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肠毒素大肠杆菌CS3定居因子抗原和融合肠毒素基因在减毒痢疾杆菌中的共表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第1期35卷 49-54页

作者：刘陶陶李淑琴张兆山郑继平刘秀丽罗刚黄翠芬北京生物工程研究所 100071 北京生物工程研究所

肠毒素和定居因子抗原 (CFAs)是肠毒素大肠杆菌 (ETEC)两种主要的致病因素。有效的ETEC疫苗应包括这两种成分。采用基因重组技术 ,将定居因子CFA/II的共有抗原成分CS3菌毛抗原和LT B/ST融合肠毒素基因克隆至以asd基因为选择标记的重组... 详细信息

肠毒素和定居因子抗原 (CFAs)是肠毒素大肠杆菌 (ETEC)两种主要的致病因素。有效的ETEC疫苗应包括这两种成分。采用基因重组技术 ,将定居因子CFA/II的共有抗原成分CS3菌毛抗原和LT B/ST融合肠毒素基因克隆至以asd基因为选择标记的重组质粒上 ,与asd基因剔除的弗氏志贺氏菌Fwl0 1构成了宿主载体平衡致死系统。结果表明 ,在无抗生素条件选择的情况下 ,该重组菌可稳定表达CS3菌毛抗原和LT B/ST融合肠毒素抗原。通过口服和鼻饲方式免疫小鼠 ,可诱生相应的血清IgG抗体 ,同时能够检测到分泌型IgA的产生 ,表明该重组菌可以有效的诱导产生粘膜免疫。

关键词：肠毒素大肠杆菌 CS3菌毛肠毒素弗氏志贺氏菌宿主载体平衡致死系统

肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/Ⅰ和CS6在减毒福氏志贺氏菌中的共表达

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生物化学与生物物理学报 2003年第11期35卷 1005-1010页

作者：郑继平王令春王芃罗刚李淑琴段海清黄翠芬张兆山北京生物工程研究所北京生物工程研究所北京100071

定居因子CFA/I和CS6是肠毒素大肠杆菌 (ETEC)中重要的两种优势抗原 ,是ETEC疫苗研制的首选组分。采用基因重组技术将二者构建在以asd基因为选择标记的重组质粒上 ,与asd基因缺失突变型减毒福氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主载体平衡致死系统... 详细信息

定居因子CFA/I和CS6是肠毒素大肠杆菌 (ETEC)中重要的两种优势抗原 ,是ETEC疫苗研制的首选组分。采用基因重组技术将二者构建在以asd基因为选择标记的重组质粒上 ,与asd基因缺失突变型减毒福氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主载体平衡致死系统。实验结果表明 ,重组疫苗候选株能够稳定表达CFA/I和CS6抗原 ,并可在菌体表面形成相应菌毛。重组菌口服免疫BALB/c小鼠后 ,可诱生相应的抗CFA/I和CS6的特异性血清抗体IgG和分泌型抗体sIgA ,说明以志贺氏菌为载体 ,可以构建同时表达多个定居因子抗原的ETEC多价菌苗

关键词：肠毒素大肠杆菌 CFA/I CS6 减毒福氏志贺氏菌多价疫苗

幽门螺杆菌重组腺病毒双价疫苗的构建及免疫学评价

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生物化学与生物物理进展 2004年第8期31卷 716-721页

作者：刘秀丽刘纯杰陶好霞李淑琴李勣张兆山北京生物工程研究所北京100071

幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表... 详细信息

幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表达目标抗原 .以血清中IgG和新鲜粪便中sIgA ,评价其免疫效果 ,结果显示。

关键词：幽门螺杆菌重组腺病毒尿素酶B 热休克蛋白A 体液免疫黏膜免疫反应

CS3菌毛抗原和霍乱毒素B亚基在人伤寒菌中的表达

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生物化学与生物物理学报 1999年第4期31卷 367-372页

作者：韩照中芮贤良曹勇应天翼苏国富张兆山黄翠芬北京生物工程研究所!北京100071

通过体内外重组的方法，构建了人伤寒菌流行株Ｔｙ２的ΔａｒｏＡ、ΔａｒｏＣ和ａｓｄ－基因缺失突变体（ＲＳ４１７），作为抗原载体菌；同时，构建包含ａｓｄ基因的表达质粒ｐＹＸ１０２，与ＲＳ４１７一起，构成宿主... 详细信息

