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生物素连接酶BirA及其突变体在病原与宿主互作研究中的应用进展

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生物工程学报 2024年第7期40卷 1981-1996页

作者：张含煜李鹏飞廖浙屿张梦佳孙玉梅张敏何启盖李文涛农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室湖北武汉430070 湖北洪山实验室湖北武汉430070 宜昌市畜牧兽医中心湖北宜昌443000

蛋白质是机体进行生命活动的主要承担者,研究蛋白质的亚细胞定位及蛋白质之间的相互作用对了解蛋白质功能、阐述机体内分子机制至关重要。邻近标记技术是最新发展的能够在活细胞中检测蛋白质相互作用的有效方法之一。相较于传统研究蛋... 详细信息

蛋白质是机体进行生命活动的主要承担者,研究蛋白质的亚细胞定位及蛋白质之间的相互作用对了解蛋白质功能、阐述机体内分子机制至关重要。邻近标记技术是最新发展的能够在活细胞中检测蛋白质相互作用的有效方法之一。相较于传统研究蛋白质相互作用的方法,邻近标记技术具有灵敏度高、特异性强和背景低等优势,被广泛应用于病原与宿主间蛋白质的相互作用研究中。本文对近些年生物素连接酶BirA及其突变体的发展和应用进行了综述,阐述了几种经典生物素连接酶的作用原理,以期进一步明确基于BirA及其突变体的邻近标记技术在病原-宿主间蛋白质相互作用鉴定中的重要作用。

关键词：蛋白质相互作用邻近标记 BirA 生物素

猪表皮生长因子在乳酸乳球菌中的表达及其生物活性研究

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中国畜牧兽医 2024年第7期51卷 2823-2836页

作者：周鑫鑫郭莹莹肖运才王金硕周祖涛刘华珍石德时华中农业大学动物科学技术学院、动物医学院武汉430070 华中农业大学农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室武汉430070 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司北京100176

【目的】构建表达猪表皮生长因子(pEGF)的乳酸乳球菌原核表达系统,并探究其对断奶仔猪腹泻的影响。【方法】以pUC57-SP45-LEISSTCDA-pEGF序列为模板,利用PCR扩增获得缺失LEISSTCDA片段的融合产物,将其与酶切pNZ8149表达载体连接后电转... 详细信息

【目的】构建表达猪表皮生长因子(pEGF)的乳酸乳球菌原核表达系统,并探究其对断奶仔猪腹泻的影响。【方法】以pUC57-SP45-LEISSTCDA-pEGF序列为模板,利用PCR扩增获得缺失LEISSTCDA片段的融合产物,将其与酶切pNZ8149表达载体连接后电转至乳酸乳球菌NZ3900,以LacF为筛选标记获得重组菌pEGF-NZ。用nisin诱导重组菌pEGF-NZ表达重组蛋白pEGF,并通过Tricine-SDS-PAGE检测其表达情况。改良实验室及工业发酵条件以提高pEGF表达量。利用猪回肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖试验体外验证表达的pEGF生物活性。通过动物试验验证重组蛋白pEGF对小鼠及断奶仔猪腹泻的影响。【结果】试验成功构建重组菌pEGF-NZ,并分泌表达pEGF蛋白。体外试验结果显示,pEGF蛋白能促进细胞增殖。pEGF-NZ重组菌及其表达的pEGF蛋白能延缓小鼠腹泻发生时间,降低腹泻率,保护小鼠肠绒毛的完整性。与对照组相比,pEGF-NZ重组菌处理后,小鼠结肠中乳酸菌数显著增加(P0.05)。【结论】pEGF-NZ重组菌及其分泌表达的pEGF能够修复肠道屏障,抑制病原菌黏附,调控肠道菌群,其主要通过下调部分促炎因子、上调抑炎因子表达发挥抑炎效果,从而保护断奶仔猪肠道健康,有效缓解腹泻。

关键词：乳酸乳球菌 pEGF-NZ重组菌猪表皮生长因子(pEGF)

与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1127-1136页

作者：梁灿新郑小雪舒雪利周婉怡廖明曹伟胜华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业部兽用疫苗创制重点实验室广州510642

本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡... 详细信息

本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus, FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。

关键词：黄羽肉鸡鸡内皮血管瘤 K亚群禽白血病病毒遗传进化分析

1株致仔猪脑膜炎的猪链球菌的分离鉴定及致病性分析

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 2143-2153页

作者：刘丁语刘宝玲何振文罗琴乔常宏陈翔宇王晓虎向华王刚谭臣蔡汝健广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640 华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心武汉430000

