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基于肠-关节轴探讨中药治疗类风湿关节炎的研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第6期30卷 262-268页

作者：张红林蒋海旭韦秋竹孙钰禾赵子涵陆清怡北京中医药大学生命科学学院北京100029 北京中医药大学中药学院北京100029

类风湿关节炎(RA)是以局部关节疼痛为主要临床表现的系统性自身免疫性疾病,是中医临床治疗的优势病种之一。RA的起病不仅与基因等先天因素相关,而且与饮食、微生物感染等环境因素相关。肠道是人体重要的消化器官和免疫器官,定植其中的... 详细信息

类风湿关节炎(RA)是以局部关节疼痛为主要临床表现的系统性自身免疫性疾病,是中医临床治疗的优势病种之一。RA的起病不仅与基因等先天因素相关,而且与饮食、微生物感染等环境因素相关。肠道是人体重要的消化器官和免疫器官,定植其中的微生物促进了肠道的物质代谢、屏障保护和免疫调节功能。随着对RA发病和治疗研究的深入,肠道的结构和功能异常与RA发病、进展具有的潜在联系不断被揭示。临床和实验研究表明,RA关节炎症与受损的肠道屏障功能、失调的免疫细胞及紊乱的肠道菌群几乎同时可见。“肠-关节轴”理论与中医的整体观念高度一致。在近期对中药治疗RA的药理研究中,人们发现治疗RA的有效中药复方及成分同时发挥了抑制炎症、保护关节和维持肠道功能的作用。因此,该文总结了“肠-关节轴”的基本内涵和中药通过调节肠道菌群结构、改善微生物代谢来发挥肠道的屏障保护和免疫调节作用,从而缓解RA的机制。该综述为RA中“肠-关节轴”的深入研究提供了借鉴。

关键词：类风湿关节炎中药肠-关节轴肠道菌群

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北豆根总生物碱的抗病毒感染功能与机制

中国实验方剂学杂志 2024年第10期30卷 37-44页

作者：王雪娇李琪琪禹艳丽刘霞李敏刘哲贾鑫王遥北京中医药大学生命科学学院北京100027 北京中医药大学中药学院北京100027

目的:探讨北豆根总生物碱的抗病毒感染作用及其与Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)信号通路的关系。方法:通过倒置荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)等方法检测北豆根总生物碱对甲... 详细信息

目的:探讨北豆根总生物碱的抗病毒感染作用及其与Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)信号通路的关系。方法:通过倒置荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)等方法检测北豆根总生物碱对甲型流感病毒(H1N1)、水疱性口炎病毒(VSV)和脑心肌炎病毒(EMCV)在细胞内复制的影响。构建H1N1病毒感染小鼠模型,将小鼠分为空白组、H1N1模型组、北豆根总生物碱组(10、20、30 mg·kg^(-1))和奥司他韦组(40 mg·kg^(-1)),研究北豆根总生物碱对感染小鼠的体质量和生存率的影响。Real-time PCR检测北豆根总生物碱对细胞中IFN-Ⅰ通路的激活作用,并在干扰素受体1(IFNAR1)敲除的A549细胞(IFNAR1^(-/-)-A549)检测北豆根总生物碱抗病毒感染作用与IFN-Ⅰ通路的关系。结果:与空白组比较,病毒感染模型组中的病毒大量增殖(P<0.01);与模型组比较,北豆根总生物碱在体外显著抑制H1N1、VSV和EMCV的复制(P<0.01),在体内抑制H1N1病毒感染小鼠体质量降低,提升小鼠生存率(P<0.05)。此外,北豆根总生物碱激活IFN-Ⅰ通路并依赖该通路发挥抗病毒感染作用。结论:北豆根总生物碱通过激活IFN-Ⅰ通路发挥体内和体外的抗病毒感染作用。

