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中国兽医杂志 1988年第8期 56-56页

世界许多国家政府都非常重视大学后科技与管理人员的继续教育,而且早已成为一种完善制度。去年国家教委、科委、经委和劳动人事部、财政部、科协等六部门发布的《关于开展大学后继续

关键词：继续教育继续工程教育兽医学院

锡兰钩虫ASP4基因的表达与免疫保护效果分析

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中国农业大学学报 2024年第11期 102-111页

作者：聂林冲袁浩杨子鹏何厚劲李文豪杨留禄金梦圆袁子国华南农业大学兽医学院

为克隆锡兰钩虫ASP4基因（Ace-ASP4），评估其重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫保护效果，先扩增AceASP4基因序列，并对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析，并原核表达ASP4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠，然后利用CCK-8法和间接ELISA... 详细信息

为克隆锡兰钩虫ASP4基因（Ace-ASP4），评估其重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫保护效果，先扩增AceASP4基因序列，并对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析，并原核表达ASP4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠，然后利用CCK-8法和间接ELISA方法分别检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力和血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。同时检测首免后小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4和L-10水平。最后，在三免后14 d经口感染500条L3幼虫，48h后检测肺、胃肠道和肌肉的虫体数量，计算减虫率，以评估其免疫保护效果。结果表明：1)Ace-ASP4基因的ORF全长为750 bp，编码249个氨基酸。生物信息学分析显示，Ace-ASP4编码蛋白为亲水性蛋白，具有信号肽序列且无跨膜结构，其三维结构模型质量良好（GMQE值为0.9）。2)Ace-ASP4蛋白分子大小为27 ku，在上清和沉淀中均有表达，但主要以包涵体形式富集于沉淀中，并具有良好的免疫反应性。3)Ace-ASP4重组蛋白可诱导免疫小鼠IgG、IgG1和IgG2a抗体显著上升，并极显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖（P<0.01）。与PBS对照组相比，在首免后第35天用Ace-ASP4重组蛋白免疫小鼠后其体内的IFN-γ、IL-2、IL-4和L-10显著升高（P<0.05）。4）攻虫后，与PBS对照组小鼠相比，50μg/mL重组蛋白免疫小鼠在肺中获得了52%的减虫率，在胃肠道中获得了46%的减虫率，在肌肉中获得了61%的减虫率。综上，本研究成功克隆表达了Ace-ASP4蛋白，Ace-ASP4蛋白能使免疫小鼠产生抗体，促进其脾淋巴细胞增殖等，为进一步研究ASP4基因的生物学功能奠定基础，也为研制锡兰钩虫疫苗提供参考数据。

关键词：锡兰钩虫 ASP4基因原核表达免疫保护效果分析

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大黄酸衍生物的合成及其抗炎活性评价

华南农业大学学报 2024年

作者：李志鹏谭露露邓尧任昊廖晓萍孙坚韩璐华南农业大学兽医学院

【目的】大黄酸具有抗癌、抗菌、抗炎等多种生物活性，但其溶解性差、毒性作用强、生物利用度低，限制了临床应用；本研究选择羟基癸酸和癸醇作为修饰物对大黄酸进行结构修饰，以提高脂溶性、降低毒副作用、提高抗炎抗氧化活性，促进临... 详细信息

