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用于膜片钳记录的脑片制备方法

解剖学报 2015年第1期46卷 118-121页

作者：陈醒刘晓栋李琳王珂白文佩秦丽华于龙川北京大学第一医院妇产科北京100034 北京大学生命科学学院神经生物学实验室生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100871 北京大学第一医院实验中心北京100034 北京大学医学部解剖学与组织胚胎学系北京100191

目的探索用于膜片钳记录的脑片制备方法并分析鼠龄、溶液、操作过程等因素对神经细胞活性的影响。方法取各年龄段的Sprague-Dawley大鼠60只,麻醉后快速断头取脑,冰镇后取出并修块,用振动切片机切取300μm下丘脑冠状脑片,人工脑脊液33℃... 详细信息

目的探索用于膜片钳记录的脑片制备方法并分析鼠龄、溶液、操作过程等因素对神经细胞活性的影响。方法取各年龄段的Sprague-Dawley大鼠60只,麻醉后快速断头取脑,冰镇后取出并修块,用振动切片机切取300μm下丘脑冠状脑片,人工脑脊液33℃孵育45min后,在红外微分干涉相差显微镜下观察脑片神经元。结果镜下可观察到状态良好的神经元(边界清晰、立体感强、细胞核和颗粒不可见),神经元活性的好坏与实验条件和实验操作有关。结论鼠龄、溶液、实验操作等因素与脑片神经元活性密切相关,实验过程中需要严格控制各种实验条件。

关键词：脑片神经元膜片钳大鼠

G-蛋白Rab3a对神经生长抑制因子(GIF)抑制神经元细胞生长作用的影响

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生物化学与生物物理进展 2005年第11期32卷 1069-1074页

作者：庞立岩茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室

为了深入研究Rab3a和神经生长抑制因子(GIF)的相互作用,在大鼠海马神经元细胞原代培养体系中,用MTT还原法定量研究了Rab3a对GIF神经生长活性的影响,发现Rab3a可以替代脑提取物而使GIF发挥神经生长抑制活性.接着又利用多克隆抗体方法研究... 详细信息

为了深入研究Rab3a和神经生长抑制因子(GIF)的相互作用,在大鼠海马神经元细胞原代培养体系中,用MTT还原法定量研究了Rab3a对GIF神经生长活性的影响,发现Rab3a可以替代脑提取物而使GIF发挥神经生长抑制活性.接着又利用多克隆抗体方法研究了GIF与Rab3a的相互作用,结果说明Rab3a是GIF发挥神经生长抑制活性所必需的蛋白质,并且它们的相互作用受空间位置的因素影响较大.在随后对它们相互作用的机理和可能的生物学意义进行了讨论.

关键词： Rab3a GIF 相互作用大鼠海马神经元细胞培养 MTT还原测定法

金属硫蛋白结合铅离子的竞争反应和置换反应研究

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北京大学学报（自然科学版） 2000年第4期36卷 503-508页

作者：季清洲王立波周元茹炳根北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系蛋白质工程国家重点实验室北京100871

从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到两种亚型的金属硫蛋白 (MTs) :Zn7MT Ⅰ和Zn7MT Ⅱ ,在酸性条件下脱金属得脱金属硫蛋白 (apoMTs)。从镉诱导的家兔肝脏中分离纯化得 :Zn2 Cd5MT Ⅰ和Zn2 Cd5MT Ⅱ。采用圆二色性 (CD)光谱法和紫外 (UV... 详细信息

从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到两种亚型的金属硫蛋白 (MTs) :Zn7MT Ⅰ和Zn7MT Ⅱ ,在酸性条件下脱金属得脱金属硫蛋白 (apoMTs)。从镉诱导的家兔肝脏中分离纯化得 :Zn2 Cd5MT Ⅰ和Zn2 Cd5MT Ⅱ。采用圆二色性 (CD)光谱法和紫外 (UV)吸收光谱法研究金属硫蛋白结合铅离子的竞争反应和置换反应。竞争反应显示 :Pb2 + 和Zn2 + 竞争结合apoMT Ⅰ形成的是金属混配的金属硫蛋白 ;而apoMT Ⅱ的金属结合位点则完全被Pb2 + 所占据 ,表明apoMT Ⅱ对Pb2 + 更为敏感。置换反应显示 :Pb2 + 既不能置换出Zn7MT Ⅰ中的Zn2 + ,也不能置换出Zn7MT Ⅱ中的Zn2 + ;但Pb2 + 能完全置换出Zn2 Cd5MTs中的Zn2 + ,且其置换行为也存在着亚型上的差异。提示Zn2 Cd5MT Ⅱ可能有效地解铅中毒。

