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我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、赭曲霉毒素A和伏马毒素的污染研究

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动物营养学报 2024年第4期36卷 2690-2698页

作者：赵伟厉学武 DESSALEGN Lamesgen 孙华郭林英刘梦孙铝辉华中农业大学动物科技学院农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室湖北洪山实验室武汉430070 新希望六和股份有限公司北京100102 河南省农畜水产品检验技术研究院郑州453099

本试验旨在研究我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)和伏马毒素(FUM)的单独及联合污染情况。分别对从我国不同地区采集474、385和1905份饲料原料和配合饲料样品,进行T-2毒素、OTA和FUM含量检测。结果显示:饲料原料和配... 详细信息

本试验旨在研究我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)和伏马毒素(FUM)的单独及联合污染情况。分别对从我国不同地区采集474、385和1905份饲料原料和配合饲料样品,进行T-2毒素、OTA和FUM含量检测。结果显示:饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM总污染率分别为26.8%、61.8%和59.3%,其含量平均值分别为0~45.8μg/kg、0.3~11.1μg/kg和0~16.3 mg/kg。值得注意的是,分别有0.4%、0.3%和0.5%的饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM含量超过了我国《饲料卫生标准》,并且,60%以上的饲料原料中霉菌毒素的联合污染率达30.3%~88.9%。由此可见,我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM的污染较严重,生产中加强监测我国饲料原料和配合饲料中上述霉菌毒素的污染情况和实施相关防控措施尤为重要。

关键词：饲料 T-2毒素赭曲霉毒素A 伏马毒素污染

FOXO1基因调控牛前体脂肪细胞增殖和分化的功能研究

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中国农业大学学报 2024年第4期29卷 226-238页

作者：宋雅萍张久盘魏大为杨东梅赵毅昂姜超宋小雨吴昊宁夏大学动物科技学院/宁夏反刍动物分子细胞育种重点实验室银川750021 宁夏农林科学院动物科学研究所银川750021

为探究干扰叉头转录因子O1(Forkhead box protein O1, FOXO1)对牛前体脂肪细胞增殖和分化的作用,本研究以固原黄牛的前体脂肪细胞为研究对象,采用组织块法分离牛前体脂肪细胞,并利用表型鉴定和标志基因表达谱2种方法鉴定所分离细胞的纯... 详细信息

为探究干扰叉头转录因子O1(Forkhead box protein O1, FOXO1)对牛前体脂肪细胞增殖和分化的作用,本研究以固原黄牛的前体脂肪细胞为研究对象,采用组织块法分离牛前体脂肪细胞,并利用表型鉴定和标志基因表达谱2种方法鉴定所分离细胞的纯度和分化潜能。筛选并包装牛FOXO1干扰慢病毒,利用EdU染色、流式细胞术、油红O染色和qPCR方法探究干扰FOXO1对牛脂肪细胞增殖和分化的作用。结果表明:1)成功分离了牛前体脂肪细胞,且其具有较高的纯度和分化潜能。2)EdU染色结果表示,侵染Lv-FOXO1极显著增加了牛脂肪细胞的增殖率(P<0.01)。3)流式周期结果显示,干扰FOXO1显著增加了牛脂肪细胞S期阳性细胞的比例,促进了G1/S期的转化,进而促进了牛脂肪细胞增殖。4)干扰FOXO1后,增殖标志基因PCNA、CDK1和CDK2的表达量均极显著上调(P<0.01)。5)干扰FOXO1后牛前体脂肪细胞脂滴生成明显减少,且成脂标志基因PPARG的表达极显著下调(P<0.01),CEBPB和LPL的表达显著下调(P<0.05)。综上,干扰FOXO1可通过上调增殖标志基因PCNA、CDK1和CDK2的表达促进牛脂肪细胞G1/S期的转化,进而促进牛脂肪细胞增殖,且其可通过降低成脂标志基因PPARG、CEBPB和LPL的表达减少牛脂肪细胞脂滴形成,进而影响脂肪沉积。本研究可为中国地方黄牛的肉质遗传改良提供理论依据。

