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人三叶因子3在毕氏酵母中的表达及生物活性分析

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 653-658页

作者：王艳茹任宏伟安琳方敏李令媛茹炳根北京大学生命科学学院、蛋白质工程国家重点实验室

利用PCR方法在人胎儿胎盘cDNA中扩增了人三叶因子 3基因 (hTFF3) ,插入到含有AOX1启动子和α 因子信号肽序列的表达载体 pPIC9K中 ,采用毕氏酵母表达系统对其进行了高效的分泌表达 ,并用G418筛选高拷贝整合转化子。2 %甲醇诱导酵母表达 ... 详细信息

利用PCR方法在人胎儿胎盘cDNA中扩增了人三叶因子 3基因 (hTFF3) ,插入到含有AOX1启动子和α 因子信号肽序列的表达载体 pPIC9K中 ,采用毕氏酵母表达系统对其进行了高效的分泌表达 ,并用G418筛选高拷贝整合转化子。2 %甲醇诱导酵母表达 48h后 ,上清经SDS PAGE和Western印迹证明重组蛋白质以双体的形式分泌表达 ,占总蛋白质的 45 % ,能被抗hTFF3抗体所识别。表达产物经S Sepharose、Q Sepharose离子交换及SephacrylS 10 0纯化后纯度达到 95 %以上。体内生物学活性研究证实hTFF3可有效的防止盐酸诱导的大鼠胃溃疡。

关键词：三叶因子3 毕氏酵母发酵表达

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神经生长抑制因子的功能结构域双体

生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 248-252页

作者：季清洲康巧华周妍娇任宏伟茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室北京100871

神经生长抑制因子 (neuronalgrowthinhibitoryfactor,GIF)又名金属硫蛋白 III (metallothionein III,MT III) ,是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白质 ,β结构域为其功能结构域。为深入系统地研究GIF及其结构域的... 详细信息

神经生长抑制因子 (neuronalgrowthinhibitoryfactor,GIF)又名金属硫蛋白 III (metallothionein III,MT III) ,是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白质 ,β结构域为其功能结构域。为深入系统地研究GIF及其结构域的结构与功能 ,构建了神经生长抑制因子功能结构域双体 (GIFβ β)。PCR扩增得到N端 β结构域和C端 β结构域的cDNA ,酶切后克隆入原核表达载体pGEX 4T 1,经发酵、诱导表达、亲和层析、凝血酶切和进一步纯化 ,每升菌液约可得重组GIFβ β蛋白 6 0mg。测其电泳行为、氨基酸组成、质谱、金属巯基含量等 ,证明得到了目的蛋白质。圆二色性图谱显示 ,GIFβ β拥有金属硫蛋白家族成员的特征———金属巯基簇结构域。MTT还原法测定神经元抑制活性大小为 :GIF >GIFβ β>GIFβ结构域

关键词：神经生长抑制因子 β结构域功能结构域双体表达功能

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中华民族基因组多态性数据库的构建(英文)

Acta Genetica Sinica 2003年第6期30卷 509-514页

作者：陈新张勇王建民黄弋罗静初吴才宏顾孝诚北京大学生命科学学院北京100871 北京大学膜及膜的工程国家重点实验室北京100871

为配合总体的实验研究构建了中华民族基因组多态性 (GenomicPolymorphismofChineseEthnicGroups ,简称GPCEG)数据库 ,现已初步建成包括民族名称、基本情况介绍、体态特征、基因多态性数据、永生细胞株系、参考文献、国际相关数据库连接... 详细信息

为配合总体的实验研究构建了中华民族基因组多态性 (GenomicPolymorphismofChineseEthnicGroups ,简称GPCEG)数据库 ,现已初步建成包括民族名称、基本情况介绍、体态特征、基因多态性数据、永生细胞株系、参考文献、国际相关数据库连接等内容的数据库 ,并完成了其可视化浏览及查询系统的建立 ,为建成具有中国特色的国家自有数据库奠定了基础。

