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基于体外试验和网络药理学探究虎杖抗PRRSV的作用机制

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中国兽医科学 2025年第1期55卷 129-138页

作者：黄鹤李佳明张玲珑刘雪威李焕荣董虹王建舫周双海北京农学院动物科技学院北京102206 北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京102206

本研究旨在基于体外试验和网络药理学方法探究中药虎杖抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用和潜在活性成分与机制。首先制备虎杖水提液,用CCK-8法在Marc-145细胞上测定其细胞毒性,用RT-qPCR、Western-blot及间接免疫荧光试验(IFA)分... 详细信息

本研究旨在基于体外试验和网络药理学方法探究中药虎杖抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用和潜在活性成分与机制。首先制备虎杖水提液,用CCK-8法在Marc-145细胞上测定其细胞毒性,用RT-qPCR、Western-blot及间接免疫荧光试验(IFA)分别测定不同时间和不同剂量的虎杖水提液对PRRSV增殖的抑制作用。然后用TCMSP数据库筛选虎杖的活性成分及对应靶点,用GeneCards数据库筛选PRRSV疾病靶点,进而筛选虎杖和PRRSV疾病的交集靶点,将得到的交集靶点构建蛋白质互作网络并进行GO功能与KEGG富集分析。最后对筛选出的主要活性成分与核心靶点进行分子对接验证。体外试验结果显示,最大安全浓度的虎杖水提液在PRRSV感染后第24、36、48小时均显著抑制病毒增殖,高、中剂量的虎杖水提液均可抑制PRRSV增殖并呈现剂量依赖性。网络药理学结果显示,虎杖有11种活性成分,可作用于212个抗PRRSV靶点。GO功能富集分析得到1 383个条目,KEGG通路富集分析得到179条信号通路。分子对接显示,虎杖主要活性成分白藜芦醇、槲皮素和木犀草素均能够与白介素6(IL-6)、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤蛋白P53(TP53)及AP-1转录因子亚单位(JUN)等核心靶点实现良好结合。研究结果表明,虎杖可能通过白藜芦醇、槲皮素和木犀草素等活性成分作用于IL-6、AKT1、TNF、IL-1β、P53、JUN等靶点而发挥抗PRRSV作用。

关键词：虎杖猪繁殖与呼吸综合征病毒网络药理学分子对接

刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白SRS40E的生物信息学分析

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畜牧与兽医 2025年第3期57卷 79-86页

作者：马文宇陈晓晓易婷婷李宏伟杜孟泽李秋明尹德琦北京农学院动物科学技术学院北京102206 北京警察学院刑事科学技术系警犬技术教研室北京102202

旨在探究刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白SRS40E的结构功能以及其作为抗弓形虫疫苗的候选分子的潜力。通过NCBI数据库下载表面抗原相关序列蛋白SRS40E的基因序列和氨基酸序列,通过ORFfinder网站联合GENSCAN网站对其基因序列进行ORF分析... 详细信息

旨在探究刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白SRS40E的结构功能以及其作为抗弓形虫疫苗的候选分子的潜力。通过NCBI数据库下载表面抗原相关序列蛋白SRS40E的基因序列和氨基酸序列,通过ORFfinder网站联合GENSCAN网站对其基因序列进行ORF分析,氨基酸序列依次通过Prot Param、Expasy-ProtScale、TMHMM、SignalP-4.1、SOPMA、SWISS-MODEL、IEDB、SYFPEITHI、VaxiJen 2.0程序对SRS40E蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜结构、信号肽、空间结构、磷酸化位点、抗原表位进行分析预测。结果:表面抗原相关序列蛋白SRS40E的基因序列全长1 627 bp,由396个氨基酸组成,理论分子量是42 204.65,等电点为7.87,分子式为C_(1818)H_(2951)N_(513)O_(600)S_(19),不稳定指数为47.19,脂溶性指数为72.73,亲水性总平均值为-0.314,预测显示为亲水性蛋白;该蛋白没有信号肽,具有跨膜结构;在二级结构中,α-螺旋占比18.94%、β-转角占比2.53%、β-折叠占比20.71%、无规则卷曲占比为57.83%;有53个磷酸化位点,其中30个丝氨酸磷酸化位点,22个苏氨酸磷酸化位点,1个酪氨酸磷酸化位点;有18个抗原决定簇,8个优势B细胞表位,8个优势辅助性T细胞(Th)细胞表位和2个优势细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞表位。综上,表面抗原相关序列蛋白SRS40E包含多个B、T细胞表位,可作为弓形虫疫苗的候选蛋白。

