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GST-Ccd1融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

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中国应用生理学杂志 2008年第1期24卷 122-124页

作者：吴燕景孝堂马鑫范文红范明军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的:利用大肠杆菌DH5α表达GST—Ccd1融合蛋白,并用亲和层析分离纯化,进行动物免疫制备多克隆抗体。方法:利用本室构建好的pGEX-5X-1-Ccd1-N原核表达重组质粒,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达。... 详细信息

目的:利用大肠杆菌DH5α表达GST—Ccd1融合蛋白,并用亲和层析分离纯化,进行动物免疫制备多克隆抗体。方法:利用本室构建好的pGEX-5X-1-Ccd1-N原核表达重组质粒,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达。经谷胱甘肽Sepharose 4B介质填充的层析柱分离纯化蛋白,制备抗原免疫动物,得到Ccd1的兔源多克隆抗体。结果:ELISA结果显示血清抗体效价可以达到1∶40 000。免疫组化分析表明自制的抗体能特异性与Ccd1蛋白相互作用,可以用于实验分析。结论:制备了效价高特异性良好的抗Ccd1多克隆抗体,经实验验证获得的抗体能够满足针对Ccd1的免疫印迹和免疫组化检测的实验要求,为今后深入研究Ccd1表达的组织分布、细胞内定位及其生物学功能提供了有用的实验工具。

关键词： Ccd1基因融合表达多克隆抗体 ELISA

白细胞介素6在人骨髓瘤细胞系XG-7中的信号转导途径与生物学效应

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中华医学杂志 2000年第11期80卷 845-848页

作者：宋伦沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的　研究白细胞介素 6 (IL 6 )依赖型人骨髓瘤细胞系XG 7中IL 6信号转导途径活化与生物学效应之间的关系。方法　分别采用凝胶阻滞电泳和免疫沉淀方法检测参与IL 6信号传递功能的转录因子 (STAT3、NF IL 6 )和蛋白激酶 (JAK1、ERK)在X... 详细信息

目的　研究白细胞介素 6 (IL 6 )依赖型人骨髓瘤细胞系XG 7中IL 6信号转导途径活化与生物学效应之间的关系。方法　分别采用凝胶阻滞电泳和免疫沉淀方法检测参与IL 6信号传递功能的转录因子 (STAT3、NF IL 6 )和蛋白激酶 (JAK1、ERK)在XG 7细胞中的诱导激活状态并确定该细胞中的IL 6信号转导途径 ;进而采用细胞转染技术特异性上调或下调IL 6信号途径的诱导激活状态 ,并观察IL 6在XG 7细胞上生物学效应的改变。结果　IL 6可引发XG 7细胞中Ras/NF IL 6信号转导途径活化 ,但没有出现Jak/STAT途径的诱导激活。Ras途径活化信号的上调与IL 6对XG 7细胞增殖促进作用的增强同步出现 ;而当Ras途径活化被抑制时 ,IL 6对XG 7细胞的生长促进作用明显减弱。结论　Ras/NF IL 6信号转导途径介导了IL 6对XG 7细胞的生长维持和增殖促进作用。

关键词：白细胞介素6 多发性骨髓瘤相对生物学效应

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肌卫星细胞研究进展

生理科学进展 2003年第2期34卷 136-139页

作者：陈晓萍范明军事医学科学院基础医学研究所北京100850

骨骼肌中的卫星细胞 ,长期以来就被认为是出生后骨骼肌生长、修复和维持的单能成肌干细胞。近年研究发现 ,卫星细胞与内皮细胞共同起源于胚胎血管祖细胞 ,且成年骨骼肌中存在多能干细胞 ,这些肌源多能干细胞在适当的微环境中具有多向分... 详细信息

骨骼肌中的卫星细胞 ,长期以来就被认为是出生后骨骼肌生长、修复和维持的单能成肌干细胞。近年研究发现 ,卫星细胞与内皮细胞共同起源于胚胎血管祖细胞 ,且成年骨骼肌中存在多能干细胞 ,这些肌源多能干细胞在适当的微环境中具有多向分化潜能。这将为治疗包括帕金森病在内的多种临床退行性疾病提供自体干细胞的新来源。本文对肌卫星细胞的起源、增殖和成肌分化的分子调节机制。