关键词：北豆根总生物碱甲型流感病毒(H1N1) 水疱性口炎病毒(VSV) 脑心肌炎病毒(EMCV) 抗病毒免疫 Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)

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中医药调节免疫平衡治疗咳嗽变异性哮喘研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第5期30卷 206-212页

作者：杨涵闫永煌张文婷朱佩轩颜芳吴宇杰乔诗清王铁山苏泽琦王停北京中医药大学生命科学学院北京100029 北京中医药大学中医学院北京100029 北京中医药大学东方医院北京100078 北京中医药大学北京中医药研究院北京100029 国家中医药管理局名医名方重点研究室北京100029

咳嗽变异性哮喘(CVA)是以咳嗽为主要症状的慢性呼吸系统疾病。CVA的发生与非特异性气道炎症密切相关,发病机制涉及环境、遗传、免疫等因素。近年来,中医药在CVA治疗中的优势得到国内外专家学者的关注,尤其在调节免疫平衡缓解CVA患者咳... 详细信息

咳嗽变异性哮喘(CVA)是以咳嗽为主要症状的慢性呼吸系统疾病。CVA的发生与非特异性气道炎症密切相关,发病机制涉及环境、遗传、免疫等因素。近年来,中医药在CVA治疗中的优势得到国内外专家学者的关注,尤其在调节免疫平衡缓解CVA患者咳嗽症状、减少复发次数等方面具有突出作用。辅助性T细胞(Th)1、Th2、Th17、调节性T细胞(Treg)由CD4+T细胞分化而来,Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡是CVA发病机制研究中的新热点,也是中医药治疗CVA的潜在关键靶标。Th细胞亚群生理情况下处于动态平衡,维持促炎细胞因子与抑炎细胞因子平衡的呼吸道免疫稳态。CVA发病阶段,未成熟的辅助T细胞(Th0)受微环境中细胞因子类型影响分化为Th1、Th2、Th17、Treg等细胞亚群,Th2细胞增殖引发嗜酸性粒细胞性气道炎症,Th17细胞过度分化诱发中性粒细胞性气道炎症的产生。Th1/Th2、Th17/Treg细胞在数量及功能上相互制约,Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡易加剧炎症反应的产生,恢复免疫平衡对CVA的气道抗炎治疗尤为重要。该文对Th1/Th2、Th17/Treg失衡与CVA发病机制进行系统阐述,同时对中药复方、单味中药及其有效成分调控免疫失衡治疗CVA的最新研究进行梳理,为揭示中医药调节免疫平衡治疗CVA的科学内涵及CVA临床治疗和基础研究的开展提供思路和借鉴。

关键词：中医药咳嗽变异性哮喘免疫平衡辅助性T细胞(Th)1/Th2 Th17/调节性T细胞(Treg) 研究进展

基于肠道菌群探讨补肾益精法治疗少弱精子症的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第5期30卷 170-175页

作者：黄念文李海松毕焕洲王彬冯隽龙孙龙吉王继升王成李北京中医药大学东直门医院北京100700 北京中医药大学深圳医院广州深圳518172 北京中医药大学东方医院北京100078

少弱精子症是引起男性不育的主要原因,其病因复杂多样,目前临床上仍有部分少弱精子症的病因未明,称为特发性少弱精子症。随着高通量测序技术的发展,发现肠道菌群紊乱可能是少弱精子症发病的一个重要促进因素。中医学认为“肾精亏虚”为... 详细信息

少弱精子症是引起男性不育的主要原因,其病因复杂多样,目前临床上仍有部分少弱精子症的病因未明,称为特发性少弱精子症。随着高通量测序技术的发展,发现肠道菌群紊乱可能是少弱精子症发病的一个重要促进因素。中医学认为“肾精亏虚”为少弱精子症的核心病机,临床上采用补肾益精法治疗少弱精子症疗效显著,但其作用机制尚未完全阐明。结合中医基础理论及分子生物学研究发现,“肾精”与肠道菌群具有相似性,在少弱精子症发病过程中,肠道菌群紊乱与中医“肾精亏虚”病机有共通之处,且补肾益精类中药可调节肠道菌群紊乱,这或许是补肾益精法有效治疗少弱精子症的机制之一。基于此,该文从肠道菌群角度探讨中医补肾益精法治疗少弱精子症的作用机制,以期为中医药治疗少弱精子症提供新的思路。

