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补肾壮筋汤调控OPG/RANKL/RANK信号通路抗骨质疏松的作用

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中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 44-51页

作者：周世博俞兴仲文庆李文浩赵赫熊洋北京中医药大学北京100029 北京中医药大学东直门医院北京100700

目的:观察补肾壮筋汤(BSZJ)对去卵巢大鼠骨代谢、骨密度(BMD)、骨小梁微结构及对骨保护素/核转录因子-κB受体活化因子配体/核转录因子-κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK)信号通路的影响。探索补肾壮筋汤抗骨质疏松作用机制。方法:32只雌... 详细信息

目的:观察补肾壮筋汤(BSZJ)对去卵巢大鼠骨代谢、骨密度(BMD)、骨小梁微结构及对骨保护素/核转录因子-κB受体活化因子配体/核转录因子-κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK)信号通路的影响。探索补肾壮筋汤抗骨质疏松作用机制。方法:32只雌性SD大鼠随机分为假手术组(SHAM)、卵巢去势模型组(OVX)、阿仑膦酸钠组(ALN,7.35 g·kg^(-1))和补肾壮筋汤组(BSZJ,3.2 g·kg^(-1))。卵巢切除12周后给予对应药物灌胃,共12周。12周后采集血清和骨标本。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)和Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX-Ⅰ),三点弯曲实验测试大鼠胫骨生物力学,微型计算机断层扫描(Micro-CT)分析腰椎BMD及骨小梁微结构。包括骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(***)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(***)及结构模型指数(SMI)。苏木素-伊红(HE)及马松(Masson)染色分析腰椎骨小梁及骨胶原变化。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定腰椎OPG、RANKL、RANK mRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定腰椎OPG、RANKL、RANK蛋白的表达。结果:与SHAM组比较,OVX组血清PINP及CTX-Ⅰ明显增加(P<0.05);与OVX组比较,ALN组及BSZJ组血清CTX-Ⅰ明显降低(P<0.05)。与SHAM组比较,OVX组胫骨生物力学载荷(Fracture Load)明显降低(P<0.05);与OVX组比较,ALN组和BSZJ组生物力学载荷增加。与SHAM组比较,OVX组腰椎BMD、BV/TV、***及Tb.N明显降低,***及SMI明显增加(P<0.05);与OVX组比较,BSZJ组腰椎BMD、BV/TV及Tb.N明显增加,***及SMI明显降低(P<0.05)。与SHAM组比较,OVX组骨小梁结构紊乱,骨小梁之间的距离增加;胶原纤维变细,连续性欠佳;与OVX组比较,BSZJ组腰椎骨小梁结构相对完整,骨小梁之间的距离变小,胶原纤维增粗。与SHAM组比较,OVX组腰椎OPG mRNA及蛋白表达明显降低,RANKL、RANK mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05);与OVX组比较,BSZJ组OPG mRNA及蛋白表达明显增加,RANKL、RANK mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:补肾壮筋汤能够调节去卵巢大鼠骨代谢并发挥抗骨质疏松作用,潜在的作用机制是通过调控OPG/RANKL/RANK信号通路实现的。

关键词：骨质疏松补肾壮筋汤卵巢去势大鼠骨保护素/核转录因子-κB受体活化因子配体/核转录因子-κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK)信号通路

基于肠道菌群探讨补肾益精法治疗少弱精子症的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第5期30卷 170-175页

作者：黄念文李海松毕焕洲王彬冯隽龙孙龙吉王继升王成李北京中医药大学东直门医院北京100700 北京中医药大学深圳医院广州深圳518172 北京中医药大学东方医院北京100078

少弱精子症是引起男性不育的主要原因,其病因复杂多样,目前临床上仍有部分少弱精子症的病因未明,称为特发性少弱精子症。随着高通量测序技术的发展,发现肠道菌群紊乱可能是少弱精子症发病的一个重要促进因素。中医学认为“肾精亏虚”为... 详细信息

少弱精子症是引起男性不育的主要原因,其病因复杂多样,目前临床上仍有部分少弱精子症的病因未明,称为特发性少弱精子症。随着高通量测序技术的发展,发现肠道菌群紊乱可能是少弱精子症发病的一个重要促进因素。中医学认为“肾精亏虚”为少弱精子症的核心病机,临床上采用补肾益精法治疗少弱精子症疗效显著,但其作用机制尚未完全阐明。结合中医基础理论及分子生物学研究发现,“肾精”与肠道菌群具有相似性,在少弱精子症发病过程中,肠道菌群紊乱与中医“肾精亏虚”病机有共通之处,且补肾益精类中药可调节肠道菌群紊乱,这或许是补肾益精法有效治疗少弱精子症的机制之一。基于此,该文从肠道菌群角度探讨中医补肾益精法治疗少弱精子症的作用机制,以期为中医药治疗少弱精子症提供新的思路。

关键词：少弱精子症肠道菌群肾精亏虚补肾益精中医中药

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基于转录组和同位素标记相对与绝对定量技术的宽体金线蛭生品和烫制品差异蛋白研究

