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尖孢镰刀菌ATMT体系的构建及其对甘草的促生效果评价

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中国中药杂志 2024年第11期49卷 2882-2888页

作者：陈嘉欣朱泓宇任广喜左鑫姜丹刘春生北京中医药大学中药学院北京102488

该研究旨在通过耐盐能力、产吲哚乙酸(IAA)能力、溶磷能力、产铁载体能力等指标评价一株甘草内生尖孢镰刀菌的体内功能,通过根癌农杆菌介导的遗传转化技术建立该菌的稳定遗传转化体系,并通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄... 详细信息

该研究旨在通过耐盐能力、产吲哚乙酸(IAA)能力、溶磷能力、产铁载体能力等指标评价一株甘草内生尖孢镰刀菌的体内功能,通过根癌农杆菌介导的遗传转化技术建立该菌的稳定遗传转化体系,并通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色的效率检测转化子的稳定性与染色高效性,筛选出高效稳定的转化子用于回染甘草,评价其对甘草幼苗生长的影响。研究结果表明该菌耐盐性较好,在含7%氯化钠的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上仍能生长,但生长速度随着PDA培养基中氯化钠含量的增高而减缓;该菌具有产吲哚乙酸的功能,其发酵液中IAA的质量浓度约为3.32mg·m L^(-1)。该研究成功构建了该菌的遗传转化体系,且其根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)体系高效而稳定。筛选获得1株兼具染色高效性和遗传稳定性的转化子,该转化子在甘草植株中的回染率为76.92%,能够显著提高一月龄甘草幼苗的主根长,促进甘草幼苗根部的生长发育。该研究结果可以为生物菌肥的开发及优质甘草的生长调控奠定基础。

关键词：尖孢镰刀菌根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT) 体内功能转化子甘草促生

重楼总皂苷诱导乳腺癌MCF-7细胞铁死亡抗肿瘤机制研究

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中国中药杂志 2024年第9期49卷 2385-2392页

作者：张艺博张慧中阮意丹张永强张萍芝姚爱娜李诗曼徐晓涵倪健董晓旭北京中医药大学中药学院北京102488

探讨重楼总皂苷诱导乳腺癌MCF-7细胞的铁死亡作用及机制,为重楼总皂苷临床治疗乳腺癌提供理论依据。通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测不同浓度重楼总皂苷对MCF-7细胞增殖能力的影响;倒置显微镜观察MCF-7细胞形态改... 详细信息

探讨重楼总皂苷诱导乳腺癌MCF-7细胞的铁死亡作用及机制,为重楼总皂苷临床治疗乳腺癌提供理论依据。通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测不同浓度重楼总皂苷对MCF-7细胞增殖能力的影响;倒置显微镜观察MCF-7细胞形态改变;平板克隆实验检测MCF-7细胞克隆形成能力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验检测MCF-7细胞膜的完整性;划痕实验检测MCF-7细胞迁移能力;利用荧光倒置显微镜检测MCF-7细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平,利用试剂盒检测MCF-7细胞中Fe2+的含量;透射电镜观察MCF-7细胞线粒体超微结构;采用Western blot检测重楼总皂苷对MCF-7细胞中p53、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor protein 1,TFR1)表达的影响。结果显示,1.5、3、4.5、6、7.5、9μg·mL^(-1)重楼总皂苷均能显著抑制MCF-7细胞增殖,IC50为4.12μg·mL^(-1),对细胞形态有明显的损伤,导致细胞形成空泡,逐渐皱缩并脱落;抑制MCF-7细胞的克隆形成能力,破坏细胞膜促使细胞内LDH释放,缩短MCF-7细胞的迁移距离抑制迁移能力;显著提高MCF-7细胞中ROS的含量,诱导细胞氧化损伤,导致细胞内Fe^(2+)堆积,线粒体结构也发生明显的改变,线粒体膜密度增加,嵴减少甚至消失;促进p53蛋白表达,下调SLC7A11和GPX4表达并增强ACSL4和TFR1表达。因此,重楼总皂苷可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力、破坏细胞结构,其机制可能与诱导细胞铁死亡有关。