关键词：金属硫蛋白铅离子竞争反应置换反应

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机械刺激在间隙连接半通道活动中的作用

生物物理学报 2000年第3期16卷 468-474页

作者：刘泰槰 Ross G Johnson Judson D Sheridan 北京大学生命科学学院生物膜与膜工程国家重点实验室北京100871 Department of Genetics and Cell Biology College of Biological Sciences University of Minnesota

缘补充染料 +EGTA ,则细胞的染料负荷随机械刺激的增强而加。12 -O -tetradeconylphorbal-13 -acetate(TPA)是一种致癌物质 ,它能促进蛋白激酶C活动 ,并可明显抑制间隙连接的通透性。在它的处理下 ,能明显抑制细胞的染料摄取。以上结果... 详细信息

缘补充染料 +EGTA ,则细胞的染料负荷随机械刺激的增强而加。12 -O -tetradeconylphorbal-13 -acetate(TPA)是一种致癌物质 ,它能促进蛋白激酶C活动 ,并可明显抑制间隙连接的通透性。在它的处理下 ,能明显抑制细胞的染料摄取。以上结果表明 ,机械刺激是使半通道开放的启动因素 ,而EGTA则进一步促使其开放。

关键词： Hella细胞染料摄取机械刺激间隙连接半通道

Ran及其结合与调控蛋白在核膜装配过程中的调控作用

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生命科学 2011年第11期23卷 1069-1075页

作者：吕学龙祁燃吕全龙张传茂北京大学生命科学学院生物膜与膜工程国家重点实验室细胞增殖与调控教育部重点实验室北京100871

核膜在细胞周期中呈现高度的动态性:在细胞分裂的前中期,核膜崩解并分散到细胞质中;在细胞分裂的后期,核膜开始在染色体的表面重新装配,最终形成完整的核膜结构。近期的研究发现,Ran GTP酶、物质转运蛋白importinβ、内层核膜蛋白LBR(la... 详细信息

核膜在细胞周期中呈现高度的动态性:在细胞分裂的前中期,核膜崩解并分散到细胞质中;在细胞分裂的后期,核膜开始在染色体的表面重新装配,最终形成完整的核膜结构。近期的研究发现,Ran GTP酶、物质转运蛋白importinβ、内层核膜蛋白LBR(lamin B receptor)以及核孔复合体蛋白nucleoporins在核膜重建的过程中起关键性调控作用,并受到细胞周期调控因子p34cdc2激酶的调节。LBR是一个八次跨膜的膜蛋白,主要定位于内层核膜。在细胞分裂的早期,随着核膜崩解,LBR与核膜崩解而生成的小膜泡一起分散到细胞质中;在细胞分裂的后期,通过LBR与importinβ相互结合,含有LBR的膜泡被importinβ携带至染色质的表面参与核膜重建。目前已知p34cdc2激酶对LBR与importinβ介导的核膜重建起重要调控作用。Nucleoporins是核孔复合体主要组分。随核膜崩解,核孔复合体解聚成nucleoporins,分散到细胞质中,或结合到其他亚细胞成分上。细胞分裂后期,核孔复合体伴随核膜装配而组装。

关键词：核膜 LBR importinβ Ran GTP酶 p34cdc2激酶

呼吸代谢控制在Caspase-3对线粒体凋亡信号正反馈作用中的机制和意义

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科学通报 2001年第21期46卷 1791-1795页

作者：夏天吴才宏李林江陈佺刘树森蒋春笋北京大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100871 中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100080 天津体育学院运动医学研究所天津300381

