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发热伴血小板减少综合征病毒Gn蛋白D Ⅲ-Ⅲ的表达与抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医学报 2024年

作者：张梦瑶梁天来闫飞虎陈韬焦翠翠金宏丽栾娇彦吴晓黄培张海丽宁琴王化磊李媛媛吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室中国农业科学院长春兽医研究所华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科

利用PCR技术扩增发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV）Gn-D Ⅲ-Ⅲ基因，将其插入pET-30a（+）原核表达载体，构建重组质粒pET-SFTSV-Gn-D Ⅲ-Ⅲ，将测序正确的pET-SFTSV-Gn-D Ⅲ-Ⅲ转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，优化Gn-D Ⅲ-Ⅲ蛋白表达表达条件。利用镍柱亲和层析法纯化的Gn-D Ⅲ-Ⅲ蛋白作为包被抗原，建立检测SFTSV抗体的间接ELISA方法，并进行评价。结果显示，通过PCR和测序鉴定重组质粒pET-SFTSV-Gn-D Ⅲ-Ⅲ构建成功；重组Gn-D Ⅲ-Ⅲ蛋白为可溶性表达，其最佳诱导条件为：0.4 mmol/L IPTG于25℃诱导4 h；经镍柱纯化后蛋白纯度高达91.77%；SFTSV抗体间接ELISA检测方法的的最佳反应条件为：5 μg/mL的包被质量浓度，一抗在37℃孵育1.5 h，二抗1:10 000稀释后在37℃孵育1 h。特异性试验结果显示该方法与裂谷热病毒（Rift Valley fever virus；RVFV）、埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）和蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus，TBEV）阳性血清均无交叉反应；敏感性试验结果显示该方法有较高的敏感性，SFTSV阳性血清稀释至81 920倍时其P/N 仍大于2.1;重复性结果表明批内和批间反应变异系数均小于10%。应用建立方法检测了4份人类感染SFTSV不同阶段的临床血清样本，结果缓解期患者血清P/N值大于2.1为阳性，多器官衰竭期患者血清P/N值小于2.1为阴性。结果表明，本研究成功表达并纯化了SFTSV Gn-D Ⅲ-Ⅲ蛋白，并以此为包被蛋白建立SFTSV抗体间接ELISA检测方法，该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可用于检测人类SFTSV临床血清样本。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒 Gn蛋白DomainⅢ 原核表达间接ELISA

蛋鸡兽用抗菌药使用减量化养殖现状与研究对策

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中国兽药杂志 2024年第2期58卷 81-88页

作者：赵琪孙红洋陈超超张璐李霆王亦琳张玉洁崔明全程敏郝利华张纯萍王鹤佳农业农村部动物源细菌耐药性监测重点实验室北京100081 中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心) 北京100081 中国农业大学动物医学院北京100193

不合理使用抗菌药严重威胁到蛋鸡养殖健康,引起鸡蛋中药物残留和细菌耐药性产生风险,影响鸡蛋食品安全和公共卫生安全。本文基于我国自2018年起开展的涵盖蛋鸡养殖的兽用抗菌药使用减量化行动,从蛋鸡养殖的减量化现状、问题、对策等方... 详细信息

不合理使用抗菌药严重威胁到蛋鸡养殖健康,引起鸡蛋中药物残留和细菌耐药性产生风险,影响鸡蛋食品安全和公共卫生安全。本文基于我国自2018年起开展的涵盖蛋鸡养殖的兽用抗菌药使用减量化行动,从蛋鸡养殖的减量化现状、问题、对策等方面进行综述,以期为推动蛋鸡兽用抗菌药使用减量化养殖提供参考。

关键词：蛋鸡养殖兽用抗菌药使用减量化对策研究

麻杏石甘口服液治疗肉鸡感染鸡毒支原体的效果评价

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畜牧兽医学报 2023年第12期54卷 5264-5274页

作者：雷亚萍周世伟滕雨萌农碧丹庞晓敏张诣刘晓丽王玉莲胡薛英华中农业大学动物医学院武汉430070 国家兽药残留基准实验室(华中农业大学) 武汉430070

旨在验证麻杏石甘口服液对人工感染鸡毒支原体治疗效果。将87只1日龄健康鸡按常规饲养至20日龄,随机分为感染对照组、空白对照组和治疗组。空白对照组正常饲喂,不感染。感染对照组和治疗组的试验鸡通过滴鼻、点眼、气囊注射鸡毒支原体M1... 详细信息