关键词：重楼总皂苷乳腺癌铁死亡机制

马兜铃酸Ⅰ-脱氧核苷结合物对照品制备方法研究

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中国中药杂志 2024年第10期49卷 2728-2733页

作者：杨晓芹屈碧琼刘洁胡信全肖红斌北京中医药大学中药分析与转化研究中心北京100029 北京中医药大学中药学院北京100029 北京中医药大学北京中医药研究院北京102488 浙江工业大学化学工程学院浙江杭州310014

建立了以马兜铃内酰胺Ⅰ为原料的溴化及交叉偶联二步有机合成工艺,粗产物经过4种溶剂除杂纯化,制得马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acidsⅠ,AAⅠ)的3种脱氧核苷结合物产物AAⅠ-dA、AAⅠ-dG、AAⅠ-dC,2步反应的收率均可达到90%,产物纯度均大于9... 详细信息

建立了以马兜铃内酰胺Ⅰ为原料的溴化及交叉偶联二步有机合成工艺,粗产物经过4种溶剂除杂纯化,制得马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acidsⅠ,AAⅠ)的3种脱氧核苷结合物产物AAⅠ-dA、AAⅠ-dG、AAⅠ-dC,2步反应的收率均可达到90%,产物纯度均大于98%,满足中药化学对照品定性定量要求。该工艺重复性好,适合放大制备,具有制备步骤短及纯化操作高效、勿需色谱分离、产品收率及纯度高等特点。相比其他方法,该方法优势显著,更适于马兜铃酸Ⅰ-脱氧核苷结合物化学对照品制备。新开发的工艺为马兜铃酸Ⅰ-脱氧核苷结合物对照品的制备提供了技术支撑,为相关毒理学研究提供了坚实的物质基础。

关键词：马兜铃酸Ⅰ-脱氧核苷结合物合成制备溴代反应偶联反应

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针灸治疗腰椎间盘突出症作用机制研究进展

针刺研究 2024年第5期49卷 526-533页

作者：邸学士陈江王新茹梁俊杰张重阳潘婷孟言张佳佳冯智伟孙文婷白鹏北京中医药大学第三附属医院北京100029 北京中医药大学东直门医院北京100700

腰椎间盘突出症(LDH)是临床常见病和多发病,是引起腰腿痛的常见原因,研究表明针灸能够改善LDH患者症状,临床疗效确切。本文通过检索近10年来针灸治疗LDH作用机制研究的相关文献,结果显示针刺治疗LDH与延缓椎间盘退变、维持脊柱稳定、调... 详细信息

腰椎间盘突出症(LDH)是临床常见病和多发病,是引起腰腿痛的常见原因,研究表明针灸能够改善LDH患者症状,临床疗效确切。本文通过检索近10年来针灸治疗LDH作用机制研究的相关文献,结果显示针刺治疗LDH与延缓椎间盘退变、维持脊柱稳定、调节炎性反应、调节免疫反应、调节神经结构和功能、镇痛及改善局部微循环等多种作用机制密切相关。本文对以上机制归纳总结,以期为临床应用针灸治疗LDH提供科学依据。

关键词：针灸腰椎间盘突出症椎间盘退变作用机制综述

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川芎调节血脑屏障通透性的作用及机制研究

中草药 2024年第1期55卷 138-147页

作者：刘明妍刘力榕冯梦晗朱美霞张银环闫晓宁方聪屈碧琼贾志鑫刘洁肖红斌北京中医药大学中药学院北京102400 北京中医药大学中药分析与转化研究中心北京102400 北京中医药大学北京中医药研究院北京102400