关键词：少弱精子症肠道菌群肾精亏虚补肾益精中医中药

海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠p53/p21/Caspase-3通路表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 68-75页

作者：田颐董肖刘晓庆曹灿吴美晶徐向楠廖文勇陈绍红柳海艳于雪范盎然修琳琳钟赣生北京中医药大学北京100029

目的:探究海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对治疗甲状腺肿大的作用和p53/p21/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路的影响。方法:Wistar大鼠128只,随机分为空白组、模型组... 详细信息

目的:探究海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对治疗甲状腺肿大的作用和p53/p21/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路的影响。方法:Wistar大鼠128只,随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20μg·kg^(-1))、海藻玉壶汤组(12.06 g·kg^(-1))、去海藻组(9.90 g·kg^(-1))、去甘草组(10.26 g·kg^(-1))、去海藻甘草组(8.10 g·kg^(-1))、海藻甘草组(3.96 g·kg^(-1)),每组16只。除空白组其余各组给予PTU复制甲状腺肿大病理模型,将优甲乐用作阳性药,其余各组给予相应药液,末次给药后12 h进行取材。观察各组甲状腺形态;计算各组大鼠甲状腺系数;检测各组大鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察甲状腺病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测甲状腺组织p53、p21、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞周期蛋白D_(1)(Cyclin D_(1))、Caspase-3 mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测甲状腺组织凋亡相关信号通路p53、p21、Caspase-3蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组甲状腺系数显著增高(P<0.01),T3、T4、FT3、FT4水平均降低(P<0.01),TSH升高(P<0.01),甲状腺组织病理形态变化明显(P<0.05),p53、p21、Cyclin D_(1)、Caspase-3 mRNA表达均降低(P<0.05);与模型组比较,全方组甲状腺系数显著降低(P<0.01),T3、T4、FT3、FT4水平均上升(P<0.05),TSH下降(P<0.01),甲状腺组织病理形态明显恢复(P<0.05),p53、p21、Caspase-3 mRNA表达上升(P<0.05),p53、p21、Caspase-3蛋白表达量增加(P<0.05)。结论:在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下,含海藻和甘草反药组合于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠的甲状腺系数、甲状腺激素及甲状腺组织形态有显著的改善效果,其作用机制可能与升高p53、p21、Caspase-3相关表达从而促进细胞凋亡相关。

关键词：海藻玉壶汤十八反甲状腺肿模型大鼠凋亡 p53 p21 胱天蛋白酶-3(Caspase-3)

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海藻甘草反药组合在海藻玉壶汤中加减应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 37-45页

作者：董肖田颐刘晓庆曹灿廖文勇徐向楠吴美晶柳海艳陈绍红于雪范盎然修琳琳钟赣生北京中医药大学北京100029

目的:观察海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响。方法:将128只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20μg·kg^(-1))... 详细信息

