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经方“丹栀逍遥丸”对代谢相关脂肪性肝病小鼠巨噬细胞抗慢炎状态的调节作用

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辽宁中医杂志 2024年

作者：王丹丛培玮张越时孙莹莹辽宁中医药大学医学检验学院

目的：评价经方“丹栀逍遥丸”（JF-DZXYW）对代谢相关脂肪性肝病小鼠巨噬细胞抗慢性炎症的调控作用，对巨噬细胞吞噬能力、巨噬细胞表面标志物MHC-Ⅱ、CD86、CD80、TLR4表达及巨噬细胞内活性氧表达（ROS）的影响，并阐述其诱导免疫系... 详细信息

目的：评价经方“丹栀逍遥丸”（JF-DZXYW）对代谢相关脂肪性肝病小鼠巨噬细胞抗慢性炎症的调控作用，对巨噬细胞吞噬能力、巨噬细胞表面标志物MHC-Ⅱ、CD86、CD80、TLR4表达及巨噬细胞内活性氧表达（ROS）的影响，并阐述其诱导免疫系统发挥抗炎症作用。方法：40只体重18～22g雄性昆明种小鼠，随机分为对照组（生理盐水组）、JF-DZXYW低剂量组（125μg/ml）、JF-DZXYW中剂量组（250μg/ml）和JF-DZXYW高剂量组（500μg/ml），灌胃0.4 ml/(t·d)，共15d。第16d小鼠行腹腔注射0.2ml 10%蛋白胨，3d后小鼠腹腔注射新配制的5%鸡红细胞各0.5ml，提取小鼠腹腔巨噬细胞进行巨噬细胞吞噬功能检测、细胞表面标志物流式细胞分析及ROS表达检测。结果：三个剂量组的JF-DZXYW汤剂吞噬百分率及吞噬指数均显著高于对照组（p＜0.01）。JF-DZXYW低、中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞表面标志物MHC-Ⅱ，CD86，CD80表达明显高于对照组（p＜0.01），JF-DZXYW中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞表面标志物TLR4表达均明显高于对照组（p＜0.01）。JF-DZXYW低剂量组小鼠腹腔巨噬细胞内ROS表达明显高于对照组（p＜0.05），JF-DZXYW中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞内ROS表达均明显高于对照组（p＜0.01）。结论：JF-DZXYW可以通过上调巨噬细胞功能、促巨噬细胞表面标志物MHC-Ⅱ、CD86、CD80、TLR4及巨噬细胞内活性氧表达提升机体免疫功能从而抑制慢性炎症状态。

关键词：代谢相关脂肪性肝病经方“丹栀逍遥丸” 巨噬细胞慢性炎症

多种有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：李洋洋崔琳张宇彤郑佳慧艾金霞北华大学医学技术学院

目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法 N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记；优... 详细信息

目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法 N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记；优化试纸条工作参数，并进行性能测试。结果抗血清效价在1：32～1：64之间，蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量（Mr）25000和55000处出现目的条带，纯度较好；试纸条反应时间在5～10 min，样本检测限为200 ng/mL，特异性及准确性良好，试纸条有效期为6个月。结论建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法，适合大量样本的现场初筛。

关键词：乙酰胆碱酯酶多克隆抗体有机磷农药胶体金试纸条免疫层析法

多菌灵人工抗原的合成及其鼠源性多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第2期40卷 163-167页

作者：张宇彤李洋洋郑佳慧艾金霞北华大学医学技术学院吉林吉林132013

目的合成多菌灵人工抗原,制备多菌灵多克隆抗体并鉴定其特性。方法利用混合酸酐法引入羧基制备多菌灵半抗原。将小分子半抗原与大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成多菌灵人工抗原和包被抗原,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SD... 详细信息

目的合成多菌灵人工抗原,制备多菌灵多克隆抗体并鉴定其特性。方法利用混合酸酐法引入羧基制备多菌灵半抗原。将小分子半抗原与大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成多菌灵人工抗原和包被抗原,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行鉴定。用制备的人工抗原免疫小鼠获得抗多菌灵多克隆抗体,利用间接ELISA对抗体效价以及特异性进行测定。结果成功制备多菌灵人工抗原。免疫小鼠后获得的抗体效价可达1:12800。抗体对多菌灵的半数抑制剂量(IC_(50))为0.107μg/mL,且与苯菌灵、噻菌灵的交叉反应率均<1%。结论成功获得高敏感性、高特异性的多克隆抗体,为多菌灵残留快速检测方法的建立奠定了基础。

