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SNHG3介导的自噬促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

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中国药理学通报 2024年第6期40卷 1097-1104页

作者：陈远香余伙梅刘施妍廖德宇余涛杨诗雨曾涛张彦重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨LncRNA SNHG3调控自噬对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭及EMT的影响。方法使用生物信息学方法及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析SNHG3在乳腺癌及乳腺癌细胞MCF-7中的表达;采用RNAi技术构建敲低SNHG3(siSNHG3)及对照(siNC)的MC... 详细信息

目的探讨LncRNA SNHG3调控自噬对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭及EMT的影响。方法使用生物信息学方法及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析SNHG3在乳腺癌及乳腺癌细胞MCF-7中的表达;采用RNAi技术构建敲低SNHG3(siSNHG3)及对照(siNC)的MCF-7重组细胞株,Western blot及细胞免疫荧光检测自噬标志;使用自噬体-溶酶体融合抑制剂BafA1或早期自噬体形成抑制剂3-MA处理敲低或不敲低SNHG3的MCF-7细胞,Western blot检测LC3-Ⅱ或p62表达,观察对自噬囊泡形成或自噬降解的影响;克隆形成实验、CCK-8实验、划痕愈合实验及Transwell实验检测siSNHG3联合或不联合BafA1或3-MA对MCF-7细胞增殖、横向迁移、纵向迁移及侵袭的影响,Western blot检测其对MCF-7细胞EMT的影响。结果生物信息学分析及RT-qPCR证实,SNHG3在乳腺癌及乳腺癌细胞MCF-7中高表达;Western blot及细胞免疫荧光证实,敲低SNHG3可激活乳腺癌的自噬;克隆形成、CCK-8、划痕愈合及Transwell实验证实,下调SNHG3表达可通过激活自噬抑制肿瘤的增殖、迁移和侵袭;Western blot证实,SNHG3通过负调控自噬促进乳腺癌的EMT进程。结论SNHG3在乳腺癌中异常高表达并负调控自噬,并可通过负调控自噬增强乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT过程,提示SNHG3是乳腺癌诊断和治疗的潜在靶点。

关键词：乳腺癌长链非编码RNA SNHG3 自噬增殖迁移侵袭 EMT

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迷走神经活化的胆碱能抗炎通路在糖尿病肾病中的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第3期40卷 341-347页

作者：张萍杨博常晓彤河北北方学院临床检验诊断学重点实验室河北张家口075000

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病患者死亡的主要驱动因素,其患病率在全球范围内呈上升趋势。DN的发生发展与复杂的慢性低度炎症密切相关。在糖尿病患者中,高血糖和高血脂会导致损伤相关分子模式的释放,触发Janus激酶/信号... 详细信息

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病患者死亡的主要驱动因素,其患病率在全球范围内呈上升趋势。DN的发生发展与复杂的慢性低度炎症密切相关。在糖尿病患者中,高血糖和高血脂会导致损伤相关分子模式的释放,触发Janus激酶/信号转导与转录激活子3(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription 3,JAK/STAT3)、核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)-蛋白质激酶B(protein kinase B,PKB或Akt)等促炎细胞信号通路的活化,以及白介素-1(interleukin-1,IL-1)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等促炎细胞因子的产生,这些促炎因子是导致肾损伤的关键致病介质,从糖尿病的初始阶段到晚期肾衰竭中均发挥着多重作用。迷走神经是自主神经系统的关键组成部分,其通过介导胆碱能抗炎通路(cholinergic anti-inflammatory pathway,CAP)发挥抗炎作用。在DN时,迷走神经活性下降,胆碱能抗炎系统受损,促炎与抗炎反应失调,肾的炎症和损伤加重。而利用神经免疫相互作用,通过迷走神经刺激术激活CAP,则可调控炎症信号通路及炎性细胞因子,改善DN的炎症和损伤状态。本文将对炎症细胞因子和炎症信号通路在DN发生发展中的作用,以及迷走神经活化的胆碱能抗炎通路对DN的改善作用进行综述,以期为DN等慢性炎症相关疾病的治疗策略研究及应用提供理论基础。

关键词：糖尿病肾病炎症迷走神经胆碱能抗炎通路

胆碱能抗炎途径在肥胖介导的胰岛素抵抗中的作用

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中国免疫学杂志 2024年第4期40卷 888-893页

作者：周璐瑾刘新月常晓彤河北北方学院临床检验诊断学重点实验室张家口075000

肥胖与糖尿病、高血压、心绞痛和关节炎等多种疾病有关,已成为日益严重的全球性公共健康问题。慢性低度炎症和免疫系统激活参与肥胖相关胰岛素抵抗发病机制。胰岛素是唯一可降低血糖的激素,通过胰岛素信号通路发挥作用。正常情况下,机... 详细信息