目的:观察海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响。方法:将128只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20μg·kg^(-1))、海藻玉壶汤(HYT)组(12.06 g·kg^(-1))、HYT去海藻(HYT-H)组(9.90 g·kg^(-1))、HYT去甘草(HYT-G)组(10.26 g·kg^(-1))、HYT去海藻甘草(HYT-HG)组(8.10 g·kg^(-1))、海藻甘草(HG)组(3.96 g·kg^(-1)),空白组给予去离子水灌胃,其余各组灌胃丙硫氧嘧啶(PTU)复制甲状腺肿大病理模型,以优甲乐作为阳性药,其余各中药组给予相应药液灌胃,在末次给药后12 h进行取材。检测各组大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)水平;肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织氧化应激相关信号通路Nrf2、HO-1蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清ALT水平、肝脏组织中MDA和ROS含量明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD、GSH-Px活性显著降低(P<0.01),Keap1 mRNA表达显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,HYT组大鼠血清AST、ALT、ALP水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肝脏组织中MDA和ROS含量显著降低(P<0.01),SOD、GSH-Px活性显著升高(P<0.01),Keap1、p53、Caspase-3 mRNA表达显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下,海藻甘草反药组合于HYT中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激产生了不同的影响,含有海藻和甘草的HYT对甲状腺肿大模型大鼠肝脏起到了一定的保护作用,效果优于HG组、优甲乐组及各拆方组,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路以减轻肝脏氧化应激,抑制p53/Caspase-3信号通路以减少肝细胞凋亡有关。

关键词：海藻玉壶汤甲状腺肿大肝脏氧化应激核因子E2相关因子2(Nrf2) p53

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基于转录组和同位素标记相对与绝对定量技术的宽体金线蛭生品和烫制品差异蛋白研究

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中国新药杂志 2024年第3期33卷 292-300页

作者：华羽彤李尹郭秀欢雷艳辛泉诚袁瑞娟北京中医药大学北京102488

目的:通过转录组和蛋白质组技术研究宽体金线蛭生品和炮制品的差异蛋白。方法:以活体宽体金线蛭(Whitmania pigra Whitman)为原料,基于无参转录组进行基因分析,利用转录组信息匹配到Helobdella robusta蛋白质库,然后利用同位素标记相对... 详细信息

目的:通过转录组和蛋白质组技术研究宽体金线蛭生品和炮制品的差异蛋白。方法:以活体宽体金线蛭(Whitmania pigra Whitman)为原料,基于无参转录组进行基因分析,利用转录组信息匹配到Helobdella robusta蛋白质库,然后利用同位素标记相对与绝对定量技术(iTRAQ)蛋白组学技术进行宽体金线蛭的蛋白成分分析,筛选出存在于宽体金线蛭生品及炮制品中的差异蛋白质,并对其进行基因本体(GO)功能聚类分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析以及蛋白质相互作用网络分析(PPI),并结合BIOPEP数据库筛选可能具有抗凝活性的蛋白。结果:本研究筛选到差异表达蛋白共112种,其中78种上调蛋白、34种下调蛋白,并推定出6条可能具有抗凝作用的差异蛋白。GO功能聚类分析结果表明,在细胞过程(cellular process)、代谢过程(metabolic process)条目富集的差异蛋白数量最多。在差异性方面,大分子复合物(macromolecular complex)、结构分子活性(structural molecule activity)条目差异最显著。KEGG富集分析结果表明,差异蛋白在代谢途径(metabolic pathways)富集到的蛋白最多,ECM-受体相互作用(ECM-receptor interaction)、核糖体(ribosome)、氧化磷酸化(oxidative phosphorylation)差异最显著。结论:本研究结合转录组、蛋白组数据,补充了宽体金线蛭的蛋白质库,筛选出了生品及烫制品的差异蛋白并推定了可能具有抗凝作用的差异蛋白,为宽体金线蛭基因组成、物质基础研究及炮制机制提供参考依据。

关键词：宽体金线蛭炮制转录组同位素标记相对与绝对定量技术蛋白组差异蛋白

海藻-甘草含药血清对M22诱导的Nthy-ori-3-1细胞增殖的作用研究

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中草药 2024年第2期55卷 527-533页

作者：任彧娜刘晓庆曹灿李慕云廖文勇张淑静于雪范盎然修琳琳钟赣生北京中医药大学北京100029

目的探讨海藻-甘草含药血清对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1增殖的作用,为进一步研究海藻与甘草配伍抗甲状腺肿大的作用机制奠定基础。方法体外培养Nthy-ori-3-1细胞,使用不同浓度的促甲状腺激素受体人单克隆抗体M22作用于Nthy-ori-3-... 详细信息