旨在验证麻杏石甘口服液对人工感染鸡毒支原体治疗效果。将87只1日龄健康鸡按常规饲养至20日龄,随机分为感染对照组、空白对照组和治疗组。空白对照组正常饲喂,不感染。感染对照组和治疗组的试验鸡通过滴鼻、点眼、气囊注射鸡毒支原体M17菌液共1.5 mL(109 CCU·mL^(-1)),1次·d^(-1),连续感染4 d。在感染的第5天(D1),治疗组经每升水1.5 mL麻杏石甘口服液饲喂治疗,连用5 d,停药后观察6 d。观察给药前1 d(D0)~D11各组鸡的呼吸、咳嗽、流涕、甩鼻、采食和精神状态等临床症状并进行评分,计算临床症状总评分、痊愈率、有效率和无效率。于D0和D12称量试验鸡体重,计算平均增重。分别于D2、D6、D12,每组剖检试验鸡6只,观察肺和气囊病理变化,并采集肺进行组织病理学观察。结果显示:治疗组临床症状总评分在D3开始明显降低(P<0.05);治疗组在D2、D6、D12,肺和气囊病变评分均显著低于感染对照组(P<0.05),肺的组织病理学病变评分也显著低于感染对照组(P<0.05),空白对照组未见异常;治疗组的痊愈率为76.5%,有效率94.1%,无效率为5.9%。感染对照组和治疗组的平均增重显著低于空白对照组(P<0.05)。麻杏石甘口服液可明显改善肉鸡气囊和肺组织病理损伤,对人工感染鸡毒支原体的肉鸡有较好的治疗效果。

关键词：麻杏石甘口服液鸡毒支原体治疗

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竹叶黄酮对鸡胚接种新城疫疫苗免疫效果的影响

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中国畜牧兽医 2024年 4174-4181页

作者：姜鑫瑞冯贺龙杨宏春蒋立人汪宏才曾哲左波张腾飞罗青平商雨温国元华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室广西大学动物科学技术学院湖北洪山实验室

【目的】探究竹叶黄酮（bamboo leaf flavonoid,BLF）作为疫苗佐剂对新城疫（ND）疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组（不注射任何物质）、TS组(注射0.1 mL 103.0EID50/0.1 mL的新... 详细信息

【目的】探究竹叶黄酮（bamboo leaf flavonoid,BLF）作为疫苗佐剂对新城疫（ND）疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组（不注射任何物质）、TS组(注射0.1 mL 103.0EID50/0.1 mL的新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）TS09-C疫苗株)和BLF+TS组(注射0.1 mL含2%BLF和103.0EID50/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液),每组36枚种蛋。试验期间,统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率,在雏鸡7、14、21、28日龄时,每组随机选取3只进行屠宰,采集脾脏、法氏囊、胸腺组织,统计免疫器官指数;采集雏鸡翅下静脉血液,测定血清抗体和细胞因子水平;在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验,攻毒后每天观察试验雏鸡状态,记录体重变化情况,并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰,取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】鸡胚接种后,BLF+TS组雏鸡孵化率为100%,存活率为97.22%。与TS组相比,21～28日龄时BLF+TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）和γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）含量均显著升高（P<0.05）。攻毒试验结果显示,攻毒后BLF+TS组雏鸡存活率为100%,攻毒后2～4 d BLF+TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组（P<0.05）;攻毒后3～7 d时BLF+TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组（P<0.05）。BLF+TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组（P<0.05）。【结论】BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种,而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护,进一步提高ND疫苗免疫效果,研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。

关键词：鸡胚接种竹叶黄酮新城疫疫苗疫苗佐剂

EFNA3和ITGA9基因多态性与公猪精液品质性状的关联分析

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中国畜牧杂志 2024年第8期60卷 233-239页

作者：雷润雨张宇冯越周佳伟徐忠吴俊静乔木彭先文梅书棋李凤娥华中农业大学动物科学技术学院湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室

精液品质性状是评估公猪繁殖性能的重要性状。本研究通过基因组分析，筛选出磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路中影响公猪精液品质性状的候选基因肝配蛋白A3(Ephrin A3,EFNA3)和整合素α9(Integrin Alpha 9,ITGA9)。进一步... 详细信息