关键词：刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白 SRS40E 生物信息学

鸽圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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畜牧兽医学报 2025年第1期56卷 335-342页

作者：王星月杨志远林健张紫萱周雨婷程慧敏刘月焕胡格北京农学院动物科学技术学院北京102206 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097

为实现对鸽圆环病毒(pigeon circovirus, PiCV)的快速检测,建立了针对Cap基因的PiCV荧光定量PCR检测方法,并应用该方法进行PiCV分子流行病学调查。本研究针对PiCV核衣壳蛋白Cap基因的保守序列设计一对特异性引物,并通过优化反应条件,成... 详细信息

为实现对鸽圆环病毒(pigeon circovirus, PiCV)的快速检测,建立了针对Cap基因的PiCV荧光定量PCR检测方法,并应用该方法进行PiCV分子流行病学调查。本研究针对PiCV核衣壳蛋白Cap基因的保守序列设计一对特异性引物,并通过优化反应条件,成功建立了荧光定量PCR检测方法。此外,还对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行了全面评估。利用建立的荧光定量PCR方法对华北和西北部分地区147份临床样本进行检测,并对阳性代表样本的Cap全长序列进行遗传演化分析。结果表明,所建立的荧光定量PCR方法在1×10^(4)至1×10^(8)拷贝·μL^(-1)范围内显示出良好的线性关系,最低检测限达到1×10^(1)拷贝·μL^(-1),显著高于传统PCR方法。此方法具有良好的重复性,且不与其他常见鸽病病原产生交叉反应。采用本试验方法检测的147份华北和西北部分地区肉鸽和信鸽临床样本PiCV阳性率为85.0%,阳性样本的Cap全长序列分析及遗传演化分析结果显示,6株分离株相似性在89.8%~97.5%之间,与PiCV HeBeiTS2021株在同一个分支,亲缘关系较近。建立的PiCV荧光定量PCR方法具备灵敏、特异和稳定等优点,可用于PiCV的快速检测,同时流行病学调查结果表明,2022—2023年华北和西北部分地区PiCV感染率较高,为我国PiCV的防控研究提供数据支撑。

关键词：鸽圆环病毒 Cap基因荧光定量PCR 分子流行病学遗传演化分析

鸭瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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畜牧兽医学报 2025年第2期56卷 765-773页

作者：于江玮程慧敏林健杨宝琳黄程杨志远胡格北京农学院动物科学技术学院北京102206 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097

为建立一种鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)TaqMan荧光定量PCR快速检测方法,基于DPV US 6基因保守序列设计特异性引物和探针,构建重组质粒DPV-US6标准品,对方法敏感性、特异性和重复性进行评价,并应用于DPV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增... 详细信息

