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Wnt3a转基因基质细胞的建立及其对脐血CD34^+造血干/祖细胞扩增作用的研究

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生物化学与生物物理进展 2005年第9期32卷 835-841页

作者：师伟韩姝李艳华谢小燕施双双陈琳白慈贤闫舫南雪王韫芳裴雪涛军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

Wnt信号通路在造血干/祖细胞自我更新的过程中发挥至关重要的作用.纯化的Wnt3a蛋白可以实现造血干/祖细胞的扩增.通过病毒转染原代小鼠骨髓基质细胞,建立转基因滋养层细胞.通过共培养对转基因滋养层细胞扩增CD34+造血干/祖细胞的作用进... 详细信息

Wnt信号通路在造血干/祖细胞自我更新的过程中发挥至关重要的作用.纯化的Wnt3a蛋白可以实现造血干/祖细胞的扩增.通过病毒转染原代小鼠骨髓基质细胞,建立转基因滋养层细胞.通过共培养对转基因滋养层细胞扩增CD34+造血干/祖细胞的作用进行了研究.实验结果显示,与普通滋养层加细胞因子组相比,经转基因滋养层加细胞因子组培养的CD34+造血干/祖细胞集落形成能力(CFC)是其(1.55±0.06)倍;混合集落形成能力是其(1.95±0.26)倍;高增殖潜能集落形成能力(HPP-CFC)是其(1.45±0.40)倍;LTC-IC活性是其(3.83±0.86)倍.结果表明,转基因滋养层细胞通过分泌具有天然活性的Wnt3a蛋白能在体外有效地扩增造血干/祖细胞的数量.

关键词： Wnt3a 滋养层细胞造血干/祖细胞扩增

腺病毒载体介导PDX-1在骨髓间充质干细胞中的表达

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生物化学与生物物理进展 2004年第6期31卷 538-542页

作者：李艳华张锐王韫芳赵连旭陈琳岳文裴雪涛军事医学科学院输血研究所干细胞生物学研究室北京100850

为研究PDX 1基因在骨髓间充质干细胞中的表达情况及生物学功能的发挥 ,构建了含PDX 1基因的重组腺病毒载体 .酶切PDX 1基因并连入穿梭质粒 pAdTrack CMV .用电穿孔法使穿梭质粒pAdTrack CMV PDX 1与病毒骨架质粒 pAdEasy 1在大肠杆菌BJ5... 详细信息

为研究PDX 1基因在骨髓间充质干细胞中的表达情况及生物学功能的发挥 ,构建了含PDX 1基因的重组腺病毒载体 .酶切PDX 1基因并连入穿梭质粒 pAdTrack CMV .用电穿孔法使穿梭质粒pAdTrack CMV PDX 1与病毒骨架质粒 pAdEasy 1在大肠杆菌BJ5 183中同源重组 .利用脂质体介导重组腺病毒载体转染 2 93细胞 ,包装出完整的腺病毒 .分离、培养、扩增骨髓间充质干细胞 .用重组腺病毒感染间充质干细胞 .用荧光显微镜、RT PCR、免疫荧光染色等方法检测PDX 1、胰岛素基因及蛋白质的表达 ,用放射免疫分析法检测转基因细胞分泌胰岛素情况 .结果表明 :通过测序、PCR、酶切等鉴定PDX 1基因已正确插入穿梭质粒中 ,并与病毒骨架质粒重组 .重组腺病毒滴度为 6 3× 10 7PFU/ml.通过荧光显微镜观察证实重组腺病毒可高效感染骨髓间充质干细胞 ,经RT PCR、免疫荧光染色证实转染 pAd PDX 1后培养 7天的细胞中有PDX 1及胰岛素基因的表达 .这些转基因的细胞向胞外分泌的胰岛素量为 (15 2 1± 3 5 0 )mIU/L .