关键词： FOXO1 固原黄牛前体脂肪细胞增殖分化

基于猪流行性腹泻病毒GⅡb亚型重组荧光病毒中和抗体检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1649-1660页

作者：林莉莉张梦迪朱琳琳马海龙孙琪何启盖张梦佳李文涛华中农业大学动物医学院武汉430070 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室武汉430070 农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070

2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)GⅡ型变异毒株的出现,导致全世界范围内猪流行性腹泻(PED)的病死率显著增加。疫苗免疫是PED有效防控的重要策略之一,疫苗诱导的中和抗体水平是免疫效果评价和疫苗质量评估的重要指标。然而,在Vero-CC... 详细信息

2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)GⅡ型变异毒株的出现,导致全世界范围内猪流行性腹泻(PED)的病死率显著增加。疫苗免疫是PED有效防控的重要策略之一,疫苗诱导的中和抗体水平是免疫效果评价和疫苗质量评估的重要指标。然而,在Vero-CCL81上开展的PEDV经典中和试验中所添加的胰酶会导致试验结果不稳定等问题。本研究拟在构建稳定表达绿色荧光蛋白的重组病毒基础上,建立一种能准确评估样品中和抗体的检测方法。本研究在pUC57载体上克隆插入GⅡb亚型PEDV-GDU株部分ORF1a和ORF1b基因片段与其他结构基因片段,并通过无缝克隆技术将ORF3基因替换为EGFP基因,构建辅助质粒pUC57-PEDV-GDU-dORF3-EGFP,通过RNA定向重组技术拯救重组荧光病毒rPEDV-GDU-dORF3-EGFP。进一步通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blot和病毒生长曲线测定等方法,比较重组荧光病毒和亲本病毒生物学特性。最终利用重组荧光工具病毒筛选在不添加胰酶的条件下仍能支持PEDV有效增殖的细胞系,并建立中和试验方法。结果表明,成功拯救重组荧光病毒rPEDV-GDU-dORF3-EGFP,且在Vero-CCL81细胞上,重组荧光病毒与亲本病毒呈现相似的生物学特性。利用该重组荧光病毒筛选到一株亚克隆Huh7.10细胞可支持PEDV在无外源胰酶添加条件下的有效感染与复制。并利用Huh7.10细胞和重组荧光病毒成功建立了PEDV中和试验方法,相关性试验分析表明,该方法测定结果与ELISA抗体检测结果相关性高于PEDV经典中和试验。以上试验结果表明,本研究成功建立了PEDV-GDU毒株的反向遗传操作平台,为PED新型疫苗候选毒株的快速制备提供了有力的工具。此外,基于重组荧光病毒在Huh7.10细胞上建立的中和试验方法能更准确地测定血清中和抗体水平,为疫苗免疫效果的评估提供了有效的技术支持手段。

关键词：猪流行性腹泻病毒反向遗传学胰蛋白酶报告病毒中和试验

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姜黄素改善氧化鱼油对黄颡鱼肠道的不利影响

动物营养学报 2024年第8期36卷 5297-5307页

作者：陈严轩王国霞邱建强刘燕史合群董芮绮彭凯广东省农业科学院动物科学研究所农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640 仲恺农业工程学院动物科技学院广州510225 华中农业大学水产学院武汉430070 广州市科虎生物技术有限公司广州510145 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

本试验旨在研究姜黄素对饲喂含氧化鱼油饲料的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)肠道消化酶活性、组织形态及菌群结构的影响。设计6种等氮等脂试验饲料,饲料中分别添加3%新鲜鱼油(T1组)、3%氧化鱼油(T2组)、3%氧化鱼油+0.02%姜黄素(T3组)... 详细信息