为建立一种鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)TaqMan荧光定量PCR快速检测方法,基于DPV US 6基因保守序列设计特异性引物和探针,构建重组质粒DPV-US6标准品,对方法敏感性、特异性和重复性进行评价,并应用于DPV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖及人工感染鸭器官组织上分布规律研究。结果显示,成功建立了DPV TaqMan荧光定量PCR检测方法,该方法最低检测限可以达到10 copies·μL^(-1),与番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭坦布苏病毒、鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、鸭甲型肝炎病毒(I型和III型)和鸭衣原体均无交叉反应,批间和批内变异系数均小于2.0%。DPV-AX株感染CEF细胞后,病毒核酸拷贝数检测结果表明,4~8 h病毒增殖缓慢,12~60 h迅速上升,60 h达到最高峰,72~144 h逐渐下降,与TCID 50法测定的病毒滴度相比,两种检测方法具有良好相关性,可实现拷贝数替代TCID 50。DPV人工感染鸭组织脏器的病毒载量分布检测表明,肝脏中的病毒载量最高。本试验建立的检测方法为研究DPV-AX株在CEF上的增殖规律提供工具。

关键词：鸭瘟病毒 US 6基因 TaqMan探针荧光定量PCR 增殖规律人工感染

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多配体蛋白聚糖2和4在HP-PRRSV感染猪肺MVECs中作用的研究

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中国兽医科学 2025年

作者：李汉奇傅业全胡格张倩董虹孙健张涛北京农学院动物医学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京农业职业学院动物科技学院

为了解多配体蛋白聚糖（SDC）在猪肺微血管内皮细胞（MVECs）的表达及其在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）感染中的作用，笔者采用免疫组织化学方法检测PRRSV感染仔猪肺组织和体外培养猪肺MVECs中SDC-2和SDC-4的表达，MVECs... 详细信息

为了解多配体蛋白聚糖（SDC）在猪肺微血管内皮细胞（MVECs）的表达及其在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）感染中的作用，笔者采用免疫组织化学方法检测PRRSV感染仔猪肺组织和体外培养猪肺MVECs中SDC-2和SDC-4的表达，MVECs经SDC-2和SDC-4抗体预封闭处理后，再以HP-PRRSV HN株感染，采用Western-blot法检测细胞内PRRSV N蛋白的表达水平，通过细胞划痕实验评估MVECs迁移能力，测定跨内皮单层电阻（TEER）和辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（HRP-SA）的渗漏性，以分析MVECs单层的通透性，采用Transwell法检测中性粒细胞跨MVECs单层的迁移能力。结果显示，在PRRSV感染仔猪肺组织和HP-PRRSV HN株感染的体外培养猪肺MVECs中，SDC-2和SDC-4的表达均明显增加；通过特异性抗体阻断SDC-2和SDC-4后，HP-PRRSV HN株在MVECs内复制水平显著降低。同时，病毒感染诱导的MVECs迁移率下降被显著抑制，TEER显著下降，MVECs单层对HRP-SA的渗漏显著增加，中性粒细胞跨MVECs单层迁移率显著下降。结果表明，猪肺MVECs组成型表达SDC-2和SDC-4，HP-PRRSV感染可显著上调其表达水平，它们在HP-PRRSV感染致MVECs迁移性、屏障功能和中性粒细胞外渗的变化中发挥重要作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒微血管内皮细胞中性粒细胞多配体蛋白聚糖内皮屏障

医院废水中耐药菌与耐药基因分布、传播及消毒技术的研究进展

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环境化学 2025年

作者：刘佳乐刘晓晔付玉林史晓敏北京农学院动物科学技术学院深圳市疾病预防控制中心中心实验室

世界卫生组织提出，细菌耐药性及其在环境中的传播已经成为21世纪公共卫生与环境安全的重要挑战.医院作为抗菌药物使用的主要场所，也是耐药菌（antibiotic resistant bacteria,ARB）和耐药基因（antibiotic resistance genes,ARGs）产... 详细信息

世界卫生组织提出，细菌耐药性及其在环境中的传播已经成为21世纪公共卫生与环境安全的重要挑战.医院作为抗菌药物使用的主要场所，也是耐药菌（antibiotic resistant bacteria,ARB）和耐药基因（antibiotic resistance genes,ARGs）产生与传播的重要源头.医院废水作为临床ARB和ARGs向环境扩散的关键媒介，对人类健康构成了严重威胁.虽然有关医院废水中ARB和ARGs的研究已相对较多，但目前医院废水中ARB和ARGs的分布、传播以及消毒技术对其的影响等认知尚不够全面.本文综述了医院废水中耐药菌和耐药基因的分布特征及其潜在的传播途径和公共卫生风险，概述了膜生物反应器、化学消毒（氯/臭氧消毒）、紫外线消毒、芬顿技术/光芬顿技术、光催化技术、电化学氧化技术等消毒技术对医院废水中ARB和ARGs的影响，以期为医院废水中ARB和ARGs污染的防控提供参考.