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中国新药杂志 2024年第3期33卷 292-300页

作者：华羽彤李尹郭秀欢雷艳辛泉诚袁瑞娟北京中医药大学北京102488

目的:通过转录组和蛋白质组技术研究宽体金线蛭生品和炮制品的差异蛋白。方法:以活体宽体金线蛭(Whitmania pigra Whitman)为原料,基于无参转录组进行基因分析,利用转录组信息匹配到Helobdella robusta蛋白质库,然后利用同位素标记相对... 详细信息

目的:通过转录组和蛋白质组技术研究宽体金线蛭生品和炮制品的差异蛋白。方法:以活体宽体金线蛭(Whitmania pigra Whitman)为原料,基于无参转录组进行基因分析,利用转录组信息匹配到Helobdella robusta蛋白质库,然后利用同位素标记相对与绝对定量技术(iTRAQ)蛋白组学技术进行宽体金线蛭的蛋白成分分析,筛选出存在于宽体金线蛭生品及炮制品中的差异蛋白质,并对其进行基因本体(GO)功能聚类分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析以及蛋白质相互作用网络分析(PPI),并结合BIOPEP数据库筛选可能具有抗凝活性的蛋白。结果:本研究筛选到差异表达蛋白共112种,其中78种上调蛋白、34种下调蛋白,并推定出6条可能具有抗凝作用的差异蛋白。GO功能聚类分析结果表明,在细胞过程(cellular process)、代谢过程(metabolic process)条目富集的差异蛋白数量最多。在差异性方面,大分子复合物(macromolecular complex)、结构分子活性(structural molecule activity)条目差异最显著。KEGG富集分析结果表明,差异蛋白在代谢途径(metabolic pathways)富集到的蛋白最多,ECM-受体相互作用(ECM-receptor interaction)、核糖体(ribosome)、氧化磷酸化(oxidative phosphorylation)差异最显著。结论:本研究结合转录组、蛋白组数据,补充了宽体金线蛭的蛋白质库,筛选出了生品及烫制品的差异蛋白并推定了可能具有抗凝作用的差异蛋白,为宽体金线蛭基因组成、物质基础研究及炮制机制提供参考依据。

关键词：宽体金线蛭炮制转录组同位素标记相对与绝对定量技术蛋白组差异蛋白

海藻甘草反药组合在海藻玉壶汤中加减应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 37-45页

作者：董肖田颐刘晓庆曹灿廖文勇徐向楠吴美晶柳海艳陈绍红于雪范盎然修琳琳钟赣生北京中医药大学北京100029

目的:观察海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响。方法:将128只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20μg·kg^(-1))... 详细信息

目的:观察海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响。方法:将128只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20μg·kg^(-1))、海藻玉壶汤(HYT)组(12.06 g·kg^(-1))、HYT去海藻(HYT-H)组(9.90 g·kg^(-1))、HYT去甘草(HYT-G)组(10.26 g·kg^(-1))、HYT去海藻甘草(HYT-HG)组(8.10 g·kg^(-1))、海藻甘草(HG)组(3.96 g·kg^(-1)),空白组给予去离子水灌胃,其余各组灌胃丙硫氧嘧啶(PTU)复制甲状腺肿大病理模型,以优甲乐作为阳性药,其余各中药组给予相应药液灌胃,在末次给药后12 h进行取材。检测各组大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)水平;肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织氧化应激相关信号通路Nrf2、HO-1蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清ALT水平、肝脏组织中MDA和ROS含量明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD、GSH-Px活性显著降低(P<0.01),Keap1 mRNA表达显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,HYT组大鼠血清AST、ALT、ALP水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肝脏组织中MDA和ROS含量显著降低(P<0.01),SOD、GSH-Px活性显著升高(P<0.01),Keap1、p53、Caspase-3 mRNA表达显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下,海藻甘草反药组合于HYT中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激产生了不同的影响,含有海藻和甘草的HYT对甲状腺肿大模型大鼠肝脏起到了一定的保护作用,效果优于HG组、优甲乐组及各拆方组,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路以减轻肝脏氧化应激,抑制p53/Caspase-3信号通路以减少肝细胞凋亡有关。

关键词：海藻玉壶汤甲状腺肿大肝脏氧化应激核因子E2相关因子2(Nrf2) p53

海藻-甘草含药血清对M22诱导的Nthy-ori-3-1细胞增殖的作用研究

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中草药 2024年第2期55卷 527-533页

作者：任彧娜刘晓庆曹灿李慕云廖文勇张淑静于雪范盎然修琳琳钟赣生北京中医药大学北京100029

目的探讨海藻-甘草含药血清对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1增殖的作用,为进一步研究海藻与甘草配伍抗甲状腺肿大的作用机制奠定基础。方法体外培养Nthy-ori-3-1细胞,使用不同浓度的促甲状腺激素受体人单克隆抗体M22作用于Nthy-ori-3-... 详细信息