关键词： PDX-1 腺病毒载体间充质干细胞

武夷山自然保护区蚊虫种类调查与重要蚊种种群遗传结构分析

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中国热带医学 2024年第5期24卷 499-505页

作者：王明谢静文杜雨彤王刚尹紫鸽蔡京虹刘庆张恒端赵彤言史丽内蒙古农业大学园艺与植物保护学院昆虫系统进化与多样性研究室内蒙古呼和浩特010018 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071 杭州国际旅行卫生保健中心浙江杭州310061

目的了解武夷山自然保护区蚊虫种类分布特征和重要蚊种的种群遗传多样性,为该地区蚊媒传染病防制提供科学依据。方法2022—2023年在武夷山自然保护区内选择16个采样点,幼虫采集使用吸管法、成蚊采集使用诱蚊灯法。利用形态特征和基于细... 详细信息

目的了解武夷山自然保护区蚊虫种类分布特征和重要蚊种的种群遗传多样性,为该地区蚊媒传染病防制提供科学依据。方法2022—2023年在武夷山自然保护区内选择16个采样点,幼虫采集使用吸管法、成蚊采集使用诱蚊灯法。利用形态特征和基于细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidase subunitⅠ,COⅠ)和细胞色素氧化酶亚基Ⅱ(cytochrome c oxidase subunitⅡ,COⅡ)的分子鉴定技术相结合鉴定蚊种。利用ClustalX、DnaSP 5.0、Network 4.***.1.0等软件进行日本伊蚊(***)、白纹伊蚊(***)、骚扰阿蚊(***)种群遗传分化程度和基因流的分析。结果经鉴定,本研究在武夷山自然保护区采集的蚊虫隶属于蚊科8属30种。其中伊蚊属10种,库蚊属13种,阿蚊属1种,直角蚊属1种,蓝带蚊属1种,杵蚊亚属1种,按蚊属1种,巨蚊属2种。3种重要蚊虫种群遗传结构分析结果表明,日本伊蚊单倍体多样性指数为0.9947,种群间普遍达到中等分化程度,种群6与种群12之间遗传分化程度较高;白纹伊蚊单倍体多样性指数为0.6340,种群1和2与各种群之间遗传分化程度较大;骚扰阿蚊单倍体多样性指数为0.7033,种群2与种群3、种群4、种群6、种群7之间遗传分化程度较大,基因流较小。结论武夷山自然保护区蚊虫物种丰富。本研究对蚊种组成、分布开展了较为全面的调查,分析了日本伊蚊、白纹伊蚊、骚扰阿蚊重要蚊种的种群遗传结构特征,为当地蚊媒生态研究和蚊媒疾病防控等方面提供了科学数据参考。

关键词：蚊武夷山细胞色素氧化酶亚基Ⅰ 细胞色素氧化酶亚基Ⅱ 物种鉴定种群遗传结构

细胞角蛋白19启动子调控的双报告载体的构建及其在肝干/祖细胞分化研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 2010年第7期37卷 728-736页

作者：张衡贾雅丽岳文陈琳谢小燕南雪何丽娟裴海云裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向.首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白... 详细信息

肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向.首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白19(CK19)启动子片段,构建了CK19启动子调控的海肾荧光素酶和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)双报告载体(pSicoR-CK19-hrl-mrfp).其次,将上述慢病毒载体转染肝干/祖细胞后,通过流式细胞分选获得稳定转染的细胞株.再次,将上述细胞株与表达"上皮形态发生素"(Epimorphin,EPM)的PT67细胞共培养后,整合有pSicoR-CK19-hrl-mrfp表达载体的肝干/祖细胞不仅形态发生了变化,而且排列为二维环状结构,另外还检测到由CK19启动子启动表达的海肾荧光素酶和RFP,细胞形态和基因表型都证明肝干/祖细胞经诱导已经分化成为BECs.与此形成对照的是肝干/祖细胞与不表达EPM的PT67细胞共培养后,没有观测到上述的变化.所以,CK19启动子调控的双报告载体不仅可以实时地显示肝原始细胞在不同的诱导环境下的分化走向,而且还可以定量地检测CK19启动子活性的变化情况.总之,这一载体的成功构建将为研究肝干/祖细胞的分化提供了便捷的工具,同时也有助于筛选可诱导肝干/祖细胞定向分化的分子.