目的探讨川芎Chuanxiong Rhizoma调节血脑屏障通透性的作用特点,并从紧密连接蛋白、外排蛋白表达、埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ezrin/radixin/mesin,ERM)磷酸化水平变化的角度阐述影响血脑屏障通透性的机制。方法小鼠单次给予川芎提取物(... 详细信息

目的探讨川芎Chuanxiong Rhizoma调节血脑屏障通透性的作用特点,并从紧密连接蛋白、外排蛋白表达、埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ezrin/radixin/mesin,ERM)磷酸化水平变化的角度阐述影响血脑屏障通透性的机制。方法小鼠单次给予川芎提取物(5.8 g/kg)后iv不同相对分子质量(4×10^(3)、4×10^(4)、7×10^(4)、1.5×10^(5))的异硫氰酸荧光素-葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-dextran),测定给药后0、0.5、1、2、4、6、8 h脑组织中FITC-dextran的荧光强度,定量描述川芎对体内血脑屏障通透性的影响。建立b End.3细胞单培养血脑屏障模型,给予川芎单体成分洋川芎内酯A、洋川芎内酯H、阿魏酸、洋川芎内酯I、藁本内酯、欧当归内酯A、4-羟基-3-丁基苯酞,比较相同作用时间内血脑屏障模型中荧光素钠(fluorescein sodium,Na-F)的表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp),确定各成分开放血脑屏障的效应。采用Western blotting检测川芎提取物给药前后小鼠脑组织及洋川芎内酯I给药b End.3细胞中闭锁小带蛋白1(zonula occluden-1,ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、血管内皮细胞钙黏合素(VE-cadherin)、p-ERM/ERM的表达水平。结果川芎提取物给药0.5 h后可显著增加小鼠脑组织中FITC-dextran(相对分子质量4×103)的透过量(P<0.001),作用强度随给药时间延长减弱,但对相对分子质量4×10^(4)、7×10^(4)、1.5×10^(5)的FITC-dextran透过量无影响。在脑组织中,川芎提取物给药0.5 h时下调ZO-1、Occludin蛋白表达(P<0.05),上调P-gp蛋白表达;给药2 h时上调ZO-1、Occludin蛋白表达(P<0.05、0.01),下调P-gp蛋白表达(P<0.01);给药8 h时,ZO-1、Occludin、P-gp的蛋白表达水平与对照组无明显差异。不同浓度(1、10、100μmol/L)的洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、洋川芎内酯H、阿魏酸8 h给药时间内显著增加Na-F透过血脑屏障模型的Papp,其中洋川芎内酯I的促透效应最强。洋川芎内酯I(10μmol/L)给药bEnd.3细胞0.5 h时可下调Occludin、ZO-1、p-ERM/ERM的蛋白表达(P<0.01),给药1 h时上调Occludin、ZO-1、p-ERM/ERM的蛋白表达(P<0.01),给药8 h时Occludin、ZO-1、p-ERM/ERM的蛋白表达水平与对照组无明显差异。结论川芎在一定程度上可增加血脑屏障通透性,且该作用具有时效性,其机制与调节Occludin、ZO-1、P-gp的蛋白表达及ERM磷酸化水平有关。

关键词：川芎血脑屏障通透性闭锁蛋白闭锁小带蛋白1 P-糖蛋白埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白洋川芎内酯A 洋川芎内酯H 阿魏酸洋川芎内酯Ⅰ 藁本内酯欧当归内酯A 4-羟基-3-丁基苯酞

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小鼠骨髓和腹膜腔来源巨噬细胞的功能差异

细胞与分子免疫学杂志 2024年第3期40卷 215-221页

作者：黄镘静罗扬淦卢姿含王伟玲郝逗逗廖晗婧朱枝祥北京中医药大学中药学院北京100029 北京中医药大学北京中医药研究院中药现代研究中心北京100029

目的研究骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞的功能差异,为免疫学研究和免疫调节药物评价中巨噬细胞的选择提供依据。方法利用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓单核细胞分化为巨噬细胞,利用巯基乙酸盐培养基诱导腹膜炎获得腹膜腔巨... 详细信息