关键词：生物信息学生物学数据库中华民族基因组多态性

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β肾上腺素受体对心肌细胞钙信号的调控

中国科学：生命科学 2024年第8期54卷 1346-1359页

作者：任宇捷梁景辉侯婷婷王世强北京大学生命科学学院膜生物学国家重点实验室北京100871

心脏是血液循环的动力器官.心肌细胞通过钙致钙释放的机制实现兴奋收缩耦联,控制着心脏有节律的收缩和舒张.交感神经递质通过β肾上腺素受体(β-adrenergic receptor, βAR)调控心肌细胞钙信号转导和心脏收缩舒张功能.在病理条件下, βA... 详细信息

心脏是血液循环的动力器官.心肌细胞通过钙致钙释放的机制实现兴奋收缩耦联,控制着心脏有节律的收缩和舒张.交感神经递质通过β肾上腺素受体(β-adrenergic receptor, βAR)调控心肌细胞钙信号转导和心脏收缩舒张功能.在病理条件下, βAR的信号转导和钙信号出现异常,导致心律失常、心力衰竭、缺血再灌注损伤等心脏疾病的发生.因此,阐明βAR信号通路对心肌细胞钙信号的调节对认识心脏疾病的机理和药物研发具有重要意义.

关键词：心肌细胞 β肾上腺素受体钙信号转导

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IS4肽插入大鼠骨骼肌细胞膜形成离子通道

科学通报 1999年第17期44卷 1857-1860页

作者：鲍林苗振伟周培爱蒋云张人骥唐有祺北京大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京大学分子动态和稳态结构国家重点实验室北京100871 北京大学生命科学学院

根据大鼠脑Ⅰ型Na+通道片段的氨基酸序列人工合成一个 2 2肽———IS4肽 ,在一定的实验条件下IS4肽可嵌入培养的大鼠骨骼肌细胞膜并形成离子通道 .采用膜片箝细胞贴附式方法记录到IS4肽通道的单通道电流 ,IS4通道的单通道电导不均一 ,... 详细信息

根据大鼠脑Ⅰ型Na+通道片段的氨基酸序列人工合成一个 2 2肽———IS4肽 ,在一定的实验条件下IS4肽可嵌入培养的大鼠骨骼肌细胞膜并形成离子通道 .采用膜片箝细胞贴附式方法记录到IS4肽通道的单通道电流 ,IS4通道的单通道电导不均一 ,在不同箝制膜电位下IS4通道的平均开放时间 ,平均关闭时间及平均开放概率不同 ,IS4通道对Na+,K+和Li+有选择性 ,Cl-不能通过IS4通道 .

关键词：人工合成IS4肽阳离子选择性通道大鼠骨骼肌细胞

双杂交系统筛选与AID相互作用蛋白的初步研究

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厦门大学学报（自然科学版） 2005年第3期44卷 299-303页

作者：周芳芳李志东王蔚蔚刘润中洪水根许华曦陈晔光厦门大学生命科学学院福建厦门361005 生物膜与膜生物工程国家重点实验室生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生物科学与技术系北京100084

AID(APPintracellulardomain)是由淀粉样前体蛋白APP经γ分泌酶切割产生的胞内端,它可能参与细胞凋亡,基因转录等活动,并对阿尔茨海默氏症的形成有一定影响.为进一步研究AID的功能,在本实验中,我们用AID为诱饵蛋白,运用酵母双杂交系统... 详细信息

AID(APPintracellulardomain)是由淀粉样前体蛋白APP经γ分泌酶切割产生的胞内端,它可能参与细胞凋亡,基因转录等活动,并对阿尔茨海默氏症的形成有一定影响.为进一步研究AID的功能,在本实验中,我们用AID为诱饵蛋白,运用酵母双杂交系统筛选与其结合的蛋白,得到其中两个阳性克隆,一个为RPS21,另一个为FLJ20551.接着又在酵母体系用β半乳糖苷酶报告基因验证了它们的相互作用,并在哺乳动物细胞中用免疫共沉淀的方法再次验证了它们相互作用的特异性.这些结果表明RPS21和FLJ20551可能通过与AID相互作用而影响阿尔茨海默氏症的形成.

