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粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的分离纯化及酶学性质

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华东理工大学学报（自然科学版） 2008年第2期34卷 178-183,188页

作者：李震储炬庄英萍张嗣良袁中一华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

采用DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Butyl-Sepharose CL 4B疏水层析，从重组大肠杆菌DH5α菌体中分离纯化得到粪产碱杆菌青霉素G酰化酶（AfPGA）。经纯化，AfPGA纯度较粗酶提高50．6倍、比活达到212．7U／mg，经HPLC测定纯度为92．8％... 详细信息

采用DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Butyl-Sepharose CL 4B疏水层析，从重组大肠杆菌DH5α菌体中分离纯化得到粪产碱杆菌青霉素G酰化酶（AfPGA）。经纯化，AfPGA纯度较粗酶提高50．6倍、比活达到212．7U／mg，经HPLC测定纯度为92．8％，收率为78％。理化性质分析表明：AfPGA含有2个亚基（α亚基和β亚基，其Mw分别为2．90×10^4和5．92×10^4；AfPGA等电点约为7．9～8．0，最适pH约为10．0，并在pH〉7．0时表现出了稳定的催化活力。

关键词：粪产碱杆菌青霉素G酰化酶阴离子交换层析疏水层析分离纯化

维生素对乳酸菌细胞活性和代谢途径相关酶活性的影响

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华东理工大学学报（自然科学版） 2007年第3期33卷 330-335页

作者：邱伙琴徐国谦庄英萍储炬张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心(上海) 上海200237

研究了拟干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)发酵生产乳酸过程中,添加维生素对菌体生长、细胞活性、产酸,以及在碳流代谢中与乳酸生物合成密切相关的4种酶[乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸脱氢酶(PDC)和丙酮酸羧化酶(PC)... 详细信息

研究了拟干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)发酵生产乳酸过程中,添加维生素对菌体生长、细胞活性、产酸,以及在碳流代谢中与乳酸生物合成密切相关的4种酶[乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸脱氢酶(PDC)和丙酮酸羧化酶(PC)]活性的影响。结果显示:维生素添加促进了菌体生长,使乳酸产量提高了42.47%;同时降低了发酵过程中菌体的死亡率,降低的最大幅度可达53.46%;PFK和LDH的活性比对照有提高,最大幅度达62.30%和126.65%,PDC的活性在发酵中期也有一定的提高,但PC的活性变化很小。实验结果表明:组合维生素的添加可以提高乳酸菌的活性,同时使代谢通量有利于乳酸生成。

关键词： L.paracasei L-乳酸维生素酶活性

不同拷贝数及间隔肽序列对毕赤酵母分泌表达EXA的影响

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华东理工大学学报（自然科学版） 2008年第1期34卷 40-46页

作者：王晖钱江潮庄英萍储炬张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心(上海)上海200237

通过多拷贝串联表达，以及在分泌信号序列和目的蛋白N端之间插入几个氨基酸的间隔短肽，以提高exendin-4类似物串联体EXA在重组毕赤酵母中的分泌表达水平。实验结果表明：2～5个EXA串联插入均比单个EXA插入有利于提高表达水平，而4拷贝... 详细信息

通过多拷贝串联表达，以及在分泌信号序列和目的蛋白N端之间插入几个氨基酸的间隔短肽，以提高exendin-4类似物串联体EXA在重组毕赤酵母中的分泌表达水平。实验结果表明：2～5个EXA串联插入均比单个EXA插入有利于提高表达水平，而4拷贝EXA串联体的表达产物较多滞留在胞内。在EXA的N端增加间隔肽可促进蛋白分泌，与不合间隔肽序列的4拷贝EXA串联表达载体相比，含有糖基化住点（NTTEEGEPK）和肠激酶识别位点（DDDDK）间隔肽的插入，使蛋白表达水平分别提高了4倍和9倍。

关键词：间隔肽 exendin-4类似物多拷贝串联毕赤酵母分泌表达

傅里叶变换红外光谱法应用于水-乙醇溶液中海南霉素的测定

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高等学校化学学报 1999年第2期20卷 218-220页