通过体内外重组的方法，构建了人伤寒菌流行株Ｔｙ２的ΔａｒｏＡ、ΔａｒｏＣ和ａｓｄ－基因缺失突变体（ＲＳ４１７），作为抗原载体菌；同时，构建包含ａｓｄ基因的表达质粒ｐＹＸ１０２，与ＲＳ４１７一起，构成宿主载体平衡致死系统，用于在没有抗生素条件选择的情况下，稳定表达克隆在表达质粒上的外源抗原基因。将肠毒素性大肠杆菌的菌毛抗原ＩＩＩ（ＣＳ３）基因和霍乱弧菌毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）基因分别克隆至ｐＹＸ１０２，构建成相应的重组表达质粒，ＥＬＩＳＡ检测结果证实菌毛抗原ＩＩＩ和霍乱弧菌毒素Ｂ亚基在人伤寒菌ＲＳ４１７中可以分别表达和共表达。重组菌免疫小鼠后可诱生相应的血清抗体，虽然口服免疫和注射免疫产生的ＣＳ３和ＣＴＢ抗体效价有一定差别，但皮下免疫组对人伤寒菌流行株Ｔｙ２的攻击可提供完全保护。研究结果对细菌性腹泻疫苗的研制有参考价值。

关键词：疫苗平衡致死系统菌毛抗原III 霍乱弧菌毒素B亚基人伤寒菌

330个中国城市P空间下公交复杂网络实证研究

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交通运输系统工程与信息 2013年第1期13卷 193-198页

作者：许晴祖正虎徐致靖张文斗郑涛北京生物工程研究所北京100071

目前针对中国城市公交复杂网络的实证研究仍然仅限于数个大城市,而对不同规模城市的公交网络在拓扑结构上是否存在不依赖于人口、社会、经济等外部因素的共性特征,以及城市公交系统演化机制的研究尚不多见.本文实证研究了330个中国城市... 详细信息

目前针对中国城市公交复杂网络的实证研究仍然仅限于数个大城市,而对不同规模城市的公交网络在拓扑结构上是否存在不依赖于人口、社会、经济等外部因素的共性特征,以及城市公交系统演化机制的研究尚不多见.本文实证研究了330个中国城市P空间下公交复杂网络结构特征,发现度分布普遍呈指数分布,表示公交网络演化机制为随机连接而非择优连接;普遍具有较大的簇系数和较小的平均最短路径,呈现典型的小世界特征;网络同配性在N=1 000处发生相变,N>1 000的网络普遍正相关,反之负相关.C与K呈幂律下降关系,表明各城市公交网络具有等级模块性.本文研究结果可为理解城市公交系统演化规律、交通网络建模研究提供指导和参考.

关键词：城市交通公交复杂网络 P空间实证研究结构共性

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人类接触行为实证研究综述

复杂系统与复杂性科学 2013年第1期10卷 1-7页

作者：许晴祖正虎徐致靖张文斗郑涛北京生物工程研究所北京100071

介绍了当前已有的针对人类接触行为模式的实证研究,总结各研究中一致发现的普适规律,如人类接触行为具有高度同配性、特定社会场合下的接触网络具有典型的小世界特性以及接触时间分布呈幂律特性等,这些规律的发现可以指导传染病动力学... 详细信息

介绍了当前已有的针对人类接触行为模式的实证研究,总结各研究中一致发现的普适规律,如人类接触行为具有高度同配性、特定社会场合下的接触网络具有典型的小世界特性以及接触时间分布呈幂律特性等,这些规律的发现可以指导传染病动力学建模、复杂网络、流行病学等领域的相关研究。

关键词：人类动力学传染病动力学建模接触行为实证研究

FANCL在原始生殖细胞的形成和范可尼贫血中的功能研究

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Acta Genetica Sinica 2005年第9期32卷 993-1000页

作者：赵庆国卢柏松黄培堂北京生物工程研究所北京100071

Fanconi氏贫血是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病,表现为进行性骨髓衰竭、先天性骨骼畸形和易患癌症等。Fanconiaremia(FA)病人细胞染色体自发不稳定,并对DNA交联剂如丝裂霉素C高度敏感。目前已发现11种FA蛋白参与形成了一种DNA损伤... 详细信息