精液品质性状是评估公猪繁殖性能的重要性状。本研究通过基因组分析，筛选出磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路中影响公猪精液品质性状的候选基因肝配蛋白A3(Ephrin A3,EFNA3)和整合素α9(Integrin Alpha 9,ITGA9)。进一步鉴定出EFNA3基因的g.94708472 G>A位点与总精子数、精子活力和精子畸形率性状显著相关；ITGA9基因的g.22284275 G>T位点与精子活力和精子畸形率性状显著相关，g.22437684 C>T位点与有效精子密度、精子活力和精子畸形率性状显著相关。ITGA9基因的2个SNPs位点连锁不紧密。EFNA3基因g.94708472G>A位点与ITGA9基因g.22284275G>T和g.22437684C>T位点存在互作关系。EFNA3基因g.94708472G>A位点与ITGA9基因g.22284275G>T和g.22437684C>T位点与公猪精液品质性状显著关联，可作为公猪精液品质选育的潜在分子标记。

关键词：精液品质 PI3K/AKT信号通路 EFNA3基因 ITGA9基因 SNP

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不同替米考星制剂的体外溶出和体内吸收比较

中国兽医杂志 2024年第3期60卷 66-71页

作者：邱梅赵良明于欢坤王海峰许国防孙晓鸣刘志海李秋青岛农业大学化学与药学院农用生物药物创制技术国家地方联合工程实验室山东青岛266109 莱山区动物疫病预防与控制中心山东烟台264003

为了比较4种替米考星制剂(肠溶颗粒R及预混剂X、Q和H)的体外溶出和体内吸收情况,本试验以0.1 mol/L盐酸溶液和0.2 mol/L磷酸钠溶液为溶出介质,采用浆法测定不同时间替米考星的累积溶出量,评价不同替米考星制剂的体外溶出特征;选用24头... 详细信息

为了比较4种替米考星制剂(肠溶颗粒R及预混剂X、Q和H)的体外溶出和体内吸收情况,本试验以0.1 mol/L盐酸溶液和0.2 mol/L磷酸钠溶液为溶出介质,采用浆法测定不同时间替米考星的累积溶出量,评价不同替米考星制剂的体外溶出特征;选用24头健康仔猪,随机分为4个组,每组6头,按20 mg/(kg·bw)单次集中拌料给药,评价不同替米考星制剂在猪血浆中的药动学特征。体外溶出结果显示,加入0.1 mol/L盐酸溶液2 h时,R的药物累积溶出量在10%以内,X的药物累积溶出量在15%以内,Q和H则完全溶出;加入0.2 mol/L磷酸钠溶液30 min时,R和X的累积溶出量均在90%以上。体内吸收结果显示,与H相比,R、X和Q的相对生物利用度分别为160.35%、153.37%和94.56%。结果表明,替米考星肠溶颗粒R和预混剂X具有良好的耐酸性,但不耐碱,进入体内不会被胃液破坏,在肠道得到充分释放,且在猪体内具有较好的吸收和利用效果。本试验证实替米考星肠溶制剂更符合临床所需,且建立了替米考星体外溶出与体内吸收的相关性,对评价不同替米考星制剂药动学性质具有一定指导意义。

关键词：替米考星体外溶出体内吸收

猪肌内脂肪前体细胞成脂分化中mi RNA差异分析

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中国畜牧杂志 2024年第8期60卷 122-128页

作者：张新雨杨涛吴俊静乔木徐忠张宇冯越李梓芃彭先文梅书棋李凤娥周佳伟动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室湖北省农业科学院畜牧兽医研究所华中农业大学农业农村部猪遗传育种重点实验室农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室

miRNA在成脂分化的过程中发挥着重要的调控作用，本研究旨在探究miRNA在猪肌内脂肪（Intramuscular Fat,IMF）前体细胞成脂分化过程中的表达模式，并对其潜在的调控功能进行分析。通过SmallRNA-seq、实时荧光定量PCR、miRanda、RNAhybir... 详细信息

