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链霉菌L10608来源木聚糖酶xyn-GH10/11基因的克隆与生物信息分析

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中国食品学报 2019年第10期19卷 56-67页

作者：熊科熊苏玥柳佳芸高思宇邓蕾裴鹏钢北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心北京100048 北京工商大学北京市质量与安全重点实验室北京100048 北京工商大学北京市风味化学重点实验室北京100048 北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心北京100048

基于菌株L10608所产天然酶水解木聚糖底物时具有良好的水解木聚糖底物特性,通过设计简并引物,经巢式PCR克隆得到L10608菌株木聚糖酶基因全长(xyn-GH10与xyn-GH11),并对其进行生物信息学分析。由分析可知酶xyn-GH10全长1 469 bp,分子质量... 详细信息

基于菌株L10608所产天然酶水解木聚糖底物时具有良好的水解木聚糖底物特性,通过设计简并引物,经巢式PCR克隆得到L10608菌株木聚糖酶基因全长(xyn-GH10与xyn-GH11),并对其进行生物信息学分析。由分析可知酶xyn-GH10全长1 469 bp,分子质量:50.677 ku;理论等电点pI:7.98;预测该木聚糖酶的信号肽为MGIQALPRAAVRQKLRTPLPALAAGVLGLTAALVPPTNADA;该木聚糖酶蛋白序列具有明显的第10族糖苷水解酶的八叠桶型保守区域,且能编码一段由108个氨基酸组成的RicinB-lectin非催化结构域。木聚糖酶xyn-GH11全长729 bp;分子质量:24.003 ku;理论等电点pI:8.98;预测该木聚糖酶的信号肽为MHQDGSQQDRT QNPAPFGGLSRRGFLVGGTGAAALAAGSGLLLPGTAHAA。该木聚糖酶蛋白序列具有明显的第11族糖苷水解酶的“右手半握状”保守区域。xyn-GH10与xyn-GH11基因经原核表达后其中木聚糖酶xyn-GH10酶活为160 U/mL,木聚糖酶xyn-GH11酶活为55 U/mL。

关键词：链霉菌木聚糖酶基因克隆生物信息学分析

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排骨挥发性成分的分离与鉴定

中国食品学报 2016年第8期16卷 241-246页

作者：张玉玉章慧莺张兴董雪珊陈海涛孙宝国北京食品营养与人类健康高精尖创新中心食品质量与安全北京实验室北京市食品风味化学重点实验室北京工商大学北京100048

采用同时蒸馏萃取(SDE)和气-质联用(GC-MS)技术,对3种排骨样品的挥发性风味成分进行提取、定性和定量分析。将其结果通过计算机联机检索,结合保留指数,确定化合物的种类。采用面积归一化法确定相对含量,采用内标法确定挥发性成分在样品... 详细信息

采用同时蒸馏萃取(SDE)和气-质联用(GC-MS)技术,对3种排骨样品的挥发性风味成分进行提取、定性和定量分析。将其结果通过计算机联机检索,结合保留指数,确定化合物的种类。采用面积归一化法确定相对含量,采用内标法确定挥发性成分在样品中的含量。结果表明,共鉴定出32种化合物,从排骨样品A中检测出29种挥发性成分,从排骨样品B检测出20种挥发性成分,从排骨样品C中检测出29种挥发性成分。3种样品共有的挥发性成分有17种,排骨肉样品与肉骨混合样品共有的挥发性成分有27种,排骨骨样品与肉骨混合样品共有的挥发性成分有19种。醛类化合物的含量最高,其中,含量最高的为(E,E)-2,4-癸二烯醛(A:12.133%,0.119μg/g;B:12.757%,0.183μg/g;C:12.003%,0.088μg/g)和十六醛(A:15.913%,0.156μg/g;B:8.224%,0.118μg/g;C:9.384%,0.069μg/g)。