关键词：多菌灵人工抗原多克隆抗体

双荧光标记的人高骨转移肺腺癌细胞株的建立及其转录组学特征分析

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中国肺癌杂志 2024年第4期27卷 257-265页

作者：陆悦仇荣邓妍刘星羽杜玉珍上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海交通大学医学院附属第六人民医院医学检验科上海201306

背景与目的骨是肺腺癌常见的转移部位,但肺腺癌骨转移的机制尚不明确。目前肺腺癌骨转移机制研究缺乏易于示踪且稳定高骨转移的肺腺癌细胞模型,因此,本研究旨在建立绿色荧光蛋白(green f luorescent protein,GFP)和萤火虫荧光素酶(firef... 详细信息

背景与目的骨是肺腺癌常见的转移部位,但肺腺癌骨转移的机制尚不明确。目前肺腺癌骨转移机制研究缺乏易于示踪且稳定高骨转移的肺腺癌细胞模型,因此,本研究旨在建立绿色荧光蛋白(green f luorescent protein,GFP)和萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,LUC)双标记的人高骨转移肺腺癌细胞株,为肺腺癌骨转移的研究提供新的实验工具。方法人肺腺癌细胞系A549-GFP-LUC经左心室注射至裸鼠体内构建骨转移模型,经连续3次体内驯化,获取人高骨转移肺腺癌细胞株A549-GFP-LUC-BM3;CCK-8(cell counting kit-8)、克隆形成实验比较A549-GFP-LUC-BM3细胞株和亲本细胞的体外增殖能力,划痕实验、Transwell实验以及Western blot比较迁移和侵袭能力;并进一步将A549-GFP-LUC-BM3细胞和亲本细胞行测序转录组学分析。结果成功建立人高骨转移肺腺癌细胞A549-GFP-LUC-BM3,相较于亲本细胞,该细胞骨转移发生率显著提高,且体外增殖、迁移和侵袭能力显著增强。转录组学测序结果显示,相较于亲本细胞,A549-GFP-LUC-BM3细胞中共筛选到差异基因2954个,其中1021个基因上调,1933个基因下调;基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集显示差异基因主要定位于细胞外周、质膜以及细胞外基质等细胞组分,分子功能主要富集在信号受体结合、钙离子结合和细胞外基质结构成分等,生物过程富集在细胞黏附和生物黏附等;京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析显示差异基因在细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)对外源性物质的代谢、视黄醇代谢、细胞黏附分子、CYP对药物代谢、类固醇激素的生物合成以及核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路上显著富集。结论成功建立GFP和LUC双标记的人高骨转移肺腺癌细胞株,该细胞株在生物学行为水平和转录组测序水平均提示具有高骨转移潜能。

关键词：肺肿瘤骨转移动物模型细胞株转录组学分析

分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin真核表达载体的构建及杀菌试验

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第1期44卷 74-80页

作者：席志阳宋通王文涛吴文潇付玉荣伊正君山东第二医科大学医学检验学院潍坊261053 山东第二医科大学基础医学院潍坊261053

目的构建分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin融合蛋白真核表达载体,通过细胞感染模型研究其在胞内对结核分枝杆菌的杀伤效果。方法构建原核重组质粒pET32a-LysinB并诱导表达,纯化蛋白后制备多克隆抗体;构建真核重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/... 详细信息

目的构建分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin融合蛋白真核表达载体,通过细胞感染模型研究其在胞内对结核分枝杆菌的杀伤效果。方法构建原核重组质粒pET32a-LysinB并诱导表达,纯化蛋白后制备多克隆抗体;构建真核重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin并转染进单核巨噬细胞RAW264.7,经制备的LysinB多克隆抗体进行表达鉴定后,建立细胞感染模型并通过抗酸染色和菌落计数检测LysinB/Holin融合蛋白的杀菌效果。结果成功制备LysinB的多克隆抗体。重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin在真核细胞中有效表达LysinB/Holin融合蛋白且对细胞无明显毒性。LysinB/Holin融合蛋白可有效杀伤胞内的结核分枝杆菌。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin对胞内结核分枝杆菌有较好的杀伤效果,且对细胞无明显毒性,具有治疗结核病的潜能。

