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缺氧诱导基因1C在牦牛隐睾中的表达及其调控机制研究

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 2983-2994页

作者：马密兰王琪颜秋李天安赵兴绪张勇甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室兰州730070

旨在探究缺氧诱导基因1C(HIG1 hypoxia inducible domain family member 1C,HIGD1C)对牦牛睾丸支持细胞凋亡的影响。本研究分别选择3头3~6岁龄健康状况良好的公牦牛和隐睾症公牦牛,以其睾丸组织作为研究材料。通过HE染色、牦牛睾丸支持... 详细信息

旨在探究缺氧诱导基因1C(HIG1 hypoxia inducible domain family member 1C,HIGD1C)对牦牛睾丸支持细胞凋亡的影响。本研究分别选择3头3~6岁龄健康状况良好的公牦牛和隐睾症公牦牛,以其睾丸组织作为研究材料。通过HE染色、牦牛睾丸支持细胞分离培养、间接免疫荧光、RT-qPCR、Western blot、HIGD1C过表达与干扰载体构建及体外细胞转染等技术,探究HIGD1C对牦牛睾丸支持细胞凋亡的调控机制。结果显示:正常睾丸基底膜及间质组织完整,曲细精管、管周肌细胞及支持细胞等排列紧密,隐睾中曲细精管断裂萎缩且HIGD1C在牦牛隐睾组织中转录及蛋白的表达水平极显著于高于正常睾丸组织(P<0.01);HIGD1C蛋白主要分布在睾丸间质细胞和支持细胞;成功分离培养出牦牛睾丸支持细胞且HIGD1C蛋白定位于原代睾丸支持细胞胞核;HIGD1C过表达支持细胞后,Bcl-2 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),蛋白表达水平极显著上调(P<0.01),Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均极显著上调(P<0.01),流式细胞术结果显示过表达HIGD1C组支持细胞凋亡率极显著上升(P<0.01);反之,HIGD1C敲除后,Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01),流式细胞术结果显示HIGD1C敲除组支持细胞凋亡率极显著下调(P<0.01)。本研究结果表明:正常睾丸组织结构完整,隐睾间质疏松,且HIGD1C在牦牛隐睾组织中高表达。体外细胞试验表明上调HIGD1C,可以激活促凋亡蛋白,促进牦牛支持细胞凋亡;反之,下调HIGD1C表达水平会抑制支持细胞凋亡。提示HIGD1C参与调控牦牛睾丸支持细胞的凋亡,为揭示牦牛隐睾的发生机制提供了参考。

关键词： HIGD1C 隐睾症支持细胞凋亡牦牛

衣康酸二甲酯对H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍的调节作用及机制研究

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南京农业大学学报 2024年第1期47卷 28-35页

作者：闫巍元张锐马海田南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本文主要探究衣康酸二甲酯(dimethyl itaconate,DMI)对小鼠肝细胞线粒体功能障碍的调节作用及其机制,旨在为衣康酸二甲酯作为一种生理调节剂用于防控畜禽因线粒体功能障碍引发的相关疾病提供理论依据。[方法]以小鼠肝细胞系(AML-1... 详细信息

[目的]本文主要探究衣康酸二甲酯(dimethyl itaconate,DMI)对小鼠肝细胞线粒体功能障碍的调节作用及其机制,旨在为衣康酸二甲酯作为一种生理调节剂用于防控畜禽因线粒体功能障碍引发的相关疾病提供理论依据。[方法]以小鼠肝细胞系(AML-12细胞)为研究对象,试验分为对照组(NC)、0.5 mmol·L^(-1)DMI处理组、150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理组和0.5 mmol·L^(-1)DMI+150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理组。分别检测AML-12细胞中ATP含量、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体活性氧(mROS)水平和线粒体膜电位(MMP)等生化指标,并用免疫印迹法检测AMP-依赖性蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子蛋白的表达水平。[结果]0~0.5 mmol·L^(-1)DMI和0~150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)对细胞活力无显著影响。DMI处理显著抑制H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞中mROS水平升高以及MMP的异常下降,以及ATP含量和mtDNA拷贝数的下降(P<0.01)。DMI处理极显著抑制H_(2)O_(2)诱导的小鼠肝细胞中p-AMPK、NAD-依赖性去乙酰化酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(Nrf1)和线粒体转录因子A(TFAM)蛋白水平的下降(P<0.01),而AMPK抑制剂Compound C预处理则可逆转这一效应。[结论]DMI通过激活AMPK-SIRT1-PGC1α信号通路缓解H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍。