关键词：肌卫星细胞起源 MyoD家族生长因子多能干细胞

GPI-CTLA4Ig嵌合分子的构建和在CHO-dhfr^-细胞膜上的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 212-214页

作者：于继云沈倍奋黎燕陈兴程绍辉田蓉曲梅花军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI dhfr中 ,并用脂质... 详细信息

目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI dhfr中 ,并用脂质体法转染CHO dhfr 细胞 ,用氨甲喋呤 (MTX)进行筛选。重组蛋白的表达用RT PCR、ELISA、细胞免疫荧光和Westernblot进行鉴定。最后采用ProteinA亲和层析纯化。结果 :构建了GPI CTLA4Ig嵌合分子 ,并在CHO dhfr 细胞膜上稳定表达。结论 :GPI修饰的CTLA4Ig分子有可能作为新型的免疫抑制剂用于器官移植中。

关键词： CTLA4Ig 蛋白质表达糖基化磷脂酰肌醇 CHO-dhfr^-细胞

抗人CD3嵌合抗体基因的构建、表达及表达产物的初步功能研究

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第1期21卷 43-45,49页

作者：吕明赖春宁于鸣郭宁黎燕沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的: 构建并表达抗人CD3嵌合抗体, 以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性。方法: 采用基因工程技术, 将抗体VL、VH 基因分别克隆入嵌合抗体表达载体VLExpress及VHExpress中。共转染COS- 7细胞后, 用ELISA检测培养上清中嵌合抗体... 详细信息

目的: 构建并表达抗人CD3嵌合抗体, 以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性。方法: 采用基因工程技术, 将抗体VL、VH 基因分别克隆入嵌合抗体表达载体VLExpress及VHExpress中。共转染COS- 7细胞后, 用ELISA检测培养上清中嵌合抗体的表达水平; 采用ProteinA亲和层析法纯化抗体, 并进行Westernblot鉴定。用FACS检测嵌合抗体结合抗原的活性; 混合淋巴细胞培养检测抗体的功能。结果: 成功地构建了VH Express VH 及VLExpress VL表达载体并表达纯化。Westernblot的结果显示, 表达的抗人CD3抗体为人鼠嵌合抗体。FACS的结果显示, 该抗体具有良好的结合抗原活性; 混合淋巴细胞培养结果显示, 该抗体具有一定的免疫抑制功能。结论: 成功地构建、表达了抗人CD3嵌合抗体, 为进一步的研究打下了基础。

关键词： CD3 嵌合抗体混合淋巴细胞培养免疫抑制

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乙型肝炎病毒进入肝细胞机制研究进展

生物化学与生物物理进展 2009年第5期36卷 530-535页

作者：王学军王升启军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染早期进入肝细胞机制研究一直是HBV研究领域的热点和难点.简单易得的HBV体外感染细胞模型是HBV感染进入机制研究无法逾越的主要障碍.近年来,随着新型HBV体外感染细胞模型的建立和应用(HepRG细胞... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染早期进入肝细胞机制研究一直是HBV研究领域的热点和难点.简单易得的HBV体外感染细胞模型是HBV感染进入机制研究无法逾越的主要障碍.近年来,随着新型HBV体外感染细胞模型的建立和应用(HepRG细胞和树鼩原代肝细胞),HBV的进入机制研究取得了一系列重大发现.综述了近几年HBV进入肝细胞机制的最新研究进展,主要包括HBV表面蛋白进入相关结构域的鉴定,已发现的候选HBV进入相关分子和尚待解决的问题.