作者：邱江丁乐洪叶勤张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

随着化学计量学方法处理光谱重叠和光谱采样技术的发展，红外光谱应用于多组份同时定量分析和过程分析的研究日益受到人们的关注［１～５］．海南霉素（Ｃ４７Ｈ７９Ｏ１５Ｎａ，分子量９０７．１２２）是国家一类新药，用于防治鸡球虫... 详细信息

随着化学计量学方法处理光谱重叠和光谱采样技术的发展，红外光谱应用于多组份同时定量分析和过程分析的研究日益受到人们的关注［１～５］．海南霉素（Ｃ４７Ｈ７９Ｏ１５Ｎａ，分子量９０７．１２２）是国家一类新药，用于防治鸡球虫病，易溶于有机溶剂，不溶于水．在实...

关键词： FTIR HNMS 偏最小二乘法有机相海南霉素测定

内酯酶产生菌的筛选及其催化拆分手性内酯的性能

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催化学报 2008年第10期29卷 997-1002页

作者：张仙潘江许建和华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

以γ-丁内酯系列化合物作为唯一碳源,通过富集培养从土壤中分离得到180株产内酯酶的菌株.经反复筛选,从中挑选出两株内酯水解活性和选择性均较高的菌株.经鉴定,这两株真菌皆为镰孢霉菌属,分别命名为Fusarium moniliforme ECU2001和Fusar... 详细信息

以γ-丁内酯系列化合物作为唯一碳源,通过富集培养从土壤中分离得到180株产内酯酶的菌株.经反复筛选,从中挑选出两株内酯水解活性和选择性均较高的菌株.经鉴定,这两株真菌皆为镰孢霉菌属,分别命名为Fusarium moniliforme ECU2001和Fusarium proliferatum ECU2002.对这两株菌的产酶特性进行了研究,发现ECU2001的内酯酶属于胞内酶,而ECU2002的内酯酶同时存在于胞内和胞外.选择戊二醛交联的方法对这两株菌进行了细胞固定化,结果表明,ECU2002固定化细胞的活力、选择性和稳定性都优于***2002固定化细胞反应的适宜温度和pH分别为50℃和7.0-7.5.考察了ECU2002固定化细胞的底物专一性,发现底物为α-羟基-γ-丁内酯时,固定化细胞的活性最高,其催化速率是γ-丁内酯的54.3倍.利用ECU2002固定化细胞催化α-羟基-γ-丁内酯的对映选择性水解,固定化细胞重复使用10批后活力仍保持为初始活力的92.8%,水解产物经内酯化后得到（R）-α-羟基-γ-丁内酯的光学纯度为92.8%-96.1%ee.

关键词：内酯酶串珠镰孢菌ECU2001 层出镰孢菌ECU2002 固定化细胞 α-羟基-γ-丁内酯

重组毕赤酵母表达猪胰岛素前体代谢参数分析和动力学模型

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华东理工大学学报（自然科学版） 2005年第3期31卷 300-304页

作者：陈文郭美锦储炬庄英萍张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

采用发酵过程参数相关分析理论,分析了毕赤酵母在不同发酵阶段利用不同碳源时的生理代谢参数变化特征。同时,研究了不同比生长速率下重组毕赤酵母表达猪胰岛素前体补料分批发酵过程,建立蛋白表达阶段的细胞生长非结构模型,结果表明:比... 详细信息

采用发酵过程参数相关分析理论,分析了毕赤酵母在不同发酵阶段利用不同碳源时的生理代谢参数变化特征。同时,研究了不同比生长速率下重组毕赤酵母表达猪胰岛素前体补料分批发酵过程,建立蛋白表达阶段的细胞生长非结构模型,结果表明:比生长速率和甲醇浓度符合Monod方程,最大比生长速率(μmax)为0.101h-1,基质的半饱和常数(Ks)为0.252g/L,细胞得率系数YX/S=0.386g/g,细胞维持系数m=0.011g/(g·h)。当比生长速率为0.016h-1时猪胰岛素前体(PIP)最大比形成速率(qp,max)达0.098mg/(g·h)。该模型能较好预测毕赤酵母表达阶段细胞生长和PIP表达的发酵趋势,用其控制发酵过程,目标蛋白PIP产量为优化前的1.5倍,达0.976g/L。