肥胖与糖尿病、高血压、心绞痛和关节炎等多种疾病有关,已成为日益严重的全球性公共健康问题。慢性低度炎症和免疫系统激活参与肥胖相关胰岛素抵抗发病机制。胰岛素是唯一可降低血糖的激素,通过胰岛素信号通路发挥作用。正常情况下,机体促炎系统和抗炎系统通过相互作用维持机体免疫平衡。促炎和抗炎反应动态平衡决定了炎症发生、发展与结局。炎症信号通路激活可诱导中枢和外周组织胰岛素抵抗,Toll样受体4(TLR4)介导的信号通路是产生促炎反应的重要通路之一。已知高脂饮食与慢性低度炎症过程有关,饱和脂肪酸可激活TLR4受体,刺激炎症细胞因子表达,抑制胰岛素信号传导。抗炎系统中,胆碱能抗炎途径(CAP)是一条神经免疫调节途径,具有快速、可逆、准确且能适应炎症输入信号变化等特点,主要由迷走神经、脾脏与脾交感神经、乙酰胆碱和α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)组成,CAP激活可改善肥胖诱导的炎症和胰岛素抵抗。本文围绕肥胖介导的炎症、CAP抗炎途径及其与胰岛素抵抗的关系进行综述,丰富胰岛素抵抗的分子免疫机制,为胰岛素抵抗相关疾病抗炎诊疗研究提供基础。

关键词：胰岛素抵抗炎症信号通路胆碱能抗炎途径

硫胺素响应性巨幼细胞贫血综合征的文献计量可视化分析

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中华预防医学杂志 2024年第7期58卷 1069-1075页

作者：高露兰林发全广西医科大学第一附属医院检验科广西高校临床检验诊断学重点实验室南宁530021

对硫胺素响应性巨幼细胞贫血综合征(thiamine-responsive megaloblastic anemia syndrome,TRMA)研究领域的现状、研究热点、演变趋势和未来展望进行可视化分析,为TRMA发病机制的后续研究与防治策略提供新的思路和方向。本研究以Web of S... 详细信息

对硫胺素响应性巨幼细胞贫血综合征(thiamine-responsive megaloblastic anemia syndrome,TRMA)研究领域的现状、研究热点、演变趋势和未来展望进行可视化分析,为TRMA发病机制的后续研究与防治策略提供新的思路和方向。本研究以Web of Science核心数据库为文献来源,以1997—2023年间发表的TRMA相关文献记录为研究对象,利用R软件及Citexs数据库对研究内容进行可视化分析和讨论。结果显示,1997—2023年共发表相关文献89篇,文献年均发文量3篇。按国家分类,发现美国和以色列等国家和机构发表论文较多。通过关键词频率分析,糖尿病、耳聋、硫胺素响应性巨幼细胞贫血及溶质载体家族19成员2(SLC19A2)基因突变等关键词出现的频率高,表明至今以上述关键词作为主要研究方向,凸显了对TRMA的机制探索逐渐达成共识。综上,当前TRMA以糖尿病、耳聋、硫胺素响应性巨幼细胞贫血等为研究热点,而核心基因SLC19A2的研究可能成为未来分子研究的新突破点。

关键词：硫胺素响应性巨幼细胞贫血综合征文献计量分析溶质载体家族19成员2

KDM4A通过下调BMP9促进乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移和侵袭

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中国癌症杂志 2024年第2期34卷 176-184页

作者：陈远香余涛杨诗雨曾涛魏兰张彦重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

背景与目的:外源性骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)能抑制人乳腺癌的恶性进展,但其在乳腺癌中常异常低表达。本研究拟探索表观遗传修饰的组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶4A(lysine specific demethylase 4A,KDM4A)在... 详细信息