【目的】大黄酸具有抗癌、抗菌、抗炎等多种生物活性，但其溶解性差、毒性作用强、生物利用度低，限制了临床应用；本研究选择羟基癸酸和癸醇作为修饰物对大黄酸进行结构修饰，以提高脂溶性、降低毒副作用、提高抗炎抗氧化活性，促进临床应用。【方法】首先，基于大黄酸构效关系，选择大黄酸的羧基与十碳羟基癸酸和癸醇进行酯化反应，合成4种大黄酸衍生物——大黄酸-5-癸醇（R-5HD）、大黄酸-癸醇（R-DA）、大黄酸-10-羟基癸酸（R-10HA）、大黄酸-10-羟基-2-癸烯酸（R-10HDA），通过核磁共振氢谱(1H nuclear magnetic resonance，1H NMR)、傅里叶变换红外光谱（Fourier transfrom infrared spectroscopy，FTIR）确定大黄酸衍生物的化学结构特征。其次，采用CCK-8试剂盒法测定大黄酸及其衍生物对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7存活率的影响，确定大黄酸及其衍生物的适用浓度范围。最后，为了验证大黄酸衍生物的抗炎活性，构建脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的RAW 264.7细胞模型，测定其对活性氧（Reactive oxygen species，ROS）、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）表达量的影响。通过ROS荧光探针双氯荧光黄乙酸乙酯（2， 7-dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA）分析大黄酸衍生物的抗氧化活性。【结果】通过1H NMR和FTIR方法证明4种大黄酸衍生物成功制备。与大黄酸相比，大黄酸衍生物显著提高了RAW 264.7细胞存活率。通过LPS诱导的RAW 264.7细胞模型发现，4种大黄酸衍生物均能显著降低NO的释放量，R-DA显著降低了TNF-α和IL-6以及IL-1β的表达量。与大黄酸相比，R-5HD和R-DA显著抑制ROS的产生。【结论】大黄酸与十碳羟基癸酸或者癸醇发生酯化反应，经过体外抗炎模型验证，大黄酸经修饰后能显著降低大黄酸的细胞毒性，在LPS处理的RAW 264.7细胞模型中更好地发挥抗炎抗氧化活性。本研究聚焦于十碳羟基癸酸或者癸醇对大黄酸进行结构修饰，通过体外实验证实，R-DA具有较强的抗炎、抗氧化活性，为后续大黄酸衍生物的研究和开发提供理论依据。

关键词：大黄酸羟基癸酸癸醇大黄酸衍生物抗炎抗氧化

沉默PREX1表达对CHMp细胞增殖及侵袭性的影响

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3706-3713页

作者：徐禧莹王毅恒区倩婷洪琳媛刘栩靖卢羡盈贾坤华南农业大学兽医学院广州510642

犬乳腺肿瘤是犬常发肿瘤之一,且有50%左右为恶性,其转移倾向明显,易引起动物死亡。Rho-GTPase蛋白家族中的PREX1蛋白,过度激活会导致Rac-GEF功能紊乱,影响细胞周期,改变细胞生理功能,PREX1的改变可能对细胞癌变有促进作用。为探讨PREX1... 详细信息

犬乳腺肿瘤是犬常发肿瘤之一,且有50%左右为恶性,其转移倾向明显,易引起动物死亡。Rho-GTPase蛋白家族中的PREX1蛋白,过度激活会导致Rac-GEF功能紊乱,影响细胞周期,改变细胞生理功能,PREX1的改变可能对细胞癌变有促进作用。为探讨PREX1对犬乳腺肿瘤细胞生理功能的影响,本研究使用shRNA沉默PREX1表达,利用Western blot试验检测沉默后细胞PREX1蛋白表达量的变化,通过CCK-8试验、克隆形成试验探究其对犬乳腺肿瘤细胞系CHMp增殖能力的影响,通过划痕试验和Transwell试验探索沉默其对犬乳腺肿瘤细胞系CHMp侵袭性的影响。研究结果表明,PREX1的低表达,可以抑制CHMp的增殖及侵袭能力。