本试验旨在研究姜黄素对饲喂含氧化鱼油饲料的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)肠道消化酶活性、组织形态及菌群结构的影响。设计6种等氮等脂试验饲料,饲料中分别添加3%新鲜鱼油(T1组)、3%氧化鱼油(T2组)、3%氧化鱼油+0.02%姜黄素(T3组)、3%氧化鱼油+0.04%姜黄素(T4组)、3%氧化鱼油+0.06%姜黄素(T5组)、3%氧化鱼油+0.08%姜黄素(T6组)。选取初始体重为(19.6±0.3)g的健康黄颡鱼720尾,随机分为6组,分别饲喂上述6种试验饲料,每组4个重复,每个重复30尾鱼。养殖周期为56 d。结果显示:与T1组相比,T2组肠道消化酶活性无显著差异(P>0.05),但肠道绒毛长度显著降低(P0.05),T3和T6组肠道肌层厚度显著增加(P<0.05);在属水平下,T4组梭状芽孢杆菌属(Clostridium)和分节丝状菌属(Candidatus_Arthromitus)的相对丰度显著增加(P<0.05),T4~T6组Pseudomonas的相对丰度显著增加(P<0.05),Cetobacterium的相对丰度显著降低(P<0.05),T5和T6组Ralstonia的相对丰度显著增加(P<0.05)。随着饲料中姜黄素添加量的增加,肠道脂肪酶活性呈线性效应(P=0.001),绒毛长度呈二次效应(P<0.001),绒毛宽度呈线性(P=0.001)和二次效应(P<0.001),杯状细胞数呈线性(P=0.030)和二次效应(P=0.007);属水平上,Pseudomonas的相对丰度呈线性(P<0.001)和二次效应(P<0.001),Cetobacterium的相对丰度呈线性(P=0.001)和二次效应(P=0.001),Ralstonia的相对丰度呈二次效应(P<0.001)。综上可知,饲料中添加3%氧化鱼油诱导了黄颡鱼肠道组织结构损伤,而添加0.04%~0.08%姜黄素能够提高黄颡鱼肠道胰蛋白酶和脂肪酶活性以及有益菌Pseudomonas和Candidatus_Arthromitus的相对丰度,改善氧化鱼油诱导的肠绒毛结构损伤。

关键词：氧化鱼油姜黄素黄颡鱼肠道健康

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双定位信号增强工程化蛋白线粒体靶向性呈递

遗传 2024年

作者：周冰倩李尚朴王旭孟祥宇邓竞荣邢金良王建刚徐坤西北农林科技大学动物科技学院空军军医大学肿瘤生物学国家重点实验室

有效传递工程化改造的蛋白进入线粒体对开发高效的线粒体DNA编辑工具、实现线粒体疾病精准治疗具有重要意义。本研究选取eGFP和Cas9基因，在其上游或/和下游引入不同的线粒体定位信号（mitochondrial localization signal,MLS）序列，... 详细信息

有效传递工程化改造的蛋白进入线粒体对开发高效的线粒体DNA编辑工具、实现线粒体疾病精准治疗具有重要意义。本研究选取eGFP和Cas9基因，在其上游或/和下游引入不同的线粒体定位信号（mitochondrial localization signal,MLS）序列，分别构建了相应的工程化蛋白表达载体。将不同表达载体转染HEK293T细胞后，利用荧光共定位实验和免疫印迹实验分析不同工程化蛋白的线粒体靶向性呈递效果。结果显示，相比单端添加MLS的eGFP和Cas9蛋白，双端MLS改造均显著提高了工程化蛋白的线粒体靶向性呈递效率。推测双MLS策略可增强工程化蛋白的线粒体靶向性，为以后开发高效的线粒体DNA编辑工具奠定了理论基础。

关键词：线粒体疾病线粒体DNA编辑工程化蛋白线粒体定位信号线粒体靶向

笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响

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动物营养学报 2024年第4期36卷 2277-2291页

作者：姬改革巨晓军单艳菊章明邹剑敏屠云洁刘一帆束婧婷庞立川范晨宇江苏省家禽科学研究所江苏省家禽遗传育种重点实验室扬州225125 湖南农业大学动物科技学院长沙410128

本试验旨在探讨笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响。选用21日龄黄脚麻鸡720只,3层层叠式笼内饲喂,鸡笼规格为长×宽×高=1.2 m×0.8 m×0.4 m,公鸡和母鸡分开饲... 详细信息