背景与目的:外源性骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)能抑制人乳腺癌的恶性进展,但其在乳腺癌中常异常低表达。本研究拟探索表观遗传修饰的组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶4A(lysine specific demethylase 4A,KDM4A)在乳腺癌中的表达及作用,探究KDM4A与BMP9之间的关系及其可能的调节机制。方法:通过生物信息学方法分析KDM4A在乳腺癌中的表达及其与BMP9之间的关系,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)进行验证;采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)验证KDM4A对BMP9的调控作用,采用RNA稳定性实验及CHX蛋白稳定性实验验证KDM4A对BMP9表达的影响。采用RNA干扰技术及敲低BMP9的腺病毒构建转染KDM4A小干扰RNA(siKDM4A)或感染siBMP9腺病毒(Ad-siBMP9)的外源性重组MDA-MB-231细胞,采用划痕愈合实验、transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭能力。结果:生物信息学分析结果表明,KDM4A在乳腺癌中的表达明显高于正常组织,KDM4A与BMP9在乳腺癌中的表达呈负相关关系。RTFQ-PCR及Western blot结果显示,KDM4A在不同乳腺癌细胞系中均高表达,敲低KDM4A可显著上调BMP9。ChIP实验证实,KDM4A可显著富集于BMP9基因启动子区域,降低其组蛋白赖氨酸36号位而不是4号位甲基化水平,从而沉默BMP9表达。RNA稳定性实验及CHX蛋白稳定性实验证实,KDM4A对BMP9的mRNA表达无明显影响,但可影响其蛋白降解。敲低KDM4A后,乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移及侵袭能力均受到明显抑制,而这种作用可被敲低BMP9所部分逆转。结论:KDM4A在乳腺癌组织及乳腺癌细胞MDA-MB-231中高表达,并可通过下调BMP9基因启动子区域组蛋白甲基化水平沉默其表达,以及在蛋白水平而不是mRNA水平影响BMP9稳定性,促进乳腺癌的迁移和侵袭。

关键词：乳腺癌赖氨酸特异性去甲基化酶4A 组蛋白去甲基化骨形态发生蛋白9

四肽重复结构域36(TTC36)通过增强IκBα的表达抑制NF-κB信号通路的激活抑制HK2人肾小管上皮细胞的炎症反应

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第8期 673-680页

作者：彭瑞严鑫李千音重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室

目的研究四肽重复结构域(TTC36)对HK2人肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在的机制。方法采用慢病毒感染法建立过表达TTC36的HK2稳转细胞系，转入空载质粒CMV-Flag作为对照。实时荧光定量PCR检测HK2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一... 详细信息

目的研究四肽重复结构域(TTC36)对HK2人肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在的机制。方法采用慢病毒感染法建立过表达TTC36的HK2稳转细胞系，转入空载质粒CMV-Flag作为对照。实时荧光定量PCR检测HK2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、 CC趋化因子配体2(CCL2)、IL-1β以及核因子κB抑制物α(IκBα)、核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平。流式细胞术检测细胞凋亡，CCK-8法检测细胞增殖。Western blot法检测iNOS、TNF-α、胱天蛋白酶3(caspase-3)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)、增殖细胞核抗原(PCNA)、闭锁小带1(ZO-1)、核因子κB(NF-κB)信号通路中IκBα、 NF-κB p65、磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白表达。放线菌酮(CHX)、蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞后，Western blot法检测IκBα的蛋白表达量。结果与对照组相比，HK2细胞过表达TTC36后，炎症介质表达减少；细胞凋亡率降低以及c-caspase-3、 BAX表达减弱；细胞增殖加快，PCNA和ZO-1的表达增强；IκBα表达上调，NF-κB p65、p-NF-κB p65表达下调，胞质和胞核中的NF-κB p65表达量均减少。CHX处理后过表达TTC36延长IκBα的半衰期，而MG132可恢复过表达TTC36带来的IκBα的变化。结论过表达TTC36抑制HK2细胞的炎症反应，减少细胞凋亡，促进增殖，加强紧密连接，其机制可能是通过增强IκBα的表达抑制NF-κB信号通路的激活从而减轻炎症反应带来的细胞损伤。

关键词：四肽重复结构域36(TTC36) 肾小管上皮细胞炎症核因子κB(NF-κB)

微小脲原体UP3-RS02445生物信息学分析及单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：陈恒鑫贾晓晖李雅惠周艳贾天军李萍河北北方学院临床检验诊断学重点实验室河北北方学院病原生物与免疫学研究所

目的对微小脲原体UP3-RS02445功能进行生物信息学分析，进而构建其重组表达载体，并制备单克隆抗体。方法利用生物信息学分析软件，对UP3-RS02445蛋白功能进行分析。构建UP3-RS02445重组表达载体，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）... 详细信息