关键词：犬乳腺肿瘤 CHMp细胞增殖迁移侵袭

一株铜绿假单胞菌噬菌体全基因组分析及与抗生素体外联合应用效果

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 727-738页

作者：王晋宇张凯川王芮杰高铎蒋祺丰贾坤华南农业大学兽医学院广州510642

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分... 详细信息

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分离到一株铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB,TEM显示病毒颗粒具有一个平均直径为73.02 nm的二十面体头部和一个平均长度为155.57 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,具有双链DNA基因组,宿主谱较窄,耐低温(-20℃)并且在37℃达到最适温度,有良好的酸碱耐受性,在pH为3~12时保持活性,最佳MOI为0.001,一步生长曲线显示潜伏期为10 min,爆发量为50 PFU·cell^(-1),吸附性试验表明PaVOB在10 min的吸附率为99.1%。PaVOB基因组全长为72179 bp,(G+C)%含量为54.81%,与VB PaeP FBPa1亲缘关系小于0.1,ORF预测显示,PaVOB包括74个ORF,软件预测均未发现毒力基因、耐药基因和tRNA存在。此外,抗生素联合应用结果显示,PaVOB与头孢曲松联合应用有协同作用,在效价为107 PFU·mL^(-1)时与恩诺沙星产生协同作用,与庆大霉素产生无关作用。铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB对环境适应能力强,且基因组信息清晰,能够选择性地与不同抗生素联合应用发挥协同作用,具有治疗临床耐药铜绿假单胞菌感染的可能性。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体生物学特性基因组学抗生素联合应用

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五味子醇甲对鸡大肠杆菌病的预防效果观察

畜牧兽医学报 2024年

作者：包佳鹭张妍王晓丹河北农业大学中兽医学院

为明确五味子醇甲对鸡大肠杆菌病的预防作用，将180只1日龄蛋鸡随机分为6组：空白对照组、E. coli感染组、50 mg·kg-1五味子醇甲组、100 mg·kg-1五味子醇甲组、200 mg·kg-1五味子醇甲组和抗生素组（氟苯尼考）。饲养至14 d时按分组... 详细信息

为明确五味子醇甲对鸡大肠杆菌病的预防作用，将180只1日龄蛋鸡随机分为6组：空白对照组、E. coli感染组、50 mg·kg-1五味子醇甲组、100 mg·kg-1五味子醇甲组、200 mg·kg-1五味子醇甲组和抗生素组（氟苯尼考）。饲养至14 d时按分组剂量开始给药，给药5 d后，除空白对照组外其余各组均腹腔接种大肠杆菌菌液，检测雏鸡体重、免疫器官指数、脾病理变化和超微结构、血细胞数、血清炎症因子、抗体水平和免疫球蛋白的变化。结果表明，五味子醇甲能够提高患病雏鸡体重，显著降低脾指数，减轻由于大肠杆菌感染导致的脾组织结构以及细胞中细胞核和线粒体的损伤，显著降低患病鸡的白细胞数量以及血清中分为TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平，并显著升高IgM、IgG和NDV的抗体水平。综上所述，五味子醇甲能够通过调节免疫对鸡大肠杆菌病起到抗病作用。

关键词：五味子醇甲鸡大肠杆菌病免疫

基于网络药理学和分子对接探究中药复方对马蹄叶炎的作用机制

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内蒙古农业大学学报(自然科学版) 2024年第1期45卷 1-11页

作者：秦少杰王超巩志国赵佳敏刘鑫煜于琢雅白云洁于嘉辉王志毛伟内蒙古农业大学兽医学院北京农业职业学院动物科技学院

为了探究红花、当归、没药和黄芪组成的中药复方在马蹄叶炎中的作用机制，本研究通过中药系统药理学数据库与分析平台检索该中药复方的化学成分及马蹄叶炎的相关靶点基因，在得到该中药复方防治马蹄叶炎的交集靶点基因后，对靶点基因进... 详细信息