关键词：排骨挥发性成分同时蒸馏萃取气相色谱-质谱联用

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肽酶体系生成高F值寡肽机制的探讨

中国食品学报 2020年第4期20卷 291-299页

作者：柳佳芸高思宇朱运平滕超郦金龙李秀婷熊科北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心北京100048 北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心北京100048 北京工商大学北京市质量与安全重点实验室北京100048 北京工商大学北京市风味化学重点实验室北京100048

高F值寡肽是一种由高支链氨基酸含量与低芳香族氨基酸含量组成的小肽体系。因为它独特的氨基酸组成,使其具有独特的生理功能。本文概述了高F值寡肽的生产现状及通过酶法生成高F值寡肽的机制。针对目前酶法生产高F值寡肽制品存在的问题,... 详细信息

高F值寡肽是一种由高支链氨基酸含量与低芳香族氨基酸含量组成的小肽体系。因为它独特的氨基酸组成,使其具有独特的生理功能。本文概述了高F值寡肽的生产现状及通过酶法生成高F值寡肽的机制。针对目前酶法生产高F值寡肽制品存在的问题,就内、外肽酶等肽酶体系实现高效生成高F值寡肽的机制进行了探讨。

关键词：高F值寡肽酶解制备内肽酶外肽酶

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芝麻香型白酒中含硫风味组分的分析

中国食品学报 2014年第5期14卷 218-225页

作者：张媛媛孙金沅张锋国黄明泉刘玉平孙宝国北京市食品风味化学重点实验室北京工商大学北京100048 食品质量与安全北京实验室北京工商大学北京100048 山东扳倒井集团技术中心山东高青256300

采用液-液萃取、固相微萃取的前处理方法提取扳倒井芝麻香型白酒中的香味物质成分,结合气相色谱(GC)、气相色谱-嗅闻仪联用(GC-O)及气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法分析该香型白酒中含硫特征风味物质,结果表明,除了之前报道的4种含硫化合... 详细信息

采用液-液萃取、固相微萃取的前处理方法提取扳倒井芝麻香型白酒中的香味物质成分,结合气相色谱(GC)、气相色谱-嗅闻仪联用(GC-O)及气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法分析该香型白酒中含硫特征风味物质,结果表明,除了之前报道的4种含硫化合物外,还检测到二甲基二硫醚、二甲基四硫醚、3-甲硫基丙醛、糠硫醇、二异丙基二硫、二糠基二硫醚和甲基甲烷硫代磺酸酯。其中二甲基四硫醚、糠硫醇、二异丙基二硫、二糠基二硫醚和二甲基硫代亚磺酸酯是首次在芝麻香型白酒中发现。

关键词：芝麻香型白酒气相色谱气相色谱-嗅闻探测气相色谱-质谱联用含硫化合物

酸性木聚糖酶高产菌株的筛选及其液体发酵产酶条件优化

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中国食品学报 2015年第1期15卷 73-79页

作者：王雅珍滕超朱运平熊科李秀婷孙宝国北京工商大学食品学院北京100048 食品添加剂与配料北京高校工程研究中心北京100048 北京市食品风味化学重点实验室北京100048

为了获得能够利用玉米芯等农业废弃物作为碳源的酸性木聚糖酶高产菌株,降低产酶成本,对全国各地300余份土样进行了菌株筛选,获得1株以玉米芯作为碳源产酸性木聚糖酶青霉菌,菌株编号MA21601,初测该菌株所产木聚糖酶最适作用pH值范围4.0-... 详细信息

为了获得能够利用玉米芯等农业废弃物作为碳源的酸性木聚糖酶高产菌株,降低产酶成本,对全国各地300余份土样进行了菌株筛选,获得1株以玉米芯作为碳源产酸性木聚糖酶青霉菌,菌株编号MA21601,初测该菌株所产木聚糖酶最适作用pH值范围4.0-4.5。通过对该菌株液体发酵条件优化,确定其最佳产酶条件是：60 mg/mL玉米芯,1.5 mg/mL硫酸铵,培养基初始pH值3.0-3.5,发酵温度25℃,转速125 r/min;发酵液终pH 1.27。菌株产酶趋势研究表明：菌株发酵第7天产木聚糖酶酶活力达到1 808 U/mL,是初筛酶活的361.6%。