关键词：结核分枝杆菌噬菌体D29 Lysin B Holin

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌生物膜形成与外排泵基因AdeABC表达的相关性研究

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中国抗生素杂志 2024年

作者：潘蓓珍刘岩宿建胜杨继飞姜菲菲孙丽媛北华大学医学技术学院临床病原学检验教研室

目的研究鲍曼不动杆菌的生物膜形成，以及浮游态和生物膜状态下对外排泵基因AdeABC的相对表达量作用于碳青霉烯类抗生素耐药机制的影响。方法将菌株经药物敏感性试验分为碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)组和碳青霉烯类敏感鲍曼不动... 详细信息

目的研究鲍曼不动杆菌的生物膜形成，以及浮游态和生物膜状态下对外排泵基因AdeABC的相对表达量作用于碳青霉烯类抗生素耐药机制的影响。方法将菌株经药物敏感性试验分为碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)组和碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌(CSAB)组，采用结晶紫染色法检测两组生物膜形成能力；通过微量肉汤稀释法分别测定两组对亚胺培南的MIC、MBIC值，并计算MBIC/MIC的比值进一步比较分析生物膜菌和浮游菌的耐药性；同时提取CRAB组浮游态和生物膜态的RNA，通过RT-qPCR检测外排泵基因AdeABC相对表达量。结果 35株标本的生物膜阳性率为91.43%，其中CRAB组生物膜的阳性检出率为92%，生物膜阴性、弱阳性、阳性和强阳性分别占8%、48%、36%和8%。MBIC/MIC比值显示，形成生物膜后，鲍曼不动杆菌的耐药能力呈现不同程度的增加，CSAB组的耐药增加幅度以2倍的菌株最多；CRAB组的增加幅度以4倍的菌株最多。同时CRAB组RT-qPCR结果显示，生物膜较浮游态相比，外排泵基因adeA和adeB的相对表达量明显增高(P0.05)。结论鲍曼不动杆菌碳青霉烯类耐药与生物膜密切相关，且生物膜态的鲍曼不动杆菌较浮游态可促进外排泵基因AdeABC的表达从而增强碳青霉烯类抗生素的耐药性。

关键词：鲍曼不动杆菌亚胺培南生物膜外排泵

G-四链体结构与DNA甲基化修饰的交互影响：当前研究与未来展望

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化学通报 2024年

作者：周鑫辰张卓董姝含靳茁战星彤王鹤霖杨舒惠刘丽梅北华大学医学技术学院微生物学检验教研室

基因表达调控是生物学中复杂而关键的过程，涉及细胞内外多因素及DNA结构。DNA双螺旋是基本形式，但非规范DNA结构如G-四链体（G4）在基因组关键区域中广泛存在，参与调节基因表达、维持染色体稳定性和影响端粒伸长。G4同时存在于DNA和... 详细信息

基因表达调控是生物学中复杂而关键的过程，涉及细胞内外多因素及DNA结构。DNA双螺旋是基本形式，但非规范DNA结构如G-四链体（G4）在基因组关键区域中广泛存在，参与调节基因表达、维持染色体稳定性和影响端粒伸长。G4同时存在于DNA和RNA中，与基因表达调控密切相关。DNA甲基化是表观遗传标记，近年研究发现其与多种疾病关联，影响细胞功能。本文综述G4与DNA甲基化的关系，特别在CpG（Cytosine-phosphate-Guanine）岛区域的相互影响，为相关疾病的预防和治疗提供了新策略。

关键词： G-四链体 DNA甲基化 CpG岛 DNA复制染色质结构状态

基于细胞焦亡与免疫相关基因构建及验证肝细胞癌预后风险模型

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中国免疫学杂志 2024年第5期40卷 981-991页

作者：谢彬任婷婷贵州医科大学医学检验学院临床生化教研室贵阳550004

目的:利用生物信息学方法构建并验证细胞焦亡与免疫相关基因的肝细胞癌预后风险模型,根据其风险评分探索免疫相关性特征,以指导个性化免疫治疗。方法:从TCGA、GEO官网分别下载TCGA-LIHC和GSE14520基因表达谱,从INNATEDB和IMMPORT官网下... 详细信息