关键词：相互作用 AID 筛选淀粉样前体蛋白酵母双杂交系统 β-半乳糖苷酶哺乳动物细胞免疫共沉淀基因转录细胞凋亡报告基因阳性克隆 APP 特异性验证分泌母体

壳聚糖和PHBHHx用作神经修复导管材料的研究

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生物医学工程学杂志 2002年第1期19卷 25-29页

作者：杨吟野李训虎李国富赵南明张秀芳清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100084贵州民族学院物理系贵阳550025 清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100084

壳聚糖 (Chitosan)和 PHBHHx(羟基丁酸酯和羟基己酸酯共聚物 )都是天然可降解材料。我们通过对这两种材料的亲水性、保持吸附蛋白有序结构的能力、胎鼠大脑皮层细胞在材料上生长情况以及两种材料的机械性能和后处理可加工性的研究 ,综... 详细信息

壳聚糖 (Chitosan)和 PHBHHx(羟基丁酸酯和羟基己酸酯共聚物 )都是天然可降解材料。我们通过对这两种材料的亲水性、保持吸附蛋白有序结构的能力、胎鼠大脑皮层细胞在材料上生长情况以及两种材料的机械性能和后处理可加工性的研究 ,综合评价了它们作为神经修复导管材料的可行性。指出它们都有希望作为神经修复导管的材料。

关键词：壳聚糖 PHBHHx 神经导管神经再生神经细胞蛋白吸附

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斑马鱼母源因子在胚胎发育中的作用

中国科学：生命科学 2014年第10期44卷 954-964页

作者：胥鹏飞孟安明清华大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学-北京大学生命科学联合中心北京100084

动物受精时,精子主要是将雄原核释放到卵子中,形成的合子中雌、雄原核融合为合子核,但受精卵基因组在前几次有丝分裂过程中不转录,合理的逻辑性推测是其早期发育完全依赖于卵质中储存的RNA和蛋白质,即母源因子.上世纪80年代对无脊椎动... 详细信息

动物受精时,精子主要是将雄原核释放到卵子中,形成的合子中雌、雄原核融合为合子核,但受精卵基因组在前几次有丝分裂过程中不转录,合理的逻辑性推测是其早期发育完全依赖于卵质中储存的RNA和蛋白质,即母源因子.上世纪80年代对无脊椎动物的正向遗传研究发现,母源因子在卵子和胚胎极性的决定、早期胚胎的图式形成等方面发挥了决定性作用.过去10多年来,通过对斑马鱼和小鼠突变体的研究,也证明母源因子在脊椎动物胚胎早期发育中起着重要作用.本文主要综述斑马鱼母源因子在卵母细胞的极性、卵子的激活、早期细胞分裂、母源mRNA的清除、合子基因转录激活以及胚层的形成和分化、体轴的建立等方面的作用,相关知识对于研究人类生育障碍和先天性疾病的发生机制和诊治有借鉴意义.

关键词：斑马鱼母源因子卵子合子胚胎

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小肠干细胞的命运调控

中国科学：生命科学 2014年第10期44卷 975-984页

作者：亓振陈晔光清华大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学-北京大学生命科学联合中心北京100084

小肠上皮具有快速更新的能力,是研究成体干细胞的理想系统.小肠上皮由绒毛和隐窝两部分组成,而位于小肠隐窝底部的小肠干细胞是其持续更新的源泉.近年来,以Lgr5为代表的小肠干细胞标记物的发现、Lgr5+小肠干细胞的分离培养和多种转基因... 详细信息

小肠上皮具有快速更新的能力,是研究成体干细胞的理想系统.小肠上皮由绒毛和隐窝两部分组成,而位于小肠隐窝底部的小肠干细胞是其持续更新的源泉.近年来,以Lgr5为代表的小肠干细胞标记物的发现、Lgr5+小肠干细胞的分离培养和多种转基因小鼠模型的出现,极大地促进了对小肠干细胞自我更新和分化调控的研究,使得人们可以更加深入地认识小肠干细胞命运决定的分子机制.本文简要综述了近年来人们对Wnt,BMP,Notch和EGF等信号如何在小肠干细胞命运调控中发挥作用的认识.

关键词：小肠干细胞 Wnt BMP Notch EGF命运调控