关键词：乙型肝炎病毒进入表面蛋白结构域受体

STAT3反义表达载体的构建、稳定表达及对M1白血病细胞表型的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第2期21卷 126-129页

作者：张纪岩舒翠玲王建安冯建男裴武红宋伦黎燕沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的　探讨JAK STATs通路在IL 6信号转导中的功能。方法　将含起始密码子在内的约 1.2kbSTAT3cDNA反向插入到真核细胞表达载体pcDNA3中 ,采用电穿孔法将重组质粒导入到M1小鼠急性髓系白血病细胞中 ,进行G418筛选。结果　G418筛选出抗性... 详细信息

目的　探讨JAK STATs通路在IL 6信号转导中的功能。方法　将含起始密码子在内的约 1.2kbSTAT3cDNA反向插入到真核细胞表达载体pcDNA3中 ,采用电穿孔法将重组质粒导入到M1小鼠急性髓系白血病细胞中 ,进行G418筛选。结果　G418筛选出抗性克隆后 ,基因组DNAPCR扩增表明STAT3反义基因片段已导入M1细胞中并在基因组中整合。STAT3反义RNA不影响M1细胞的生长动力学特征 ,但可显著拮抗IL 6诱导的STAT3激活 ,并拮抗IL 6对M1细胞的生长抑制效应。结论　STAT 3反义RNA能够在M1细胞中稳定表达 ,成为进一步研究JAK STATs途径功能的新模型。

关键词： STAT3 白细胞介素6 反义RNA 白血病细胞表型

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治疗性抗体的基础研究

中国药理学与毒理学杂志 2001年第4期15卷 241-244页

作者：沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所北京100850

抗体的靶向性提供了一个改进治疗制剂选择性的方法 .由于大部分抗原均可诱生抗体 ,因此抗体应用的潜力是巨大的 .临床上正用于治疗肿瘤 ,病毒感染 ,自身免疫病 ,中毒性休克 ,再狭窄 ,Rh溶血症和抗移植排斥等 .但单克隆抗体的临床应用受... 详细信息

抗体的靶向性提供了一个改进治疗制剂选择性的方法 .由于大部分抗原均可诱生抗体 ,因此抗体应用的潜力是巨大的 .临床上正用于治疗肿瘤 ,病毒感染 ,自身免疫病 ,中毒性休克 ,再狭窄 ,Rh溶血症和抗移植排斥等 .但单克隆抗体的临床应用受一定限制 ,主要障碍是诱导产生人抗鼠抗体(HAMA反应 ) ,肿瘤参入量低 ,亲和力低和半衰期短等 .然而 ,利用分子生物学技术能克服这些障碍。

关键词：单克隆抗体免疫结合物治疗性抗体抗体靶向性制备

盐酸布比卡因、透明质酸酶对大鼠在体肌卫星细胞增殖的影响

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中国应用生理学杂志 2003年第4期19卷 378-382页

作者：吴海涛陈晓萍刘淑红赵永岐王常勇范明军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :研究盐酸布比卡因和透明质酸酶对成年大鼠肌卫星细胞在体增殖的影响。方法 :免疫组化法 ,H .E染色法 ,光镜和电镜观察。结果 :①正常对照组和生理盐水组肌纤维完整 ,有少量Desmin阳性肌卫星细胞 ,面密度值为 0 .66%± 0 .57%和 2 ... 详细信息

目的 :研究盐酸布比卡因和透明质酸酶对成年大鼠肌卫星细胞在体增殖的影响。方法 :免疫组化法 ,H .E染色法 ,光镜和电镜观察。结果 :①正常对照组和生理盐水组肌纤维完整 ,有少量Desmin阳性肌卫星细胞 ,面密度值为 0 .66%± 0 .57%和 2 .48%± 1.13 %。生理盐水组较正常对照组无显著差异 (P >0 .0 5)。②透明质酸酶组肌纤维完整 ,Desmin阳性肌卫星细胞数量增加 ,面密度值为 2 .52 %± 1.41% ,较生理盐水组和正常对照组无显著差异(P >0 .0 5)。③盐酸布比卡因组和盐酸布比卡因 +透明质酸酶混合液组均可见大量坏死和溶解的肌纤维 ,并伴有肌卫星细胞的激活、增殖 ,Desmin阳性肌卫星细胞显著增加 ,并有部分融合形成小肌管。面密度值分别为 19.0 1%± 4.74%和 2 2 .41%± 7.64% ,较生理盐水组显著增加 (P <0 .0 1)。结论 :局麻药盐酸布比卡因能引起在体肌卫星细胞的活化、增殖并形成肌管。

关键词：肌卫星细胞盐酸布比卡因透明质酸酶免疫组化干细胞