关键词：衣康酸二甲酯线粒体功能障碍 AMPK-SIRT1-PGC1α信号轴

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迷迭香酸共价偶联对β-乳球蛋白结构及性质的影响

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食品科学 2024年第11期45卷 61-67页

作者：杨庆尚洁丽曾浩龙王璇霈陈义杰柳鑫宫智勇许琳武汉轻工大学大宗粮油精深加工教育部重点实验室湖北武汉430023 华中科技大学同济医学院附属同济医院湖北武汉430030 华中农业大学食品科学技术学院湖北武汉430070

以β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)为对象,探究膳食多酚迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)共价偶联对蛋白结构和性质的影响。采用自由基法和碱法制得β-LG-RA共价偶联复合物;利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、傅里叶变换红外光... 详细信息

以β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)为对象,探究膳食多酚迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)共价偶联对蛋白结构和性质的影响。采用自由基法和碱法制得β-LG-RA共价偶联复合物;利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、傅里叶变换红外光谱、紫外吸收光谱、荧光光谱、圆二色光谱等技术,分析RA共价偶联后β-LG结构变化规律;通过对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除率检测及酶联免疫吸附测试,评价β-LG与RA共价偶联前后抗氧化性和与血清特异性免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)结合能力的变化。结果表明:RA共价偶联后β-LG的二级结构由α-螺旋向β-折叠和无规卷曲转变,蛋白的二、三级结构发生改变。此外,与β-LG相比,β-LG-RA共价偶联复合物的抗氧化性显著增强,与血清特异性Ig G的结合能力显著减弱。综上,RA共价偶联通过引入酚羟基增强了蛋白的抗氧化性,改变了β-LG的结构,降低了其与血清特异性IgG的结合能力。

关键词： β-乳球蛋白迷迭香酸共价偶联蛋白结构蛋白性质

MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制解析

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3132-3142页

作者：贾玉生李易霖马露露廖明代曼曼华南农业大学兽医学院人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642

MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽... 详细信息

MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽。利用晶体初筛试剂盒在体外培育肽和MHCⅠ的二元复合物晶体,并利用COOT、CCP4和PYMOL等软件对该晶体结构进行解析和分析。在这项研究中,作者发现二个与BF2*0201稳定结合的ALV-J CTL表位FVDFANRLI和SALQAFREV。得到一个优质晶体BF2*0201-SALQAFREV(SV9),其生长条件为1.0 mol·L^(-1)丁二酸(pH 7.0),0.1 mol·L^(-1)HEPES(pH 7.0),1%聚乙二醇单甲醚2000。解析高分辨率(1.72?)的BF2*0201-SV9复合物结构后发现BF2*0201抗原结合槽整体呈现弱负电性。保守的残基多位于抗原结合槽的两端,特异性氨基酸赋予BF2*0201中等大小的抗原结合槽。B、C和F口袋起着较重要的锚定作用,口袋残基和水分子与抗原多肽形成氢键作用,将其固定在抗原结合槽中。SV9表位构象中突出的P4-Gln和P7-Arg残基的构象特征表明该位点有被特异性TCR潜在识别的特性。BF2*0201-SV9复合物晶体结构特征有助于阐明B2单倍型MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位的机制,有助于解释B2单倍型鸡对ALV存在抗性的原因,为抗病育种工作奠定理论基础。

关键词： MHC BF2*0201 ALV-J 递呈机制晶体结构

伪狂犬病病毒荧光标签毒株构建及其在抗病毒药物筛选中的初步应用

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3600-3611页

作者：呙会会张浩杨丹旷燕李亚菲刘绍蒙刘青芸王湘如华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室武汉430070

为筛选针对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的有效抗病毒药物,本研究以PRV人源分离毒株hSD-1/2019和经典猪源流行毒株Ea为亲本病毒,采用同源重组技术将mCherry报告基因插入到PRV的UL 35基因终止子之前位点,构建了表达红色荧光蛋白... 详细信息

为筛选针对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的有效抗病毒药物,本研究以PRV人源分离毒株hSD-1/2019和经典猪源流行毒株Ea为亲本病毒,采用同源重组技术将mCherry报告基因插入到PRV的UL 35基因终止子之前位点,构建了表达红色荧光蛋白mCherry的荧光标签毒株PRV-mCherry。基于构建的荧光标签病毒,以荧光强度为指标,建立高通量药物筛选平台,对天然产物库中1621种化合物进行抗病毒药物筛选,并初步探索药物特性。结果表明,mCherry标签插入位置正确且稳定遗传,荧光标签毒株PRV-mCherry与亲本毒株在PK-15细胞上的增殖曲线趋势一致,且荧光强度可反映病毒增殖情况。使用PRV-mCherry从天然产物库中成功筛选出3种可在体外有效抑制PRV增殖的药物,根据测定的50%细胞毒性浓度和50%抑制浓度,计算出3种药物的选择指数范围为203.63~564.58μmol·L^(-1),表明其具有良好的成药性。本研究为临床防治PRV感染的抗病毒药物发掘提供了新的策略和思路。