【目的】确定广东某猪场送检的疑似猪链球菌引起仔猪脑膜炎的病猪组织中的病原,并测定其药物敏感性和致病性,为猪场用药及探索该病原引起脑膜炎的机制奠定基础。【方法】对疑似猪链球菌引起的仔猪脑膜炎送检病料进行细菌分离培养、形态... 详细信息

【目的】确定广东某猪场送检的疑似猪链球菌引起仔猪脑膜炎的病猪组织中的病原,并测定其药物敏感性和致病性,为猪场用药及探索该病原引起脑膜炎的机制奠定基础。【方法】对疑似猪链球菌引起的仔猪脑膜炎送检病料进行细菌分离培养、形态观察、生化试验及分子学鉴定,并对其开展药物敏感性试验、毒力基因测定、小鼠感染试验及病理组织学诊断。【结果】仔猪脑组织分离株在血平板上出现溶血现象,革兰染色镜检细菌被染成紫色,形态为圆形,部分呈链状排列。生化鉴定结果显示,分离株能发酵棉子糖、乳糖、菊糖、七叶苷,不能发酵山梨醇、甘露醇、阿拉伯糖、松三糖、D-核糖,马尿酸盐还原试验为阴性,与猪链球菌相符。测序分析后确定分离株为猪链球菌。血清型鉴定结果显示,分离株为9型猪链球菌,命名为GDS209。药物敏感性试验结果显示,分离株GDS209对头孢噻吩(先锋Ⅰ)、头孢氨苄(先锋Ⅳ)和氨苄西林/舒巴坦等10种抗菌药耐药,对替卡西林/克拉维酸、氟苯尼考、阿莫西林3种抗菌药敏感。毒力基因检测结果显示,分离株GDS209携带gdh、gapdh、fbps、orf 2、srtA、ccpA毒力基因,不携带mrp、sly、luxS、epf毒力基因。小鼠感染试验结果显示,分离株GDS209对小鼠的半数致死量(LD 50)为1×10^(9)CFU。组织病理学观察显示,分离株GDS209能引起昆明小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、脑不同程度的淤血和炎症。【结论】本研究分离到1株9型猪链球菌,该分离菌对大部分猪场常用抗菌药耐药,对替卡西林/克拉维酸、氟苯尼考、阿莫西林3种抗菌药敏感,本研究结果可为9型猪链球菌的临床诊断和药物治疗提供一定的参考依据。

关键词：仔猪脑膜炎猪链球菌分离鉴定耐药性致病性

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戊型肝炎病毒研究进展

中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 736-747页

作者：刘丁语何振文刘宝玲王刚王晓虎谭臣蔡汝健华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心武汉430000 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)是一种单链、非包膜的RNA病毒,目前可分为8个基因型。作为一种人兽共患病原体,HEV能引起人的急性病毒性肝炎和动物的感染,其主要的传播途径为粪-口传播,也可通过输血和母婴传播。HEV主要在发展中... 详细信息

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)是一种单链、非包膜的RNA病毒,目前可分为8个基因型。作为一种人兽共患病原体,HEV能引起人的急性病毒性肝炎和动物的感染,其主要的传播途径为粪-口传播,也可通过输血和母婴传播。HEV主要在发展中国家流行,而欧美等发达国家也有散发的病例。目前,检测HEV的常用方法是实时荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA),也有学者利用反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)和CRISPR系统等新型检测方法进行HEV检测。在药物治疗方面,可用利巴韦林、干扰素或多烯磷脂酰胆碱(PPC)等化合物治疗HEV引起的感染,也可使用中药单味或复方改善临床症状并作协同治疗。接种疫苗被认为是预防和控制HEV感染的有效手段,但目前仍无有效的HEV体外细胞培养系统,传统的灭活苗和减毒苗无法批量制备。当前HEV疫苗的研究方向主要有基因重组蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗和口服疫苗等。接种疫苗是预防戊型肝炎的重要措施,采用切断传播途径为主的综合性预防措施也可控制该病的流行。笔者主要通过对HEV的检测方法、药物治疗和疫苗免疫等方面的研究进展进行归纳和总结,并对HEV的防控研究进行展望,以期为HEV的预防与控制提供新的思路。