线粒体通过控制释放促凋亡因子对细胞凋亡的调控起决定作用已经得到广泛认同.Caspase-3是细胞凋亡级联反应下游的一个关键的凋亡执行蛋白水解酶,但同时也有对线粒体的反馈作用,其机制和意义尚不完全清楚.研究了基因重组Caspase-3对线粒... 详细信息

线粒体通过控制释放促凋亡因子对细胞凋亡的调控起决定作用已经得到广泛认同.Caspase-3是细胞凋亡级联反应下游的一个关键的凋亡执行蛋白水解酶,但同时也有对线粒体的反馈作用,其机制和意义尚不完全清楚.研究了基因重组Caspase-3对线粒体呼吸、氧自由基和跨膜电位的影响.结果表明,重组Caspase-3使分离的小鼠肝线粒体的态4呼吸速率增加,呼吸控制比下降,线粒体氧自由基生成增加,线粒体跨膜电位下降.Caspase-3对线粒体的上述作用依赖其蛋白水解酶活性并通过线粒体膜透过性转运孔（PTP）起作用.实验结果证明Caspase-3对线粒体凋亡信号有正反馈放大作用,并进一步揭示了Caspase-3对线粒体作用的正反馈放大机制.

关键词：线粒体 Caspase-3 氧自由基呼吸代谢控制细胞凋亡促凋亡因子正反馈放大机制

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细胞间隙连接半通道的生理学特性

中国科学基金 1999年第6期13卷 368-371页

作者：刘泰槰北京大学生命科学学院生物膜及膜工程国家重点实验室北京100871

细胞间通信是一个在进化上很古老的功能,而间隙连接在形态上是一个古老的结构。然而它并没有在进化过程中消失,而是随着进化不断发展。对于它的研究可追溯到50—60年代到目前,它已经是一个重要的研究领域,受到广泛地重视,每年有数百篇... 详细信息

细胞间通信是一个在进化上很古老的功能,而间隙连接在形态上是一个古老的结构。然而它并没有在进化过程中消失,而是随着进化不断发展。对于它的研究可追溯到50—60年代到目前,它已经是一个重要的研究领域,受到广泛地重视,每年有数百篇论文发表,涉及生命科学各个领域。其重要性可想而知。

关键词：间隙连接细胞间通讯半通道染料外逸生理学

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鱼体内金属硫蛋白与水环境关系的研究

北京大学学报（自然科学版） 2001年第6期37卷 779-784页

作者：林芃任宏伟茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室大连大学医学院

金属硫蛋白 (Metallothionein ,简称MT)能有效地表征水体中重金属对生物的影响 ,故以鱼类MT含量来评价武汉东湖的水环境。对不同组织中MT含量测定可研究不同组织对重金属的积累能力 ;不同鱼种体内MT含量测定以了解鱼种对金属耐受力的影... 详细信息

金属硫蛋白 (Metallothionein ,简称MT)能有效地表征水体中重金属对生物的影响 ,故以鱼类MT含量来评价武汉东湖的水环境。对不同组织中MT含量测定可研究不同组织对重金属的积累能力 ;不同鱼种体内MT含量测定以了解鱼种对金属耐受力的影响 ;而对不同水体中鱼类MT含量的分析 ,则对确定污染源及污染程度有重要意义。

关键词：金属硫蛋白水质污染体内重金属积累生物标志物耐受力鱼类水质监测

Junctophilin2蛋白介导的心衰细胞钙致钙释放耦联的基础结构变化分析

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生物物理学报 2009年第S1期25卷 237-238页

作者：许师明赖颖斯徐明张幼怡王世强北京大学生命科学学院生物膜与膜工程国家重点实验室 100871 北京大学第三医院血管研究所 100083

心衰是威胁人类生命的重大疾病之一。在心衰的细胞中,钙致钙释放"脱耦联",病人最终因泵血能力不足而死亡。尽管上述过程在细胞水平已有很多研究。

关键词： Junctophilin2 钙致钙释 T管与SR耦联结构