关键词：伪狂犬病病毒人源分离株荧光标签毒株抗病毒药物

利用大蜡螟幼虫和小鼠感染模型筛选猪链球菌血清2、3和9型三价灭活疫苗候选菌株

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 4077-4090页

作者：朋璐张衡庞思琪乔竹林张小芬谭臣宋云峰周锐黎璐华中农业大学动物医学院农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室生猪健康养殖省部共建协同创新中心武汉430070

旨在评估临床分离的猪链球菌血清2、3、9型强毒株制备的三价灭活疫苗对小鼠的免疫保护效果。使用大蜡螟幼虫感染模型和小鼠感染模型,从临床分离的猪链球菌中筛选出血清2、3和9型强毒株各1株(SS1803、SS1803024、SS1696),检测其生长曲线... 详细信息

旨在评估临床分离的猪链球菌血清2、3、9型强毒株制备的三价灭活疫苗对小鼠的免疫保护效果。使用大蜡螟幼虫感染模型和小鼠感染模型,从临床分离的猪链球菌中筛选出血清2、3和9型强毒株各1株(SS1803、SS1803024、SS1696),检测其生长曲线和毒力因子。将菌株分别灭活及混合灭活后与佐剂混合,用4×10^(7)CFU、8×10^(7)CFU SS1803、2×10^(8)CFU、5×10^(8)CFU SS1803024、1×10^(8)CFU、5×10^(8)CFU SS1696及三价灭活苗(2×10^(7)CFU SS1803^(+)1.5×10^(8)CFU SS1803024^(+)3×10^(7)CFU SS1696)分别对BALB/c小鼠进行两轮免疫,采集血清检测特异性抗体水平,分别用3种菌株致死剂量攻毒后观察小鼠免疫保护率,同时用亚致死剂量攻毒三价苗免疫组,测定小鼠血、脑、肺、脾的组织载菌量和细胞因子IL-6、IL-12水平,并观察脑、肺、脾、肾中的组织病理变化。结果显示:3株疫苗候选菌株的毒力基因鉴定分别为SS1803:gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(+),SS1803024:gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(-),SS1696:gapdh^(+)/sly-/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(-)。单价和三价疫苗免疫组均能产生对应免疫血清型的IgG抗体,以产生IgG1型抗体为主。三价疫苗免疫组能对2、3、9型3个菌株攻毒分别提供83.3%、66.7%和66.7%的保护率,能显著降低感染后小鼠组织中的载菌量,降低血清炎性因子水平和组织病变程度。本研究筛选临床流行率高的2、3、9型强毒株,联合制备三价灭活疫苗,能够对小鼠提供良好的免疫保护力,为猪链球菌多价疫苗的研发提供新的材料。

关键词：猪链球菌疫苗候选菌株三价灭活疫苗免疫保护效果

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一种治疗鸡痛风的中药复方的优化设计

黑龙江畜牧兽医 2024年第13期 10-16页

作者：王寒飞杨影影邰柏程赵恒基程古月刘振利谢长清王旭华中农业大学动物科学技术学院与动物医学院国家兽药残留基准实验室武汉430070 华中农业大学生命科学技术学院武汉430070

为了开发一种专用于治疗鸡痛风的中药复方,试验借助中医传承辅助平台对用于治疗人痛风的中药复方金钱续断汤(Jinqian Xuduan decoction,JXD)进行优化设计,通过分析治疗痛风的中药复方用药规律,考虑药对、药性、药物组成和经济成本等因素... 详细信息