为了探究红花、当归、没药和黄芪组成的中药复方在马蹄叶炎中的作用机制，本研究通过中药系统药理学数据库与分析平台检索该中药复方的化学成分及马蹄叶炎的相关靶点基因，在得到该中药复方防治马蹄叶炎的交集靶点基因后，对靶点基因进行GO功能与KEGG通路富集分析，最后对药物和靶点进行蛋白分子对接，并对结果进行可视化处理。结果表明：从该中药复方中筛选的主要有效活性成分包括毛莨黄素、红花素、鞣花酸、花葵素、谷甾醇等，这些药物活性成分主要作用靶点有600个。马蹄叶炎的相关靶点基因170个，得到31个交集靶点基因。PPI网络结果表明，EGFR、TNF、ERBB2和STAT1等基因可能为药物治疗马蹄叶炎的核心靶点基因。KEGG通路富集结果表明，MAPK,PI3K-Akt和TNF等信号通路可能为该复方治疗马蹄叶炎的信号通路；GO富集结果表明，靶点主要涉及受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、肿瘤坏死因子介导的信号通路、STAT蛋白酪氨酸磷酸化正调控等。分子对接结果显示，该中药复方中异鼠李素和异黄烷酮可与关键靶点TNF具有良好的连接活性。上述结果表明，该中药复方可对EGFR、TNF、AKT1、MAPK3、IL-2、ERBB2和STAT1的调控作用，可能通过调控MAPK、PI3K-Akt和TNF等信号通路激活，从而发挥对马蹄叶炎的治疗作用。

关键词：网络药理学中药复方马蹄叶炎分子对接作用机制

改良育阴方对非洲猪瘟病毒感染PAMs的cGAS-STING通路影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：陈晓丽周佳浩周静屈倩王志华熊鹰朱咏琪贾伟新吕伟杰郭世宁华南农业大学兽医学院华南农业大学国际中兽医研究所

为评价中药体外对非洲猪瘟病毒的抑制作用，本研究将5种试验用药：连翘、马勃、改良育阴方（MYY）、复方鱼腥草（复方2）和银翘马勃散（复方3），通过qPCR检测不同中药在被非洲猪瘟病毒（ASFV）感染的猪肺泡巨噬细胞（PAMs)中，对ASFV... 详细信息

为评价中药体外对非洲猪瘟病毒的抑制作用，本研究将5种试验用药：连翘、马勃、改良育阴方（MYY）、复方鱼腥草（复方2）和银翘马勃散（复方3），通过qPCR检测不同中药在被非洲猪瘟病毒（ASFV）感染的猪肺泡巨噬细胞（PAMs)中，对ASFV编码的衣壳蛋白p72的影响，筛选出可以显著降低ASFV-p72基因表达的中药为改良育阴方（MYY)。采用LC-MS分析检测出改良育阴方的主要化学成分；采用CCK8法观察改良育阴方对猪肺泡巨噬细胞(PAMs)活力的影响；荧光定量PCR检测ASFV-p72基因的表达；Western blot和ELISA检测CGAS-STING信号通路蛋白表达水平；RU.521作为cGAS抑制剂用于验证MYY在cGAS-STING通路中对ASFV的作用。结果表明，在PAMs中，MYY可以显著降低ASFV-p72基因表达，在ASFV感染2 h给药效果最佳，对ASFV感染PAMs后的细胞活力具有浓度依赖性改善作用。攻毒后2 h使用MYY发现PAMs细胞上清液中干扰素基因刺激蛋白（STING）、TANK结合激酶1（TBK1）、干扰素调节因子3（IRF3）、干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）表达量的下降，PAMs细胞内环状GMP-AMP合成酶（cGAS）、干扰素β（IFNβ）蛋白量表达增加，MYY可激活cGAS-STING-TBK1-IRF3-IFNβ信号通路，促进IFITM3的表达。经RU.521处理后，MYY仍能提高细胞活力，降低ASFV-p72基因的表达。综上所述，MYY具有抑制ASFV的潜在作用，可能与cGAS-STING信号通路的激活促进IFITM3的表达有关。