Fanconi氏贫血是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病,表现为进行性骨髓衰竭、先天性骨骼畸形和易患癌症等。Fanconiaremia(FA)病人细胞染色体自发不稳定,并对DNA交联剂如丝裂霉素C高度敏感。目前已发现11种FA蛋白参与形成了一种DNA损伤应答途径。新蛋白FANCL是FA复合物蛋白,作为E3连接酶催化FANCD2单一泛素化,泛素化FANCD2导向染色质与BRCA2相互作用,修复DNA损伤。FANCL、FANCC和FANCA等FA蛋白缺失造成生殖细胞缺失性不育,胚胎期生殖细胞中FA途径可能调控原始生殖细胞的增殖。FANCL和睾丸特异性蛋白质GGNBP1、GGNBP2以及OAZ3都与睾丸特异性蛋白质GGN1相互作用,形成睾丸特异性复合物,有可能在成年睾丸中影响精子生成。

关键词： FANCL 生殖细胞 Fanconi氏贫血原始生殖细胞功能研究贫血特异性蛋白质 DNA损伤相互作用遗传性疾病

A型肉毒毒素受体结合区Hc在重组SFV复制子载体中的表达

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生物工程学报 2008年第1期24卷 124-129页

作者：余云舟孙志伟王双俞炜源北京生物工程研究所北京100071

为了在哺乳动物细胞中表达A型肉毒毒素Hc抗原,构建了含A型肉毒毒素受体结合区Hc基因的基于RNA和DNA的重组Semliki森林病毒(Semliki forest virus,SFV)复制子表达栽体。RNA和DNA复制子栽体转染BHK21细胞后,经间接免疫荧光、Western印迹和... 详细信息

为了在哺乳动物细胞中表达A型肉毒毒素Hc抗原,构建了含A型肉毒毒素受体结合区Hc基因的基于RNA和DNA的重组Semliki森林病毒(Semliki forest virus,SFV)复制子表达栽体。RNA和DNA复制子栽体转染BHK21细胞后,经间接免疫荧光、Western印迹和ELISA检测,结果表明非分泌型和分泌型的Hc抗原在细胞中都得到了有效地表达;而且复制子表达载体与辅助病毒载体共转染均可制备高滴度的重组病毒颗粒,该重组病毒颗粒感染细胞后,也都能表达Hc抗原。以上结果表明,基于RNA和DNA的重组SFV复制子表达载体在细胞中均可有效地表达Hc抗原和制备具有感染能力并能表达Hc抗原的重组病毒颗粒。基于RNA和DNA的重组SFV复制子表达载体的构建和含A型肉毒毒素受体结合区Hc基因的重组病毒颗粒的获得,为进一步观察SFV复制子疫苗的免疫原性奠定了基础,从而为A型肉毒毒素新型疫苗的研制提供了新途经。

关键词： semliki森林病毒复制子 A型肉毒毒素受体结合区Hc 重组病毒颗粒

小鼠FANCL抗体制备及组织表达谱分析(英文)

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Acta Genetica Sinica 2006年第1期33卷 49-55页

作者：赵庆国周煜朱恒奇卢柏松黄培堂北京生物工程研究所北京100071

FANCL是一个范可尼氏贫血新蛋白,它作为泛素E3连接酶催化FANCD2的单一泛素化,在修复DNA损伤、维持染色体稳定的FA途径中起着关键作用。胚胎期FANCL与小鼠原始生殖细胞增殖密切相关,成年睾丸中FANCL 与几个生殖细胞特异性蛋白形成一个... 详细信息

FANCL是一个范可尼氏贫血新蛋白,它作为泛素E3连接酶催化FANCD2的单一泛素化,在修复DNA损伤、维持染色体稳定的FA途径中起着关键作用。胚胎期FANCL与小鼠原始生殖细胞增殖密切相关,成年睾丸中FANCL 与几个生殖细胞特异性蛋白形成一个睾丸特异网络,可能参与影响精子的生成。采用RT-PCR方法从小鼠总RNA 中扩增克隆FancL全长cDNA片段,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达了6His-FANCL蛋白,用表达蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备了抗FANCL多抗血清。采用镍离子金属螯合柱纯化6His-FANCL蛋白后,通过与活性基团-NHS 交联制备了FANCL抗原柱,亲和纯化了FANCL多抗。为了验证抗体活性和特异性,在HEK 293T细胞中瞬时表达了HA-FANCL融合蛋白,分别用HA单抗和纯化多抗进行Western印迹分析,结果表明获得了特异性的FANCL 抗体。为了观察FANCL在组织中的表达谱,制备了多种小鼠组织匀浆蛋白,使用纯化的FANCL多抗进行Western 印迹分析,在脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸、卵巢、子宫和肌肉组织中都检测到FANCL蛋白的表达,说明FANCL 在小鼠组织中是广泛表达的,这与其是DNA修复复合物中的重要成员相一致。

关键词： FANCL 抗体表达谱制备范可尼氏贫血