关键词：细胞角蛋白海肾荧光素酶红色荧光蛋白肝干/祖细胞分化

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肾类器官血管化研究进展

中国药理学与毒理学杂志 2024年第8期38卷 633-640页

作者：刘鹤岳亮吴成君檀英霞大连理工大学医学部生物医学工程学院辽宁大连116000 军事医学研究院北京100850

肾类器官是利用人多能干细胞或组织来源的成体干细胞诱导分化形成主要包含肾小管结构的类器官,由于缺乏血管网络的支持,其组织结构不成熟和生长受限,如何实现肾类器官的血管化是该领域亟待解决的难题。目前,免疫缺陷动物移植、改变诱导... 详细信息

肾类器官是利用人多能干细胞或组织来源的成体干细胞诱导分化形成主要包含肾小管结构的类器官,由于缺乏血管网络的支持,其组织结构不成熟和生长受限,如何实现肾类器官的血管化是该领域亟待解决的难题。目前,免疫缺陷动物移植、改变诱导分化方案、微流控芯片及调整细胞外基质和氧气浓度等方法可促进肾类器官血管化,为肾类器官科学研究及其临床应用提供了新的研究视角。

关键词：肾类器官血管化微流控异种移植细胞外基质

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外泌体及其在病毒感染下的双重作用

中国输血杂志 2024年第7期37卷 831-838页

作者：韦芊芊陈利民李玉佳李世林中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052

外泌体是1种由细胞内释放到细胞外微环境的胞外体,是1种远距离传输生物学信息的载体,可对机体免疫系统产生双重调节作用,研究表明病毒可以挟持内体——外泌体途径进行传播。本文我们回顾了外泌体在病毒感染时发挥的作用,一方面外泌体可... 详细信息

外泌体是1种由细胞内释放到细胞外微环境的胞外体,是1种远距离传输生物学信息的载体,可对机体免疫系统产生双重调节作用,研究表明病毒可以挟持内体——外泌体途径进行传播。本文我们回顾了外泌体在病毒感染时发挥的作用,一方面外泌体可以传播抗病毒物质和引发免疫反应,对抗病毒的感染,另一方面外泌体可以作为传播病毒的潜在介质,已经被证明与多种病毒的传播和免疫逃逸息息相关。了解外泌体在病毒感染中的作用,对于检测血液中的病毒,提高血液安全性,以及寻找和研发抗病毒的药物至关重要。

关键词：外泌体病毒 ESCRT 自噬免疫

表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒的构建及鉴定

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国际病毒学杂志 2024年第1期31卷 22-27页

作者：邵云亭楼张蓉符军李山虎黄芳王芃吴成君大连理工大学医学部基础医学院 116024 山东大学微生物技术国家重点实验室济南250100 军事医学研究院生物工程研究所北京100850

目的构建表达HPV16E7基因的重组腺病毒质粒.方法设计携带酶切位点和无酶切位点的两对引物以扩增ccdBKan目的片段.分别将ccdBKan与质粒pBR322-Ad4-eGFP共转至电转感受态GB08red-gyr462构建两种表达ccdBKan基因的重组Ad4质粒.利用ccdB正... 详细信息

目的构建表达HPV16E7基因的重组腺病毒质粒.方法设计携带酶切位点和无酶切位点的两对引物以扩增ccdBKan目的片段.分别将ccdBKan与质粒pBR322-Ad4-eGFP共转至电转感受态GB08red-gyr462构建两种表达ccdBKan基因的重组Ad4质粒.利用ccdB正反筛选系统与ExoCET/Red重组结合将HPV16E7基因插入Ad4的E1A区,构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒pBR322-Ad4-E 1 Amut-C16E7P,经酶切、测序验证.提取质粒pBR322-Ad4-EIAmut-C 16E7P释放基因组,转染293T细胞以包装和扩增病毒,用病毒感染293T细胞,检测HPV16E7基因在细胞内的转录水平和蛋白表达.重组病毒经肌肉接种BALB/C裸鼠,收集小鼠血清用于病毒中和实验.结果成功构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒,并在293T细胞中成功包装出重组病毒.qRT-PCR和Western blotting验证了重组病毒HPV16 E7基因的成功表达,病毒中和实验结果提示经重组病毒免疫后的小鼠血清能够中和Ad4-HPV16E7.结论成功构建了表达HPV16E7基因的重组腺病毒株,为进一步研究HPV16 E7在癌症发病机制中的作用以及HPV感染相关癌症的治疗方法提供新的思路和依据,并且可能为HPV治疗性疫苗的研究探索提供了一种潜在策略.