目的对微小脲原体UP3-RS02445功能进行生物信息学分析，进而构建其重组表达载体，并制备单克隆抗体。方法利用生物信息学分析软件，对UP3-RS02445蛋白功能进行分析。构建UP3-RS02445重组表达载体，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导并纯化蛋白免疫雌性BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备抗UP3-RS02445单克隆抗体，分别使用Westernblot和ELISA方法检测单克隆抗体的特异性和效价。结果生物信息学分析表明，UP3-RS02445蛋白由201个氨基酸组成，无跨膜结构域和信号肽，属于非分泌蛋白。成功构建UP3-RS02445重组表达载体并能够诱导重组蛋白的大量表达，细胞融合后经ELISA和Westernblot筛选获得两株分泌UP3-RS02445mAb的杂交瘤细胞（A1H5和A4E2）。ELISA结果显示单克隆抗体的效价为1:2560，Westernblot和免疫荧光技术结果均表明单克隆抗体可与UP3-RS02445蛋白特异性结合。两株单克隆抗体的重链亚型为IgG1，轻链亚型为Kappa型。结论成功制备了特异性强、效价高的UP3-RS02445单克隆抗体，为后续UP诊断试剂的开发及蛋白功能的研究奠定了基础。

关键词：微小脲原体(UP) 生物信息学原核表达蛋白纯化单克隆抗体

c-abl激酶在阿尔茨海默病发病及治疗中的作用研究进展

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中华神经医学杂志 2024年第7期23卷 724-728页

作者：唐祥恒卓孝钦唐华瑜呈胡晶重庆医科大学第一临床学院重庆400016 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

阿尔茨海默病(AD)作为一种临床常见的中枢神经系统退行性疾病,严重威胁着人类健康与社会发展。其发病机制与大脑中β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积、Tau蛋白积累及过度磷酸化等密切相关。c-abl激酶能影响多条与Aβ、Tau蛋白有关的信号通路,促进... 详细信息

阿尔茨海默病(AD)作为一种临床常见的中枢神经系统退行性疾病,严重威胁着人类健康与社会发展。其发病机制与大脑中β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积、Tau蛋白积累及过度磷酸化等密切相关。c-abl激酶能影响多条与Aβ、Tau蛋白有关的信号通路,促进神经炎症反应、响应氧化应激信号,其过度表达可导致神经元损伤,使机体出现认知及记忆能力下降等临床表现。本文围绕c-abl激酶与AD发病的关系、c-abl激酶抑制剂治疗AD的可行性及局限性等方面的研究进展进行综述,以期为AD的治疗提供新思路。

关键词：阿尔茨海默病 c-abl激酶酪氨酸激酶抑制剂

第三代测序在重型β地中海贫血患者allo-HSCT术后供体基因嵌合比例监测中的应用研究

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中华检验医学杂志 2024年第09期47卷 1059-1066页

作者：李琳琳黄一芳黄运花潘丽秋吴祖浩林发全广西医科大学第一附属医院检验科广西高校临床检验诊断学重点实验室南宁广西医科大学南宁

目的应用第三代测序技术监测重型β地中海贫血患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后供体基因嵌合比例的变化, 并初步探讨该技术在allo-HSCT术后早期供体基因嵌合比例监测中的应用价值。方法病例分析。以2022年6—7月在广西医科大学... 详细信息

目的应用第三代测序技术监测重型β地中海贫血患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后供体基因嵌合比例的变化, 并初步探讨该技术在allo-HSCT术后早期供体基因嵌合比例监测中的应用价值。方法病例分析。以2022年6—7月在广西医科大学第一附属医院就诊的3例已行allo-HSCT的重型β地中海贫血患者为研究对象, 基因型分别为IVS-Ⅱ-654/CD41-42、IVS-Ⅱ-654/IVS-Ⅱ-654和CD41-42/CD41-42。利用第三代测序技术"可视化"分析3例患者allo-HSCT术后供受体DNA的读长比例, 从而监测供体DNA的基因嵌合状态, 并与Sanger测序结果进行对比分析。对3例患者进行移植后随访, 监测血象, 评估其植入状态和造血重建情况。结果第三代测序检测的3例患者allo-HSCT术后供体DNA嵌合状态的结果与Sanger测序结果一致, 随着移植后天数的增加, 供体DNA的嵌合状态逐渐向完全供体基因嵌合状态转变。受者1移植后10 d、20 d供体DNA嵌合比例分别为95.5%和100%;受者2移植后30 d和40 d, 供体DNA嵌合比例均达100%;受者3移植后1 d供体DNA嵌合比例为69.5%, 移植后10 d、20 d均达100%;所有患者移植后30 d内均达到完全供体基因嵌合。3例患者均在移植后1个月内获得了粒系、血小板系、红系的稳定植入, 造血重建。结论本研究开发了一种利用第三代测序技术检测供体DNA嵌合比例的新方法, 能够早期监测供体DNA的基因嵌合状态。

关键词： β地中海贫血造血干细胞移植第三代测序嵌合状态