关键词：青霉菌酸性木聚糖酶液体发酵产酶优化

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牛肝菌及其酶解液挥发性风味成分的对比分析

中国食品学报 2016年第11期16卷 233-239页

作者：张玉玉陈怡颖孙颖丁奇张兴孙宝国陈海涛北京食品营养与人类健康高精尖创新中心北京市食品风味化学重点实验室食品质量与安全北京实验室北京工商大学北京100048

采用固相微萃取法分别提取牛肝菌粉和酶解液中的挥发性风味成分,以连接HP-5和DB-wax两种极性柱子的气相色谱-质谱联用仪对其进行分离鉴定。结果显示:从牛肝菌粉中共鉴定出22种挥发性风味成分,包括醛类3种、醇类5种、酮类4种、酯类5种、... 详细信息

采用固相微萃取法分别提取牛肝菌粉和酶解液中的挥发性风味成分,以连接HP-5和DB-wax两种极性柱子的气相色谱-质谱联用仪对其进行分离鉴定。结果显示:从牛肝菌粉中共鉴定出22种挥发性风味成分,包括醛类3种、醇类5种、酮类4种、酯类5种、酚类2种、烃类1种、杂环化合物2种;从牛肝菌酶解液中共鉴定出22种挥发性风味成分,包括醛类5种、醇类4种、酮类2种、酯类1种、酸类4种,酚类3种、烃类1种、杂环化合物2种。牛肝菌粉中含量最高的为醇类和酯类化合物,包括1-辛烯-3-醇、异丁酸异戊酯和反式-2-辛烯-1-醇等;酶解液中为醛类和杂环化合物,包括苯甲醛、糠醛等。

关键词：牛肝菌酶解液挥发性风味成分固相微萃取气相色谱-质谱联用

黑曲霉M00988菌株来源的降解赭曲霉毒素A羧肽酶基因的原核表达及其固定化

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中国食品学报 2019年第5期19卷 66-75页

作者：熊科支慧伟王小艺赵峙尧柳佳芸裴鹏刚邓蕾李秀婷北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心北京100048 北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心北京100048 北京工商大学北京市质量与安全重点实验室北京100048 北京工商大学北京市风味化学重点实验室北京100048

黑曲霉M00988菌株具有降解赭曲霉毒素A(OTA)的作用。为了提高天然菌株的降解效率,将黑曲霉菌株中解毒的关键羧肽酶cp基因进行克隆,并原核重组表达该酶。通过优化得到最优的表达条件为培养2.5 h后加入1 mmol/L IPTG,诱导温度28℃,诱导时... 详细信息

黑曲霉M00988菌株具有降解赭曲霉毒素A(OTA)的作用。为了提高天然菌株的降解效率,将黑曲霉菌株中解毒的关键羧肽酶cp基因进行克隆,并原核重组表达该酶。通过优化得到最优的表达条件为培养2.5 h后加入1 mmol/L IPTG,诱导温度28℃,诱导时间20 h。粗酶液经镍柱纯化后得到解毒能力达30.03μg/mg的电泳级重组羧肽酶。之后,采用AB-8大孔树脂作为吸附载体,戊二醛为交联剂对酶进行复合固定化,得到最优固定化条件为吸附时间12 h、吸附温度37℃、戊二醛质量分数0.35%、交联时间1 h、交联温度25℃。固定化酶与游离酶相比,酶对底物的亲和力虽有所下降,但酶促反应最大速度(Vmax)没有显著下降,催化效率基本一致,表明对该酶进行吸附-交联复合固定化效果良好。对固定化前、后酶的二级结构的研究表明:酶经固定化后,α螺旋和无规则卷曲的含量有所上升,β折叠显著下降,β转角变化不明显。这说明酶经固定化后,部分β折叠链内氢键断裂,转变成为无规则结构或α螺旋结构,导致固定化酶对底物的亲和力较之前有所下降,而其Vmax与游离态酶基本一致,因此固定化酶与游离态酶的催化效率基本一致。本研究为羧肽酶降解OTA在工业上的固定化应用奠定了基础。