关键词：改良育阴方非洲猪瘟病毒 LC-MS分析 ASFV-p72基因 CGAS-STING信号通路

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高硼暴露通过诱导细胞焦亡加剧鸡肝细胞损伤

畜牧兽医学报 2024年

作者：何婷刘思颖全锦雯苏伟谦黄江利李玙萌刘忠华余文兰华南农业大学兽医学院华南农业大学实验动物中心

旨在探索硼暴露诱导鸡肝细胞损伤的作用机制。试验选取30只AA肉品鸡随机分为对照组（CG）、低硼组（LBG）和高硼组（HBG），在基础日粮中分别添加不同剂量硼进行饲喂：基础日粮(硼 0 mg · kg-1)，低硼日粮(硼 120 mg · kg-1)、高硼日... 详细信息

旨在探索硼暴露诱导鸡肝细胞损伤的作用机制。试验选取30只AA肉品鸡随机分为对照组（CG）、低硼组（LBG）和高硼组（HBG），在基础日粮中分别添加不同剂量硼进行饲喂：基础日粮(硼 0 mg · kg-1)，低硼日粮(硼 120 mg · kg-1)、高硼日粮(硼 240 mg · kg-1)，处理7 d及14 d后采集肝组织。使用ICP-MS测定肝组织中的硼含量，全自动血生化分析仪检测ASL及ALT水平，HE染色观察肝组织病理变化，透射电镜观察肝细胞超微结构变化，免疫组化和免疫荧光检测肝细胞焦亡相关蛋白NLRP3及IL-1β定位表达情况，RT-qPCR和Western blot 检测NLRP3、Casapse-1、IL-1β、IL-18和GSDMD的mRNA和蛋白表达水平。结果显示，蓄积于肝组织中的硼含量随着硼暴露时间和剂量的增加而增加。此外，14 d-低硼组（14 d-LBG）和高硼组（14 d-HBG）的肝组织结构明显破坏，并且细胞焦亡水平随硼剂量的增加而加剧；与同时间的CG相比，14 d-LBG中NLRP3、Caspase-1、IL-18的mRNA表达水平显著上升（P<0.05），14 d-HBG的NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18及GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著上升（P<0.05）。高硼暴露可通过诱导细胞焦亡进而造成鸡肝细胞损伤。

关键词：硼细胞焦亡鸡肝细胞

鸡主要组织相容性复合体分子结构与抗病性关系研究进展

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中国畜牧兽医 2024年第1期51卷 242-254页

作者：贾玉生廖明代曼曼华南农业大学兽医学院广州510642

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为鸡免疫系统中的一个重要部分,主要负责将抗原表位递呈到特异性T淋巴细胞中,诱导免疫应答反应。鸡MHC优势表达1个MHCⅠ分子BF2和1个MHCⅡ分子BLB2,其中MHCⅠ分子结合来... 详细信息

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为鸡免疫系统中的一个重要部分,主要负责将抗原表位递呈到特异性T淋巴细胞中,诱导免疫应答反应。鸡MHC优势表达1个MHCⅠ分子BF2和1个MHCⅡ分子BLB2,其中MHCⅠ分子结合来自细胞质中蛋白多肽,MHCⅡ分子结合来自细胞内囊泡中蛋白多肽和细胞外源性多肽。MHC等位基因多态性对其分子空间结构和结合肽段特性非常重要。不同单倍型MHC由于等位基因的差异其肽结合基序也存在差异,进而影响MHC分子递呈抗原肽数量,影响T细胞免疫应答强度,最终导致不同单倍型鸡对同一病原体表现出抗性或易感性。与人MHC分子相比,紧凑且简单的鸡MHC优势表达单个Ⅰ类分子的特性可以决定鸡是否会对某种病原体存在抗性。为了更好地认识鸡MHC分子在病毒感染过程中的作用及抗病性机制,解析其结构并进行功能研究非常必要。作者主要介绍了鸡MHC的分子结构特征,重点比较了不同单倍型MHC分子结构差异与抗病性的关系,总结了鸡MHC肽结合基序和禽流感病毒抗原肽的鉴定工作,为进一步理解MHC分子递呈肽给T淋巴细胞的机制和开发T细胞表位疫苗奠定基础。

关键词：鸡主要组织相容性复合体(MHC) 结构抗病性