本试验旨在探讨笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响。选用21日龄黄脚麻鸡720只,3层层叠式笼内饲喂,鸡笼规格为长×宽×高=1.2 m×0.8 m×0.4 m,公鸡和母鸡分开饲养,均随机分为4组(每组5个重复),笼养密度分别为15(低密度组)、17(中密度组)、19(中高密度组)和21只/m 2(高密度组)。试验期42 d。结果表明:1)对于公鸡,21~42日龄时,高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05);43~63日龄时,中高密度组和高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05),中高密度组和高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05)。对于母鸡,21~42日龄时,中高密度组和高密度组平均日采食量显著低于低密度组(P<0.05),高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05);43~63日龄时,高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05),中高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05)。2)对于公鸡,低密度组肝脏重量显著低于其他各组(P<0.05),肝脏指数显著低于高密度组(P<0.05)。3)对于母鸡,中密度组血清超氧化物歧化酶活性显著高于高密度组(P<0.05),中高密度组血清丙二醛含量显著高于高密度组(P<0.05)。4)对于公鸡,中密度组空肠绒毛高度/隐窝深度显著高于高密度组(P<0.05)。对于母鸡,高密度组十二指肠隐窝深度显著高于中高密度组(P<0.05),中高密度组十二指肠绒毛高度/隐窝深度显著高于高密度组(P<0.05);高密度组空肠绒毛高度显著低于中密度组和中高密度组(P<0.05),高密度组空肠绒毛高度/隐窝深度显著低于低密度组(P<0.05);高密度组回肠隐窝深度显著高于其他各组(P<0.05)。5)对于公鸡,中高密度组空肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA相对表达量显著高于其他各组(P<0.05)。对于母鸡,中高密度组空肠核因子E2相关因子2(Nrf2)和Toll样受体4(TLR4)mRNA相对表达量显著高于低密度组(P<0.05)。由此可见,高笼养密度会对黄羽肉鸡生长性能、抗氧化能力、肠道组织形态等相关指标产生影响;笼养密度可能通过影响肠道抗氧化和免疫相关基因表达影响黄羽肉鸡肠道免疫功能。

关键词：黄羽肉鸡笼养密度生长性能免疫肠道形态抗氧化基因表达

饲料中添加N-氨甲酰谷氨酸或牛磺酸对杂交鳢生长性能、肠道黏膜形态及肠道菌群的影响

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水生生物学报 2024年第4期48卷 579-591页

作者：李培佳闫辰侯冬强李敏彭凯黄文曹俊明赵红霞广东省农业科学院动物科学研究所广东省农业科学院水产研究中心广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640 华中农业大学水产学院武汉430070 广州飞禧特生物科技有限公司广州510640

实验旨在探讨饲料添加N-氨甲酰谷氨酸(NCG)或牛磺酸(Taurine)对杂交鳢(Channa maculata♀×***♂)幼鱼肠道生长、消化、抗氧化和肠道菌群的影响。实验选取初始体均重为(22.02±0.02)g的杂交鳢450尾,随机分为3个组,每组3个重复,每个重复5... 详细信息

实验旨在探讨饲料添加N-氨甲酰谷氨酸(NCG)或牛磺酸(Taurine)对杂交鳢(Channa maculata♀×***♂)幼鱼肠道生长、消化、抗氧化和肠道菌群的影响。实验选取初始体均重为(22.02±0.02)g的杂交鳢450尾,随机分为3个组,每组3个重复,每个重复50尾,分别投喂基础饲料以及在基础饲料中添加0.03%N-氨甲酰谷氨酸、1%牛磺酸的3种实验饲料,记作对照组,0.03%NCG组和1%Taurine组,饲喂8周。结果表明,饲料中添加0.03%NCG或1%Taurine可显著提高杂交鳢蛋白质沉积率(P<0.05),提高肠道淀粉酶和肌酸激酶活性(P<0.05),促进前肠肌层厚度、中肠绒毛宽度、中肠肌层厚度和后肠肌层厚度生长(P<0.05),增强肠道厚壁菌群和支原体属丰度(P<0.05),显著降低饲料系数和肠道丙二醛含量(P<0.05),显著降低肠道梭杆菌群和梭菌属丰度(P<0.05)。此外,饲料中添加0.03%NCG可显著提高杂交鳢肠道总抗氧化能力、过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性(P<0.05),显著缓解肠道病理状态(P<0.05),显著提高杂交鳢肠道胰蛋白酶、脂肪酶、γ-谷氨酰转移酶和钠钾ATP酶活性(P<0.05),促进前肠绒毛长度、前肠绒毛宽度和后肠肌层厚度生长(P<0.05),并显著提高肠道OUT占比、Chao和Ace指数(P<0.05),增强肠道菌群丰富度和多样性(P<0.05)。结果表明饲料中添加NCG在增强肠道抗氧化活性,缓解肠道氧化损伤方面优于添加牛磺酸,但饲料添加牛磺酸可以增强肠道消化酶活性,增强肠道菌群丰富度和多样性,维持肠道稳态并促进肠道生长,其作用效果优于补充NCG。