miRNA在成脂分化的过程中发挥着重要的调控作用，本研究旨在探究miRNA在猪肌内脂肪（Intramuscular Fat,IMF）前体细胞成脂分化过程中的表达模式，并对其潜在的调控功能进行分析。通过SmallRNA-seq、实时荧光定量PCR、miRanda、RNAhybird等技术和软件，对猪IMF前体细胞成脂诱导分化过程中miRNA的表达模式及靶基因进行了生物信息学分析。结果显示：猪IMF前体细胞诱导4 d后出现脂滴，在诱导0 d和4 d的猪IMF前体细胞中共鉴定到617个miRNAs，其中22个miRNAs诱导4 d表达显著上调，27个miRNAs表达下调；差异miRNAs共预测到13 869个靶基因，GO分析和KEGG分析发现靶基因主要富集到细胞分泌、细胞分解代谢、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等。此外，对miR-30家族的ssc-miR-30a-5p和ssc-miR-30c-3p进行定量验证，验证结果与测序结果一致。本研究揭示了miRNAs在猪IMF前体细胞成脂分化过程中的表达模式及潜在调控网络，为研究猪IMF沉积的调控机制奠定了前期基础。

关键词：猪肌内脂肪成脂分化 miRNA

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兽药小分子与生物识别元件相互作用研究进展

中国畜牧兽医 2022年第2期49卷 755-764页

作者：吴双敏李龙侯仁陈玉霜彭大鹏华中农业大学国家兽药残留基准实验室农业农村部兽药残留检测重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

因不合理或违规使用兽药,导致兽药原型或代谢物在动物源性食品和水体中残留,继而危害人类健康、破坏生态环境。因此,兽药残留快速检测方法的建立显得尤为重要。受体、抗体、适配体等生物识别元件具有分子识别能力,根据其特性已发开了不... 详细信息

因不合理或违规使用兽药,导致兽药原型或代谢物在动物源性食品和水体中残留,继而危害人类健康、破坏生态环境。因此,兽药残留快速检测方法的建立显得尤为重要。受体、抗体、适配体等生物识别元件具有分子识别能力,根据其特性已发开了不同的检测方法,如免疫分析法、受体检测法及生物传感器法等方法,广泛用于生物医药的研究。由于分子识别元件是分析的主体,影响分析的选择性,因此不同识别元件与兽药相互作用的机制越来越受到人们的重视。随着计算机技术的发展,同源建模和分子对接广泛用于残留检测技术,主要用于药物与蛋白质之间、抗原与抗体之间、受体与配体之间等生物分子之间相互作用的研究。笔者重点介绍了单链抗体(ScFv)、受体和适配体3种识别元件与兽药小分子之间的互作机制,主要分析生物识别元件与兽药结合部位形成的氢键、疏水性及关键氨基酸或碱基,在分子水平上探究药物与识别元件的机理和规律,从而找出影响识别元件与药物结合的关键因素,并对3种识别元件进行了总结,以期为全面了解识别机制和体外进化,制备出亲和力更广的ScFv、受体、适配体提供理论支撑,为后续药物残留检测技术和药物开发奠定基础。

关键词：生物识别元件单链抗体(ScFv) 受体适配体同源建模分子对接

牦牛TBC1D7基因克隆、生物信息学及表达分析

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中国草食动物科学 2024年第2期44卷 10-17页

作者：张娟香欧杰次仁喇永富马晓明吴晓云郭宪褚敏阎萍梁春年中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省牦牛繁育重点实验室农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室兰州730050 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 西藏娘亚牦牛养殖产业发展有限责任公司嘉黎852400

为探究西藏牦牛Tre2-Bub2-CDC16结构域家族成员7(TBC1D7)基因的特征及结构,利用RT-PCR克隆了TBC1D7基因的CDS区序列,并对其进行了生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测了TBC1D7基因在牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉... 详细信息

为探究西藏牦牛Tre2-Bub2-CDC16结构域家族成员7(TBC1D7)基因的特征及结构,利用RT-PCR克隆了TBC1D7基因的CDS区序列,并对其进行了生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测了TBC1D7基因在牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉及脂肪组织的表达水平。结果表明,牦牛TBC1D7基因的CDS区全长为882 bp,共编码293个氨基酸;系统进化树分析结果表明,西藏牦牛与野牦牛的亲缘关系最近,与兔的最远;生物信息学分析结果表明,牦牛TBC1D7蛋白不存在信号肽和跨膜结构,属于亲水性蛋白,主要存在细胞核中,且该蛋白具有24个潜在的磷酸化位点,蛋白的高级结构由α-螺旋(65.53%)、延伸连(3.75%)、β-转角(3.75%)和无规则卷曲(29.96%)构成。qPCR检测结果显示,TBC1D7基因在西藏牦牛脾脏组织中的表达最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。

关键词：西藏牦牛 TBC1D7基因克隆生物学分析组织表达