，分别入醛复红、核固红和伊红染色液进行染色。每步之间用自来水冲洗。最后，常规脱水、透明、封片。结果巨噬细胞呈不规则形，分布在纤维中间，胞质中可见粗大的锥虫蓝颗粒。细胞核呈红色。醛复红染色30-40min时，弹性纤维呈紫色或蓝紫色，胶原纤维呈浅红色。结论该法操作步骤简单，结果稳定可靠，是制作家兔皮下疏松结缔组织铺片标本适宜的方法。

关键词：疏松结缔组织伊红弹性纤维胶原纤维巨噬细胞醛复红染色家兔

大鼠脊髓后角内5型代谢型谷氨酸受体与C纤维的关系——免疫组织化学及电镜研究

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解剖学报 2003年第3期34卷 261-264页

作者：王小丽李宏莲张亦农李和华中科技大学同济医学院解剖学系组织学与胚胎学教研室武汉430030

目的　揭示大鼠脊髓后角内 5型代谢型谷氨酸受体 (mGluR5 )与一级传入C纤维的关系。　方法　在大鼠单侧足底注射福尔马林作为疼痛刺激 ,应用免疫组织化学技术光镜下观察疼痛对脊髓后角内mGluR5的影响 ;在大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素 ,以毁... 详细信息

目的　揭示大鼠脊髓后角内 5型代谢型谷氨酸受体 (mGluR5 )与一级传入C纤维的关系。　方法　在大鼠单侧足底注射福尔马林作为疼痛刺激 ,应用免疫组织化学技术光镜下观察疼痛对脊髓后角内mGluR5的影响 ;在大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素 ,以毁损C纤维 ,用免疫电镜技术观察大鼠脊髓后角浅层内mGluR5阳性结构与C纤维间的超微结构关系。　结果　脊髓后角疼痛刺激侧Ⅰ～Ⅱ层内mGluR5免疫反应性较对照侧明显增强 ;在蛛网膜下腔注射辣椒素的大鼠 ,电镜下可见其后角浅层内大量变性的C纤维轴突终末与 1至多个含mGluR5的树突形成突触联系。　结论　提示脊髓后角浅层内mGluR5主要作为突触后受体参与介导和调节C纤维内对伤害性信息的传入。

关键词：大鼠脊髓后角 5型代谢型谷氨酸受体 C纤维免疫组织化学电镜疼痛辣椒素信息传递

δ-连环素在雌激素替代治疗大鼠小脑中的表达

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解剖学报 2007年第5期38卷 511-514页

作者：魏建峰刘冠兰王芳刘汉武王小丽袁琳娜宋国颖刘胜洪华中科技大学同济医学院组织学胚胎学教研室武汉430030

目的探讨卵巢切除大鼠小脑中δ-连环素(δ-catenin)的表达特征及雌激素对其表达的影响。方法将大鼠分为正常组、假手术组、雌激素替代组和安慰剂组。卵巢切除后人工注射雌二醇或安慰剂,应用免疫组织化学方法检测δ-连环素在小脑的定位表... 详细信息

目的探讨卵巢切除大鼠小脑中δ-连环素(δ-catenin)的表达特征及雌激素对其表达的影响。方法将大鼠分为正常组、假手术组、雌激素替代组和安慰剂组。卵巢切除后人工注射雌二醇或安慰剂,应用免疫组织化学方法检测δ-连环素在小脑的定位表达;用免疫印迹法做定量分析。结果与假手术组和雌激素替代组相比,免疫组织化学和免疫印迹法均显示安慰剂组大鼠小脑中δ-连环素表达最低,假手术组和雌激素替代组δ-连环素表达明显高于安慰剂组。结论雌激素可上调卵巢切除大鼠小脑δ-连环素的表达。

关键词： δ-连环素小脑卵巢切除雌激素免疫组织化学免疫印迹法大鼠