关键词： HPV16 E7基因腺病毒重组病毒

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转基因肝星状细胞株对肝细胞生长的支持作用

中华肝脏病杂志 2005年第1期13卷 45-48页

作者：王韫芳南雪李艳华张锐岳文闫舫裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞生物学研究室北京100850

目的探讨转基因肝星状细胞株CFSC/HGF对大鼠肝细胞生长的支持作用.方法将大鼠原代肝细胞培养于稳定表达肝细胞生长因子(HGF)的肝星状细胞株CFSC/HGF所构建的饲养层上,连续动态观察肝细胞的形态、超微结构、白蛋白分泌、尿素合成以及吲... 详细信息

目的探讨转基因肝星状细胞株CFSC/HGF对大鼠肝细胞生长的支持作用.方法将大鼠原代肝细胞培养于稳定表达肝细胞生长因子(HGF)的肝星状细胞株CFSC/HGF所构建的饲养层上,连续动态观察肝细胞的形态、超微结构、白蛋白分泌、尿素合成以及吲哚氰绿摄取排泌功能的变化,同时与传统胶原贴壁培养的肝细胞进行比较,并通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HGF受体c-Met表达的变化.结果共培养的肝细胞体外培养至7～10d时细胞增殖、白蛋白分泌及尿素合成达到峰值,以后逐渐下降,至35d时仍保持一定的存活和功能.与传统胶原上培养的肝细胞相比,其寿命、形态和功能的维持时间明显延长; RT-PCR结果显示,与CFSC/HGF饲养层细胞共培养1周后,肝细胞表面c-Met表达上调2.2 3倍.结论转基因肝星状细胞株CFSC/HGF对肝细胞较长时间内保持高活性、高密度的生长有显著的支持作用,CFSC/HGF诱导的肝细胞表面c-Met表达上调可能参与了该支持作用.

关键词：肝细胞 HGF 肝星状细胞 c-Met表达白蛋白胶原上调转基因饲养层共培养

聚合人脐带血红蛋白增敏乳腺癌小鼠化学免疫疗法治疗效果的初步研究

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中国输血杂志 2024年第3期37卷 290-296页

作者：郑诗凡周文涛李燊吴嘉康游训仪刘嘉馨王红中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052

目的探讨聚合人脐带血红蛋白氧载体(PolyCHb)增强小鼠4T1乳腺癌原位瘤化学免疫疗法敏感性的影响。方法构建4T1乳腺癌原位瘤模型,将15只小鼠随机均分为3组,空白组:无干预;对照组:多柔比星(DOX)+PD-1抑制剂(a-PD-1)治疗,腹腔注射DOX 5 mg... 详细信息

目的探讨聚合人脐带血红蛋白氧载体(PolyCHb)增强小鼠4T1乳腺癌原位瘤化学免疫疗法敏感性的影响。方法构建4T1乳腺癌原位瘤模型,将15只小鼠随机均分为3组,空白组:无干预;对照组:多柔比星(DOX)+PD-1抑制剂(a-PD-1)治疗,腹腔注射DOX 5 mg·kg^(-1)、1次/周,腹腔注射PD-1抑制剂12.5 mg·kg^(-1)、1次/周;实验组:DOX+a-PD-1+PolyCHb治疗,DOX和a-PD-1用法同上,PolyCHb:尾静脉注射600 mg·kg^(-1)、3次/周;给药周期为4周。给药期间记录肿瘤体积3次/周,绘制各组肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。29 d处死小鼠,剥瘤后称瘤重;免疫荧光法检测肿瘤组织中HIF-1α的含量;HE染色观察肿瘤组织病理变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况;免疫组化法检测肿瘤增殖指标Ki67表达情况。结果与空白组和对照组相比,实验组组肿瘤体积显著减小(P细胞凋亡阳性率(%)分别为18.79±0.62、20.68±1.19、41.65±2.99(F=135.2,P学差异(P学免疫疗法的敏感性,其作用机制可能与降低HIF-1α表达,促进细胞凋亡和坏死,抑制肿瘤细胞增殖有关。

关键词：聚合人脐带血红蛋白乳腺癌原位瘤模型化学免疫疗法动物实验