目的:利用生物信息学方法构建并验证细胞焦亡与免疫相关基因的肝细胞癌预后风险模型,根据其风险评分探索免疫相关性特征,以指导个性化免疫治疗。方法:从TCGA、GEO官网分别下载TCGA-LIHC和GSE14520基因表达谱,从INNATEDB和IMMPORT官网下载免疫相关基因。以TCGA为训练组,GEO为测试组,对训练组细胞焦亡基因表达谱采用Cox回归分析,筛选预后相关基因进行共识聚类分组,提取分组间差异基因与免疫相关基因的交集基因,对交集基因应用单因素Cox和Lasso回归分析,得到预后相关风险评分模型。根据训练组风险中位值划分高低风险组,利用测试组验证模型可行性,最后探索训练组富集分析(GO、KEGG、GSEA)、免疫相关性分析及模型基因蛋白表达情况。结果:共筛选出9个可靠的风险模型基因(ICAM1、S100P、FABP3、CCL20、HRG、IGHM、SPP1、C4BPA、C6)。GO富集分析显示风险差异基因主要参与各种代谢过程。KEGG富集分析显示风险差异基因主要参与补体和凝血级联信号通路。GSEA富集分析显示高风险组与致癌途径的激活密切相关。在免疫浸润、免疫相关通路及免疫检查点中发现高低风险组具有显著差异。HPA数据库证明ICAM1、S100P、SPP1模型基因免疫组化表达存在明显差异。结论:9个基因组成的风险模型可能成为肝细胞癌发生、发展及预后相关的潜在生物标志物,并为优化肝细胞癌的诊治提供新线索。

关键词：肝细胞癌细胞焦亡免疫相关基因预后免疫浸润

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基于生物信息学分析探索PCDHGB4在肺鳞癌发生中的作用

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中国肺癌杂志 2024年第3期27卷 199-215页

作者：鲁瑞娇谢伊代·阿不都海力力李玉霞宁杰冯阳春新疆医科大学第三临床医学院(附属肿瘤医院)医学检验中心乌鲁木齐830011

背景与目的肺鳞状细胞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的亚型之一。有报道原钙黏蛋白γ家族的成员能通过抑制Wnt信号通路来调节肿瘤细胞的生长,原钙黏蛋白γ B4 (protocadheri... 详细信息

背景与目的肺鳞状细胞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的亚型之一。有报道原钙黏蛋白γ家族的成员能通过抑制Wnt信号通路来调节肿瘤细胞的生长,原钙黏蛋白γ B4 (protocadherin-gamma subfamily B4,PCDHGB4)作为家族成员在LUSC中的研究少有报道,本研究旨在通过生物信息学方法探究PCDHGB4在LUSC发生发展中的作用及潜在的预后价值。方法应用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、cBioPortal和UALCAN等数据库,对PCDHGB4在LUSC中的表达与预后、临床病理特征、免疫细胞浸润、免疫调节基因、免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)和甲基转移酶等进行分析。单细胞水平的研究对细胞亚型的聚类结果和PCDHGB4在不同免疫细胞亚群中的表达情况进行了分析。此外,我们还比较了LUSC组织与正常组织中PCDHGB4的启动子甲基化水平,并对其进行了蛋白质-蛋白质相互作用和突变分析。最后基于差异表达基因进行富集分析。结果生信分析结果显示PCDHGB4在LUSC组织的表达水平低于正常组织。生存分析显示,PCDHGB4表达增加与患者较差的预后有关。单细胞分析显示,PCDHGB4主要在T细胞、单核细胞或巨噬细胞以及树突状细胞中表达,进一步发现PCDHGB4在肿瘤免疫中发挥着不可忽视的作用,并证实了PCDHGB4与免疫检查点途径基因、免疫调节基因和甲基转移酶有一定的相关性。此外,通过富集分析发现PCDHGB4参与了癌症相关的多条通路。结论PCDHGB4在LUSC中低表达,PCDHGB4与患者预后不良有关,并且PCDHGB4与肿瘤免疫细胞浸润和通路密切相关。PCDHGB4可能是LUSC潜在的预后标志物和免疫治疗新靶点。

关键词： PCDHGB4 肺肿瘤预后