关键词： N-氨甲酰谷氨酸牛磺酸生长性能肠道杂交鳢

纤维高效降解微生物的选育及其在畜禽生产中的应用研究进展

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动物营养学报 2024年

作者：秦世宁姜淑贞杨维仁杨立杰山东农业大学动物科技学院农业农村部非粮饲料资源高效利用重点实验室

优质饲料资源不足严重制约着我国畜牧业发展。纤维是自然界中分布最广且数量最多的可再生资源,因其结构复杂且许多动物缺乏相应降解酶而难以被利用。然而,部分微生物可通过分泌相应纤维降解酶系,将纤维降解为低聚糖或被自身利用产生益... 详细信息

优质饲料资源不足严重制约着我国畜牧业发展。纤维是自然界中分布最广且数量最多的可再生资源,因其结构复杂且许多动物缺乏相应降解酶而难以被利用。然而,部分微生物可通过分泌相应纤维降解酶系,将纤维降解为低聚糖或被自身利用产生益生物质。因此,纤维高效降解微生物的选育,对新型饲料资源开发和纤维饲料利用具有重要的意义。本文针对近年来国内外纤维高效降解微生物的筛选、改造和应用进行综述,旨在为我国优质微生物种质资源的挖掘和新型饲料资源的开发提供新思路。

关键词：纤维微生物酶诱变育种

共培养体系下牛骨骼肌细胞对脂肪细胞的调控作用研究

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中国农业科学 2024年第18期 3704-3718页

作者：杨东梅张久盘宋雅萍宋小雨姜超马云魏大为宁夏大学动物科技学院/宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室宁夏农林科学院动物科学研究所

【目的】大理石纹是衡量肉品质的重要指标之一，由牛骨骼肌细胞与牛脂肪细胞共同发育形成。通过最大程度模拟体内肉质形成过程中牛骨骼肌细胞和脂肪细胞互作效应，建立体外两种细胞共培养体系，探究共培养体系下牛骨骼肌细胞分泌和代谢... 详细信息

【目的】大理石纹是衡量肉品质的重要指标之一，由牛骨骼肌细胞与牛脂肪细胞共同发育形成。通过最大程度模拟体内肉质形成过程中牛骨骼肌细胞和脂肪细胞互作效应，建立体外两种细胞共培养体系，探究共培养体系下牛骨骼肌细胞分泌和代谢因子对脂肪细胞的调控作用。【方法】采用组织块法和酶消化法分别分离牛脂肪细胞和骨骼肌细胞。利用表型鉴定法和标志基因表达谱鉴定法共同鉴定所分离细胞的纯度和分化潜能，进一步构建牛骨骼肌细胞和牛脂肪细胞条件培养基交换共培养体系以及Transwell共培养体系，通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)、EdU染色和油红O染色等方法检测共培养条件下牛骨骼肌细胞分泌和代谢产物对脂肪细胞增殖和分化的影响。【结果】成功构建了两种牛骨骼肌细胞与脂肪细胞的共培养体系。条件培养基交换共培养下，牛脂肪细胞增殖标志基因PCNA、CDK2、CCNE2和CCND1的表达极显著下调（P分子机制提供技术支撑。

关键词：牛脂肪细胞骨骼肌细胞共培养细胞互作