关键词：戊型肝炎病毒(HEV) 检测方法治疗疫苗

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禽霍乱的诊断与防治措施

养禽与禽病防治 2024年第1期 24-30页

作者：王清义袁为锋陈礼斌林秋燕任涛华南农业大学兽医学院农业农村部兽用疫苗创制重点实验室人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室、广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642

禽霍乱是由多杀性巴氏杆菌感染引起的一种常见传染病,家禽和野禽都易感,国内外流行,我国各地均有发生,给养禽业带来巨大损失。对于禽霍乱的诊断,目前主要通过临床症状、病理剖检和实验室检查方法;对于该疾病的预防和治疗,主要通过生物... 详细信息

禽霍乱是由多杀性巴氏杆菌感染引起的一种常见传染病,家禽和野禽都易感,国内外流行,我国各地均有发生,给养禽业带来巨大损失。对于禽霍乱的诊断,目前主要通过临床症状、病理剖检和实验室检查方法;对于该疾病的预防和治疗,主要通过生物安全、抗菌药物和疫苗使用。本文将聚焦禽霍乱的诊断方法、抗菌药物和疫苗种类,并对禽霍乱与其他疫病混合感染的情况进行论述。本文旨在对养殖中出现的禽霍乱提供诊断和防治措施,为禽类养殖提供预防与解决方案。

关键词：禽霍乱巴氏杆菌诊断防治疫苗

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浅析我国鸭、鹅呼肠孤病毒

养禽与禽病防治 2024年第4期 17-22页

作者：邓钧元陈礼斌林秋燕任涛华南农业大学兽医学院农业农村部兽用疫苗创制重点实验室、人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室、广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广州510642

近年来,禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)感染在国内变得越来越频繁,以家禽的严重关节炎、腱鞘炎、心包炎和生长抑制等临床表现为主要特征。ARV可感染多种家禽,其中常见水禽ARV可分为鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)和鹅呼肠孤病毒(Go... 详细信息

近年来,禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)感染在国内变得越来越频繁,以家禽的严重关节炎、腱鞘炎、心包炎和生长抑制等临床表现为主要特征。ARV可感染多种家禽,其中常见水禽ARV可分为鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)和鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV),具有传播快、死亡率高的特点,能引起维鸭、鹅的肝脾炎症,严重危害着水禽养殖行业。本文将对国内DRV和GRV的流行情况、临床症状、诊断与防控进行总结,为广大水禽养殖户提供参考。

关键词：鸭呼肠孤病毒鹅呼肠孤病毒病原学流行病学临床症状预防治疗

罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白的表达及IgM抗体间接ELISA方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2024年第2期 119-128页

作者：农源杨洋滕婷陈林孙彤彤郑喜邦李恭贺杨磊韦仁吴文德广西大学动物科学技术学院南宁530004 广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心南宁530004 广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室南宁530004 广西高校动物疫病预防与控制重点实验室南宁530004

为了建立一种具有良好特异性、敏感性、重复性和准确性的,能够检测罗非鱼源无乳链球菌的ELISA方法,试验首先进行了罗非鱼源无乳链球菌ScpB基因的克隆及其蛋白的表达和纯化,然后以重组蛋白作为包被抗原、罗非鱼待测血清作为一抗、抗罗非... 详细信息

为了建立一种具有良好特异性、敏感性、重复性和准确性的,能够检测罗非鱼源无乳链球菌的ELISA方法,试验首先进行了罗非鱼源无乳链球菌ScpB基因的克隆及其蛋白的表达和纯化,然后以重组蛋白作为包被抗原、罗非鱼待测血清作为一抗、抗罗非鱼IgM单克隆抗体2C10作为二抗、羊抗鼠IgG-HRP作为三抗建立间接ELISA方法并对该方法进行条件(抗原包被质量浓度、一抗稀释度、抗原包被条件、封闭液、一抗作用时间、二抗作用时间)优化,最后确定该方法的临界值并进行特异性、敏感性、重复性和符合性试验。结果表明:纯化后的罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白大小为104.6 ku,与预期大小一致,可被罗非鱼IgM抗体特异性识别;建立的IgM抗体间接ELISA方法的最佳抗原包被质量浓度为0.1μg/mL,最佳一抗稀释度为1∶5,最佳抗原包被条件为4℃、12 h,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳一抗作用时间为2 h,最佳二抗作用时间为0.5 h;临界值上限为0.456,临界值下限为0.377;批内变异系数为3.349%~5.272%,批间变异系数为2.793%~5.902%,均低于10.000%;仅可检测出罗非鱼无乳链球菌阳性血清和罗非鱼ScpB蛋白免疫血清,无法检测出罗非鱼嗜水气单胞菌阳性血清、罗非鱼荧光假单胞菌阳性血清、罗非鱼海豚链球菌阳性血清和罗非鱼鳗弧菌阳性血清;待测血清最大稀释度为1∶640;与无乳链球菌全菌包被ELISA检测方法比较,阳性率略低,符合率为83.43%。说明本研究建立的罗非鱼源无乳链球菌IgM抗体间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和准确性。