关键词：医院废水耐药菌耐药基因传播消毒技术

空肠弯曲菌Cia效应蛋白参与黏附侵袭细胞和激活炎性细胞因子的研究

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微生物学通报 2025年第2期 679-689页

作者：武金亮崔一芳郭芳芳胡格徐福洲北京农学院动物科学技术学院北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

【背景】空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围内最重要的食源性病原菌之一，在家禽盲肠内通常共生定殖，成为感染人的主要来源，目前该菌在家禽肠道内的定殖机制尚未阐明。【目的】探究空肠弯曲菌不同效应蛋白在参与黏附侵袭肠... 详细信息

【背景】空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围内最重要的食源性病原菌之一，在家禽盲肠内通常共生定殖，成为感染人的主要来源，目前该菌在家禽肠道内的定殖机制尚未阐明。【目的】探究空肠弯曲菌不同效应蛋白在参与黏附侵袭肠上皮细胞、免疫细胞及激活炎性细胞因子中的作用，解析该菌在鸡肠道内定殖的机制，为其防控提供潜在的作用靶标。【方法】首先利用同源重组技术构建空肠弯曲菌NCTC11168菌株不同效应蛋白CiaB、CiaC、CiaD和CiaI的基因缺失突变株，测定突变株对细菌生物膜形成和自身凝集能力的影响，进而测定突变株对肠上皮细胞Caco-2的黏附和侵袭能力，以及对鸡巨噬细胞系HD11的侵袭能力，最后利用RT-qPCR鉴定突变株感染HD11细胞对炎性细胞因子表达的影响。【结果】构建空肠弯曲菌不同效应蛋白CiaB、CiaC、CiaD和CiaI的基因缺失突变株；△ciaD突变株生物膜形成能力降低，△ciaC、△ciaD和△ciaI突变株自身凝集能力增强；△ciaB突变株黏附侵袭Caco-2细胞能力增强，而△ciaC、△ciaD和△ciaI突变株黏附侵袭Caco-2以及侵袭HD11细胞能力均显著降低；空肠弯曲菌感染HD11显著提高不同炎性细胞因子表达水平，△cia B、△ciaC和△ciaD突变株显著降低不同炎性因子表达水平，而△ciaI突变株显著增强不同炎性因子表达水平。【结论】空肠弯曲菌不同Cia效应蛋白在黏附侵袭肠上皮细胞、免疫细胞及激活炎性细胞因子表达中发挥不同的作用，本研究为解析空肠弯曲菌与宿主肠道上皮相互作用机制提供了理论依据，并为该菌的防控提供了潜在靶标。

关键词：空肠弯曲菌 Cia效应蛋白黏附侵袭炎性细胞因子

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异噁唑啉类动物驱虫药的研究及应用

畜牧兽医学报 2025年第1期56卷 126-135页

作者：王达锋马叶涵陈春龚佳豪四朗玉珍张军忍郭大伟南京农业大学动物医学院南京210095 北京农学院动物科学技术学院北京102206 南京派特美生科技有限公司南京210031 西藏自治区农牧科学院草业研究所拉萨850000

异噁唑啉类药物具有多种功效。近年来,因其对各种类型体外寄生虫的疗效好、安全性高,被广泛应用于抗宠物体外寄生虫。异噁唑啉类药物选择性地抑制无脊椎动物的谷氨酸和γ-氨基丁酸门控氯离子通道,使其神经系统紊乱而瘫痪死亡。本文从结... 详细信息