为了开发一种专用于治疗鸡痛风的中药复方,试验借助中医传承辅助平台对用于治疗人痛风的中药复方金钱续断汤(Jinqian Xuduan decoction,JXD)进行优化设计,通过分析治疗痛风的中药复方用药规律,考虑药对、药性、药物组成和经济成本等因素,设计出JXD的3个衍生复方F1、F2、F3;按照体重250 mg/kg给小鼠灌胃氧嗪酸钾构建高尿酸血症小鼠模型,分为模型组和药物治疗的F1组、F2组、F3组,并设空白对照组,持续给药7 d后检测各组小鼠血清尿素氮、尿酸和肌酐含量,筛选出有效复方。通过高蛋白高钙饲料诱导构建鸡痛风模型,在造模的第0,7,14,21,28天分别称量每只鸡的体重、饲料重、饮水量并进行翅静脉采血,检测血清尿素氮、尿酸和肌酐含量。成功构建鸡痛风模型后,将筛选出的有效复方按照0.5%、1%、2%添加到鸡的饮水中,在给药后第1,3,5,7天分别称量每只鸡的体重、采食量和饮水量并检测血清尿素氮、尿酸和肌酐含量,确定有效复方的最佳使用浓度。结果表明:治疗痛风最常用的中药分别为薏苡仁、土茯苓和苍术。通过高尿酸血症小鼠模型筛选JXD的3个衍生复方,可见复方F2和F3都显著降低了小鼠血清中的尿素氮、尿酸和肌酐含量(P<0.05),且F3的效果最好,将其命名为仙芪方。饲喂高蛋白高钙饲料21 d成功构建了鸡痛风模型。2%的仙芪方饮水给药3 d即可有效降低鸡的血清尿酸含量,5~7 d即可恢复白羽肉鸡的生长性能。说明应用中医传承辅助平台能提高兽药产品的转化潜力,仙芪方对治疗鸡痛风具有较好的效果,最佳使用浓度为2%。

关键词：中医传承辅助平台痛风鸡高尿酸模型中兽药

赤羽病病毒N蛋白原核表达及单克隆抗体的制备

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生物工程学报 2024年第5期40卷 1548-1558页

作者：林永玉石正旺罗俊聪朱昱茜席韬周静张帆石鑫泰王川田宏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为制备赤羽病病毒(akabane virus,AKAV) N蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),本研究利用原核表达系统表达了AKAV N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞,采用间接酶联免疫吸附方法(enz... 详细信息

为制备赤羽病病毒(akabane virus,AKAV) N蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),本研究利用原核表达系统表达了AKAV N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞,采用间接酶联免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)筛选获得阳性杂交瘤细胞。经3次亚克隆筛选得到两株特异性针对AKAV N蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为2C9与5E9。通过ELISA、免疫印迹(Western blotting)、间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对其进行鉴定。结果显示,成功筛选到特异性针对AKAV N蛋白的单克隆抗体。IFA发现其与AKAV N蛋白具有良好的反应性,亚型鉴定试剂盒鉴定2C9 mAb重链为IgG2b型,轻链为κ链;5E9 mAb重链为IgG1型,轻链为κ链;ELISA检测效价均为1:4 096 000。本研究成功制备了两株特异性针对AKAV N蛋白的单克隆抗体,为赤羽病诊断方法的开发、疾病的防控以及AKAV N蛋白功能的研究奠定了基础。

关键词：赤羽病病毒 N蛋白原核表达单克隆抗体

山西省晋中和晋南肉牛捻转血矛线虫的核酸检测

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动物医学进展 2024年第9期45卷 141-144页

作者：贺渊惠刘亚亚马志雅郑文斌谢世臣刘卿朱兴全高文伟山西农业大学动物医学学院山西太谷030801 云南农业大学动物医学院云南省高校兽医公共卫生重点实验室云南昆明650201

为了解山西省部分地区肉牛捻转血矛线虫的感染类型和感染率,从山西省晋中(祁县、太谷区)和晋南(稷山县)3个地区采集431份肉牛粪便样本,对捻转血矛线虫ITS-2部分序列进行扩增、测序及鉴定,分析山西省部分地区肉牛捻转血矛线虫的感染情况... 详细信息

为了解山西省部分地区肉牛捻转血矛线虫的感染类型和感染率,从山西省晋中(祁县、太谷区)和晋南(稷山县)3个地区采集431份肉牛粪便样本,对捻转血矛线虫ITS-2部分序列进行扩增、测序及鉴定,分析山西省部分地区肉牛捻转血矛线虫的感染情况。结果显示,在431份检测样品中,7份粪便样品中扩增出捻转血矛线虫ITS-2序列,且序列完全一致,总感染率为1.62%;阳性样品均来源于6~12月龄公牛,晋中地区肉牛感染率为2.43%(5/206),晋南地区肉牛感染率为0.89%(2/225);晋中地区阳性样品均来源于祁县,来源于太谷区的样品中无阳性。序列比对结果显示,扩增出的序列与GenBank中来源于羊的捻转血矛线虫序列相似度为99.62%,说明感染牛与羊的捻转血矛线虫为同一种。表明山西两地区均存在捻转血矛线虫感染,感染率较低,感染牛的捻转血矛线虫为羊种捻转血矛线虫。

关键词：肉牛捻转血矛线虫 ITS-2 检测