目的研究骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞的功能差异,为免疫学研究和免疫调节药物评价中巨噬细胞的选择提供依据。方法利用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓单核细胞分化为巨噬细胞,利用巯基乙酸盐培养基诱导腹膜炎获得腹膜腔巨噬细胞,两种巨噬细胞在分别经过酵母多糖(zymosan)、脂多糖(LPS)、雷西莫特(R848)和非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡聚体(CpG)四种Toll样受体(TLR)配体诱导后,实时荧光定量PCR测定巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA水平,ELISA检测巨噬细胞培养上清液TNF-α、IL-6、MIP-1α、MCP-1含量,流式细胞术分析细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达。结果两种巨噬细胞在经过不同TLR配体诱导后,炎症因子和趋化因子的mRNA表达水平均有不同程度的增加,腹膜腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、MIP-1α、MCP-1分泌水平以及表面CD86和MHCⅡ表达显著高于骨髓来源巨噬细胞。结论骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞均表达炎症因子、趋化因子、共刺激分子和MHCⅡ,腹膜腔巨噬细胞具有更加完整的巨噬细胞功能,在免疫学研究和免疫调节药物评价中可以优选腹膜腔巨噬细胞。

关键词：单核细胞巨噬细胞功能差异 Toll样受体(TLR)配体

知母特异性DNA条形码筛选、种质资源鉴定与遗传多样性分析

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中国中药杂志 2024年第1期49卷 88-99页

作者：窦西铭张靖晗王馨刘珊瑚石玥黄钰莹张晓芹何高洁安克露戚源王晓晖魏胜利张媛北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学北京中医药研究院北京102488 北京中医药大学生命科学院北京102488 河北序彤种业集团有限公司河北石家庄050501

知母Anemarrhena asphodeloides是临床方剂和中成药中常用药材。该研究利用Illumina平台测序获得7份不同产地的知母叶绿体基因组序列,通过比较基因组学分析筛选特异性DNA条形码,并利用DNA条形码对全国不同产地知母样品进行种质资源鉴定... 详细信息

知母Anemarrhena asphodeloides是临床方剂和中成药中常用药材。该研究利用Illumina平台测序获得7份不同产地的知母叶绿体基因组序列,通过比较基因组学分析筛选特异性DNA条形码,并利用DNA条形码对全国不同产地知母样品进行种质资源鉴定与遗传多样性分析。7份知母叶绿体基因组均具有环状结构,全长为156801~156930 bp,均注释113个基因,其中蛋白编码基因79个、tRNA基因30个、rRNA基因4个;比较基因组学分析显示rps16、trnG-GCC、atpF、rpoB、ycf3、rpl16、ndhF、trnS-GCU_trnG-GCC、petN-psbM、ndhF-rpl32可作为潜在的知母特异性DNA条形码。该研究选取序列长度在700~800 bp,且易于扩增的ycf3(第2内含子区)和atpF(内含子区)序列对26个产地594份知母样品进行PCR扩增和测序,序列分析结果显示ycf3和atpF序列分别能鉴定6、8个单倍型,2个序列联合分析能鉴别17个单倍型,命名为Hap1~Hap17。26个知母居群单倍型多样性(Hd)为0.68;核苷酸多样性(Pi)为0.93×10^(-3);遗传距离为0~0.0031,表明知母种内遗传多样性较丰富。中介邻接网络分析显示Hap5为最古老单倍型,主要分布在河北保定易县、山西忻州河曲县和山西临汾襄汾县。该研究对知母品种的鉴定、种质资源保护和开发及产地鉴别具有重要指导意义,为进一步揭示知母的遗传进化规律提供了研究基础。

关键词：知母叶绿体基因组种质资源单倍型遗传多样性

UPLC-QE-Orbitrap-MS结合网络药理学探索大黄炒炭前后治疗溃疡性结肠炎的差异成分及其作用机制

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1834-1847页

作者：孙晶徐文娟钟琳瑛陈建波董玲北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学生命科学学院北京102488