异噁唑啉类药物具有多种功效。近年来,因其对各种类型体外寄生虫的疗效好、安全性高,被广泛应用于抗宠物体外寄生虫。异噁唑啉类药物选择性地抑制无脊椎动物的谷氨酸和γ-氨基丁酸门控氯离子通道,使其神经系统紊乱而瘫痪死亡。本文从结构特点、作用机制、药代动力学、药效学和临床驱虫应用等方面综述了异噁唑啉类驱虫药近年来的研究,分析了兽医领域中不同药物的应用情况及潜在毒性,展望异噁唑啉类动物驱虫药的未来发展情况。

关键词：异噁唑啉体外寄生虫安全性兽医

猪胸膜肺炎放线杆菌通过Adh诱导猪肺泡巨噬细胞氧化应激

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微生物学通报 2025年第2期 799-810页

作者：尹小丽文博王瑞彪胡建和张鑫赫白跃宇丁轲朱春玲王艳辉王磊河南科技学院动物科技学院郑州大学农学院河南科技大学动物科技学院南关区福祉街道办事处

【背景】猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)可导致严重的肺脏炎性损伤。细胞氧化应激与肺脏炎性损伤密切相关，但是APP感染和细胞氧化应激之间的关系仍不清楚。【目的】明确APP感染和细胞氧化应激之间的关系并... 详细信息

【背景】猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)可导致严重的肺脏炎性损伤。细胞氧化应激与肺脏炎性损伤密切相关，但是APP感染和细胞氧化应激之间的关系仍不清楚。【目的】明确APP感染和细胞氧化应激之间的关系并对其机制进行初步探索，从而为进一步阐明APP致病机理奠定基础。【方法】APP野生菌5b (5b WT)和Adh基因缺失菌(5bΔAdh)分别感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage, PAM)后，荧光显微镜观察细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平，RT-qPCR和Western blotting检测氧化应激相关分子的表达变化，利用NLRP3炎性体抑制剂MCC950处理细胞，分别感染5b WT和5bΔAdh后，生化反应法检测细胞内乳酸和丙酮酸含量，流式细胞术检测细胞内ROS水平及线粒体膜电位变化情况；采用tandem mass tag(TMT)标记定量蛋白质组学测序分析细胞蛋白表达变化并检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的释放情况。【结果】免疫荧光和流式细胞术检测结果均显示，5bWT组ROS水平明显高于5bΔAdh组，但经MCC950处理后可以逆转这一上升趋势；生化指标检测结果表明，相较于5bΔAdh组，5bWT组的丙酮酸和乳酸的含量下降更显著，而且经过MCC950抑制NLRP3活性后，细菌感染组的丙酮酸和乳酸的含量均有显著回升，与对照组无显著差异；5bWT和5bΔAdh感染后，猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage, PAM)中氧化应激关键转录因子核转录因子红系2相关因子2 (nuclear factor-erythroid 2-related factor 2, Nrf2)和GCLM均呈现出下降的趋势；Western blotting结果表明5b WT和5bΔAdh组烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(nicotinamide adenine dinucleotide oxidase 2, NOX2)含量增高，并且5b WT组含量升高更明显；蛋白质组学分析表明共有15个蛋白的表达出现显著变化，GO分析发现这些差异蛋白主要参与ATP代谢、嘌呤代谢、炎症等重要生物学过程，KEGG分析发现这些蛋白与炎症调节、能量转运和氧化磷酸化等相关的信号通路密切相关；重要的是5b WT和5bΔAdh感染PAM后，线粒体受损细胞比例分别为69.6%和58.5%，均高于对照组，mtDNA也大量释放到细胞质中。【结论】APP可以通过Adh引起PAM氧化应激，并且NLRP3炎性体活化参与细胞氧化应激的形成。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌猪肺泡巨噬细胞 Adh 活性氧线粒体损伤