关键词：重组毕赤酵母猪胰岛素前体代谢参数相关分析动力学模型

重组Pichia酵母(Mut^S)发酵过渡阶段关键酶活分析

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华东理工大学学报（自然科学版） 2004年第4期30卷 392-397页

作者：胡光星郭美锦储炬杭海峰庄英萍张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海上海200237

重组Pichia酵母表达系统的发酵存在从利用甘油为碳源生长到利用甲醇为碳源表达外源蛋白的发酵表达过渡阶段。Pichia酵母过渡阶段碳源代谢途径关键酶酶活分析表明:甲醇诱导3hAOX2酶活为0,4h时突然增加到0.05U,继续诱导,酶活缓慢增加;在... 详细信息

重组Pichia酵母表达系统的发酵存在从利用甘油为碳源生长到利用甲醇为碳源表达外源蛋白的发酵表达过渡阶段。Pichia酵母过渡阶段碳源代谢途径关键酶酶活分析表明:甲醇诱导3hAOX2酶活为0,4h时突然增加到0.05U,继续诱导,酶活缓慢增加;在过渡阶段甲醛脱氢酶和6-P-葡萄糖脱氢酶分别增加了6.1倍、2.5倍,而丙酮酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶分别下降为原酶活的29.4%及16.4%,表明甲醇诱导后甲醇完全氧化代谢途径得到强化,而糖酵解途径和三羧酸循环途径代谢作用减弱。

关键词：重组巴氏毕赤酵母代谢途径过渡阶段植酸酶

用于生物反应器多尺度问题研究的数据采集系统

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华东理工大学学报（自然科学版） 2003年第3期29卷 259-263页

作者：张恂张伟平张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

本文针对生物反应器中活体细胞大规模培养过程中多尺度问题 ,重点讨论了有关数据采集系统的研制 ,其中包括参数与传感器系统配置与要求 ,计算机软硬件配置与设计 ,以及过程数据远程通讯技术等。并根据以上原理设计制造了专门用于生物反... 详细信息

本文针对生物反应器中活体细胞大规模培养过程中多尺度问题 ,重点讨论了有关数据采集系统的研制 ,其中包括参数与传感器系统配置与要求 ,计算机软硬件配置与设计 ,以及过程数据远程通讯技术等。并根据以上原理设计制造了专门用于生物反应器中多尺度问题研究的实验室FUS-5 0 L(A)新概念发酵罐 ,并研制了中试与生产规模数据采集系统。本装置用于不同发酵产品的过程优化时 ,发现了一些过去以单尺度观点研究时容易忽略的问题。

关键词：生物反应器多尺度数据采集系统远程信息处理发酵过程

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金色链霉菌培养条件优化研究

华东理工大学学报（自然科学版） 2004年第1期30卷 43-46页

作者：扶教龙张明樊涛储炬张嗣良华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室国家生化工程技术研究中心上海200237

金色链霉菌摇瓶培养适宜的接种量为3.2%、接种时间为25h、温度在28°C左右。4g/L的硫酸铵和0.043g/L无机磷有利于产物金霉素(CTC)合成。酵母膏的加入对CTC的合成有一定促进作用,以3g/L的效果较好。在50L发酵罐中,较低浓度的无机磷对CTC... 详细信息

金色链霉菌摇瓶培养适宜的接种量为3.2%、接种时间为25h、温度在28°C左右。4g/L的硫酸铵和0.043g/L无机磷有利于产物金霉素(CTC)合成。酵母膏的加入对CTC的合成有一定促进作用,以3g/L的效果较好。在50L发酵罐中,较低浓度的无机磷对CTC发酵有利;酵母膏的加入量以4.2g/L最佳,产物效价比酵母膏加入量为2.8g/L和5.6g/L时高3.1%和9.7%,优化发酵过程的CTC产率提高了18%。

关键词：金色链霉菌金霉素发酵优化培养条件