基于生大黄与大黄炭治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的药效差异,结合超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UPLC-QE-Orbitrap-MS)技术及网络药理学探索生大黄与大黄炭的差异成分及其作用机制。使用葡聚糖硫酸钠(d... 详细信息

基于生大黄与大黄炭治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的药效差异,结合超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UPLC-QE-Orbitrap-MS)技术及网络药理学探索生大黄与大黄炭的差异成分及其作用机制。使用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠模型评价生大黄与大黄炭分别组方的芍药汤(Shaoyao Decoction,SYD)治疗UC的药效,结果表明生大黄与大黄炭分别组方的芍药汤均能在不同程度上改善小鼠UC疾病症状,大黄炭组方在减轻血性腹泻、降低炎症水平方面更具优势。采用UPLC-QE-Orbitrap-MS共鉴定出生大黄与大黄炭水煎液中78种小分子化合物,通过多元统计方法筛选得到炒炭后含量明显升高的7种成分包括5种游离蒽醌、没食子酸、5-羟甲基糠醛,炒炭后含量明显降低的9种成分为结合蒽醌、儿茶素类化合物等。网络药理学与分子对接结果表明游离蒽醌、没食子酸及5-羟甲基糠醛可能作用于B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL2)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、胱天蛋白酶3(caspase-3,CASP3)等核心靶点,干预磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)、缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)、TNF、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)等信号通路,调控机体炎症、氧化应激及细胞凋亡过程,发挥UC治疗作用。该研究对大黄炒炭后药效及物质基础变化进行了分析,为临床治疗UC的大黄用药选择提供了参考。

关键词：大黄炒炭芍药汤溃疡性结肠炎 UPLC-QE-Orbitrap-MS 网络药理学

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苏合香品种变迁考

中国中药杂志 2024年第6期49卷 1690-1698页

作者：丁一明吴孟华 ERIC Brand 孙鑫刘越郭晓晗魏胜利马双成赵中振北京中医药大学中药学院北京100029 北京中医药大学本草纲目研究所北京100029 中国食品药品检定研究院北京102629 暨南大学岭南传统中药研究中心广东广州510632 北京中医药大学中医学院北京100029 香港浸会大学中医药学院中国香港00852

苏合香为我国常用进口中药材,在汉代即传入我国,苏合香作为中药始载于《名医别录》。该文通过梳理古今中外本草、现代文献资料,并结合对苏合香产地的实地考察结果,对苏合香的名称、质量评价、基原、产地及采收加工进行了系统的品种变迁... 详细信息

苏合香为我国常用进口中药材,在汉代即传入我国,苏合香作为中药始载于《名医别录》。该文通过梳理古今中外本草、现代文献资料,并结合对苏合香产地的实地考察结果,对苏合香的名称、质量评价、基原、产地及采收加工进行了系统的品种变迁考证。结果表明,自古以来苏合香便存在基原不明、产地不清的情况。我国历代医药学家多从质地、黏稠度、气味浓度、颜色4个方面对苏合香进行质量评价。苏合香品种共发生过2次变迁,第一次变迁可能在隋唐时期,基原由南欧安息香Sty⁃rax officinalis变迁为苏合香树Liquidambar orientalis。第二次变迁在近现代,基原由苏合香树变迁为北美枫香树L.styraciflua。在基原第二次变迁的同时,产地发生了第一次变迁,由小亚细亚南部地区的土耳其、叙利亚等国变迁为中美洲地区及北美洲南部地区的洪都拉斯、危地马拉等国。该文对苏合香质量评价、基原、产地、性状与采收加工等多方面的历史沿革进行了考证,同时对苏合香在西方国家的应用进行了综述,可为苏合香的进一步开发利用提供历史依据。

关键词：苏合香品种基原进口药材质量评价