关键词：无乳链球菌 ScpB 罗非鱼 IgM ELISA

基于代谢组学的黄芩水提物防治罗非鱼无乳链球菌病作用机制研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第2期 111-118页

作者：滕婷李原乐韦宏宇陈鑫杜佳璇黄文博李恭贺郑喜邦吴文德广西大学动物科学技术学院南宁530004 广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心南宁530004 广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室南宁530004 广西高校动物疫病预防与控制重点实验室南宁530004

为了探讨黄芩水提物防治罗非鱼无乳链球菌病的作用机制,试验将104尾体重60 g左右的吉富罗非鱼随机分为4组,分别为空白对照组、阴性对照组、防治组和模型组,每组26尾。阴性对照组和防治组均饲喂含5%黄芩水提物的日粮,空白对照组和模型组... 详细信息

为了探讨黄芩水提物防治罗非鱼无乳链球菌病的作用机制,试验将104尾体重60 g左右的吉富罗非鱼随机分为4组,分别为空白对照组、阴性对照组、防治组和模型组,每组26尾。阴性对照组和防治组均饲喂含5%黄芩水提物的日粮,空白对照组和模型组饲喂基础日粮。于饲喂后第8天进行攻毒试验,空白对照组和阴性对照组腹腔注射灭菌生理盐水,防治组和模型组腹腔注射浓度为1.5×10~9 cfu/mL的无乳链球菌菌液,0.3 mL/尾,观察10 d,试验过程中记录各组临床症状及死亡情况,对濒死的试验鱼进行尾静脉采血,并对死亡试验鱼进行剖检,攻毒试验结束后计算各组的死亡率及5%黄芩水提物对防治组的保护率,并对其他试验鱼进行尾静脉采血。对各组血液进行液相色谱质谱(LC-MS)分析,通过构建主成分分析(PCA)模型和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型筛选差异代谢物,导入京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库后进行通路富集分析。结果表明:攻毒后,空白对照组和阴性对照组食欲佳,未出现异常症状,死亡率均为0,剖检未见明显异常。模型组行动迟缓,食欲减退,体表破溃出血,眼球突出,机体失去平衡,出现侧游或转圈游动等行为;剖检可见肝脏、脾脏、肠组织出现不同程度的水肿、出血,死亡率为95.45%。防治组先是出现与模型组相同的症状,部分鱼死亡,部分鱼症状有所缓解(食欲慢慢恢复正常,精神状态良好),死亡率为46.15%;经计算5%黄芩水提物对罗非鱼的保护率为51.65%。在正负离子模式下5组共检测到7652个离子峰,鉴定到998种代谢物。其中模型组与空白对照组之间的差异代谢物有348种,阴性对照组与空白对照组之间的差异代谢物有257种,治疗组与空白对照组之间的差异代谢物有241种,治疗组与模型组之间的差异代谢物有275种,治疗组与阴性对照组之间的差异代谢物有190种,阴性对照组与模型组之间的差异代谢物有377种。与空白对照组比较,模型组血清中N′-胆酰甘氨酸、喹啉-4,8-二醇、色氨酸、吲哚-3-乙酰胺、5-羟吲哚乙酸、雌二醇-17β-3-硫酸酯、可的松、N′-甲酰基犬尿氨酸、牛磺胆酸相对丰度不同程度降低,19-羟基烯二酮、脱氧皮质酮、11b-羟孕酮相对丰度不同程度升高。给予5%黄芩水提物干预后,防治组这12种代谢物相对丰度均发生了显著或极显著回调(P生物合成、胆固醇代谢及胆汁分泌等代谢通路。说明5%黄芩水提物能够有效减轻感染无乳链球菌的罗非鱼的临床症状并降低死亡率,且黄芩主要通过调节色氨酸代谢、类固醇激素的生物合成、胆固醇代谢、胆汁分泌等代谢通路发挥防治罗非鱼无乳链球菌病的作用。

关键词：吉富罗非鱼无乳链球菌黄芩血清代谢组学差异代谢物