关键词： OTA 羧肽酶重组表达酶复合固定化

ASE-SAFE和SDE-GC-MS分析贾永信腊牛肉的挥发性香气成分

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精细化工 2013年第2期30卷 166-173页

作者：陈海涛张宁刘洋程玥孙宝国郑福平北京工商大学食品学院食品风味北京市重点实验室北京100048

采用加速溶剂萃取-溶剂辅助蒸发法和同时蒸馏萃取法提取贾永信腊牛肉的挥发性香气成分,结合气相色谱-质谱联用技术对其进行了分析研究。结果表明,共鉴定出82种挥发性香气成分,包括烃类6种、醛类20种、醇类10种、酮类11种、酚类4种、脂... 详细信息

采用加速溶剂萃取-溶剂辅助蒸发法和同时蒸馏萃取法提取贾永信腊牛肉的挥发性香气成分,结合气相色谱-质谱联用技术对其进行了分析研究。结果表明,共鉴定出82种挥发性香气成分,包括烃类6种、醛类20种、醇类10种、酮类11种、酚类4种、脂肪酸类16种、醚类3种、酯类1种、含硫含氮及杂环化合物11种。两种方法同时检测到的化合物有16种,包括己醛、庚醛、苯甲醛、壬醛、2-糠醇、芳樟醇、α-松油醇、(-)-4-松油烯醇、1-羟基-2-丙酮、乙偶姻、2,3-戊二酮、胡椒酮、丁香酚、桉叶油素、茴香脑和2-甲基四氢呋喃-3-酮。

关键词：贾永信腊牛肉挥发性香气成分加速溶剂萃取-溶剂辅助蒸发(ASE-SAFE) 同时蒸馏萃取(SDE) 气相色谱-质谱联用(GC-MS) 香料与香精

猪肉不同蛋白酶解呈味组分及热反应风味物质比较

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中国食品学报 2017年第10期17卷 211-219页

作者：都荣强王天泽杜文斌肖群飞范梦蝶赵梦瑶赵健谢建春北京食品营养与人类健康高精尖创新中心食品质量与安全北京实验室北京市食品风味化学重点实验室北京工商大学北京100048

采用胰蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶等5种内切酶和风味蛋白酶(外切酶)的各自较佳条件制备猪肉酶解液。胰蛋白酶和风味蛋白酶的酶解液味道较好,内切酶的酶解液水解度均较高,而鲜味较弱、苦味较强。呈味游离... 详细信息

采用胰蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶等5种内切酶和风味蛋白酶(外切酶)的各自较佳条件制备猪肉酶解液。胰蛋白酶和风味蛋白酶的酶解液味道较好,内切酶的酶解液水解度均较高,而鲜味较弱、苦味较强。呈味游离氨基酸组成上,风味蛋白酶的酶解液中鲜、甜味氨基酸比例最大,其次是胰蛋白酶的酶解液;而木瓜蛋白酶的酶解液中苦味氨基酸比例最大。超滤分离发现,呈鲜味的均为小于3 ku的组分,尤其小于1 ku的组分鲜味较强。木瓜蛋白酶的酶解液中小于5 ku组分均有苦味,中性蛋白酶的酶解液中1~5ku的组分均有苦味,而胰蛋白酶和风味蛋白酶的酶解液未分离出苦味组分。6种酶解液与木糖反应所得热反应产物均有不同程度的炖煮肉香气,固相微萃取/气-质联机分析发现,胰蛋白酶和碱性蛋白酶的酶解液的热反应产物中,含硫化合物、含氮杂环化合物相对含量较高,而其它4种酶解液的热反应产物中,含氧杂环化合物的相对含量较高。

关键词：猪肉蛋白酶解氨基酸肉香味呈味超滤