目的探讨海藻-甘草含药血清对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1增殖的作用,为进一步研究海藻与甘草配伍抗甲状腺肿大的作用机制奠定基础。方法体外培养Nthy-ori-3-1细胞,使用不同浓度的促甲状腺激素受体人单克隆抗体M22作用于Nthy-ori-3-1细胞不同时间,观察M22作用的最佳浓度及时间。制备海藻-甘草含药血清,M22刺激细胞24 h后,分别给予5%、10%、15%、20%海藻-甘草含药血清干预24 h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡情况;透射电镜观察细胞形态;免疫荧光检测微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain3,LC3)表达情况;Western blotting检测Beclin1蛋白表达。结果 M22明显刺激Nthy-ori-3-1细胞增殖,0.125μg/mL的M22作用24 h时促增殖作用最佳(P<0.01)。经海藻-甘草含药血清干预后,细胞增殖明显抑制(P<0.05、0.01),细胞呈现明显的凋亡形态学变化,G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.01),G2/M期细胞比例无显著性差异,细胞凋亡率明显上升(P<0.01),LC3平均荧光强度增加,Beclin1蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论 M22可刺激Nthy-ori-3-1细胞增殖,海藻-甘草含药血清抑制M22诱导的Nthy-ori-3-1细胞增殖,促进其凋亡,可能通过调节自噬来发挥抑制Nthy-ori-3-1细胞增殖的作用,以达到抗甲状腺肿大的疗效。

关键词：海藻-甘草含药血清甲状腺肿大 Nthy-ori-3-1细胞细胞自噬细胞凋亡

异甘草素改善2型糖尿病异常糖脂代谢机制研究

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药学学报 2024年第1期59卷 105-118页

作者：陈姿伊杨晓雪丁文文汪逗逗何平刘颖北京中医药大学生命科学学院北京102488

异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)是甘草中的一种查尔酮类化合物,具有良好的抗炎和抗氧化等药理活性。课题组前期研究发现,ISL具有改善2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)糖脂代谢紊乱的潜力,因此本文拟解析其作用机制。体内实... 详细信息

异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)是甘草中的一种查尔酮类化合物,具有良好的抗炎和抗氧化等药理活性。课题组前期研究发现,ISL具有改善2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)糖脂代谢紊乱的潜力,因此本文拟解析其作用机制。体内实验采用高脂高糖饮食结合腹腔注射链脲佐菌素的方法处理C57BL/6J小鼠,构建T2DM小鼠模型,动物福利和实验过程均遵循北京中医药大学实验动物伦理委员会的规定;体外实验以人肝癌HepG2细胞作为实验细胞系,采用棕榈酸钠(sodium palmitate,SP)诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型。考察ISL对小鼠体重、空腹血糖、肝脏组织病理变化的作用效果,同时利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)及实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)等检测ISL对糖脂代谢关键靶点的调控作用,并利用分子对接和分子动力学模拟对ISL与关键靶点的相互作用进行检验。结果显示:ISL可显著降低T2DM小鼠空腹血糖水平,降低糖异生途径关键酶丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和果糖-1,6-二磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase,FBP)的转录水平和蛋白活性,下调转录因子肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)与cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)的转录和蛋白水平,从而抑制T2DM小鼠肝脏糖异生;ISL可降低肝脏总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglycerides,TG)含量,上调脂质摄取、脂肪酸氧化和脂质输出相关基因的转录水平,下调脂质合成相关基因的转录水平。综上,ISL可抑制T2DM小鼠肝脏糖异生,促进脂质分解,抑制脂质合成,改善T2DM引起的糖脂代谢紊乱。

关键词：异甘草素 2型糖尿病糖脂代谢紊乱糖异生脂代谢