目的探讨海藻-甘草含药血清对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1增殖的作用,为进一步研究海藻与甘草配伍抗甲状腺肿大的作用机制奠定基础。方法体外培养Nthy-ori-3-1细胞,使用不同浓度的促甲状腺激素受体人单克隆抗体M22作用于Nthy-ori-3-1细胞不同时间,观察M22作用的最佳浓度及时间。制备海藻-甘草含药血清,M22刺激细胞24 h后,分别给予5%、10%、15%、20%海藻-甘草含药血清干预24 h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡情况;透射电镜观察细胞形态;免疫荧光检测微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain3,LC3)表达情况;Western blotting检测Beclin1蛋白表达。结果 M22明显刺激Nthy-ori-3-1细胞增殖,0.125μg/mL的M22作用24 h时促增殖作用最佳(P<0.01)。经海藻-甘草含药血清干预后,细胞增殖明显抑制(P<0.05、0.01),细胞呈现明显的凋亡形态学变化,G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.01),G2/M期细胞比例无显著性差异,细胞凋亡率明显上升(P<0.01),LC3平均荧光强度增加,Beclin1蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论 M22可刺激Nthy-ori-3-1细胞增殖,海藻-甘草含药血清抑制M22诱导的Nthy-ori-3-1细胞增殖,促进其凋亡,可能通过调节自噬来发挥抑制Nthy-ori-3-1细胞增殖的作用,以达到抗甲状腺肿大的疗效。

关键词：海藻-甘草含药血清甲状腺肿大 Nthy-ori-3-1细胞细胞自噬细胞凋亡

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伏风理论在肺系疾病中临床运用

中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 92-99页

作者：于明霞王妍妍张艺崔红生北京中医药大学第三附属医院北京100029 北京中医药大学北京100029

“伏风”有先天伏风和后天伏风,先天伏风与体质有关,后天伏风又可分为内风和外风。伏风作为“伏邪”的一种,既有伏邪的致病特点,又有风邪的发病方式。正气不足是伏风形成的必要条件,外邪、情志、饮食、劳累是伏风发病的常见诱因,郁热伤... 详细信息

“伏风”有先天伏风和后天伏风,先天伏风与体质有关,后天伏风又可分为内风和外风。伏风作为“伏邪”的一种,既有伏邪的致病特点,又有风邪的发病方式。正气不足是伏风形成的必要条件,外邪、情志、饮食、劳累是伏风发病的常见诱因,郁热伤阴是发病之必然转归。伏风内潜,外邪引触,内外相引致气机升降失常,三焦失序,影响气血津液代谢,产生的风、痰、火、瘀交织又成为迁延不愈的致病因素。课题组认为伏风发病,总以“扶正固本、透风达邪”为治疗原则,根据兼夹邪气不同,配合散寒、清热、解毒、润燥、滋阴、柔肝、健脾、益肾之法。课题组根据伏风之先后天、内外属性及兼夹之邪不同将伏风致病分为外邪侵袭、三焦失调和正虚不固三大类型,其中伏风内潜,外邪侵袭又可根据兼夹之邪不同分为风寒袭肺、风热犯肺、风火炽盛、风燥伤肺、肺热阴伤;伏风内动,三焦失调根据伏风潜伏脏腑不同分为肝风内动,上焦失序、脾风内伏,中焦失运、肾风内藏,下焦失济;先天伏风,正虚不固因其自身禀赋特点归于第三类,并对不同证型给予不同方药辨证论治。充分理解伏风理论,有利于对肺系外内合邪、反复发作,缠绵不愈的病机特点作出合理解释。通过对“伏风”致病的病机、治疗原则及辨证施治的详细论述,阐明了“伏风”在肺系疾病中的临床应用,以期启发临证。

关键词：伏风内潜内风外风透风达邪肺系疾病

252例过敏性哮喘患者体质分布特征及临床资料分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 110-116页

作者：张诗瑜崔红生高英洁弓雪峰王佳美吕明圣候丹张馨予郭琦黄贵锐程思益张志杰北京中医药大学第三附属医院北京100029 北京中医药大学北京100029

目的:通过横断面研究的方法,分析过敏性哮喘患者兼夹体质的分布特点,为过敏性哮喘的调体及治疗提供依据。方法:选取于2021年12月至2023年9月门诊就诊的过敏性哮喘患者,采用问卷调查的方式,收集患者的临床资料,分析过敏性哮喘患者的兼夹... 详细信息

目的:通过横断面研究的方法,分析过敏性哮喘患者兼夹体质的分布特点,为过敏性哮喘的调体及治疗提供依据。方法:选取于2021年12月至2023年9月门诊就诊的过敏性哮喘患者,采用问卷调查的方式,收集患者的临床资料,分析过敏性哮喘患者的兼夹体质分布规律及过敏性哮喘特禀质患者性别、年龄、体质量指数、合并过敏性疾病、过敏史、家族史、蓄养宠物情况、呼出气一氧化氮等与体质的相关性。结果:研究共纳入过敏性哮喘患者252例,男女比为1∶1.5,青年占比最高。单纯特禀质占比最高,特禀质兼夹其他体质依次为阳虚质、气虚质、气郁质、痰湿质、湿热质、阴虚质、和血瘀质。兼夹一种体质有58例,阳虚质占比最高。兼夹两种体质有38例,气虚质+阳虚质数量最多。超重或肥胖患者共116例;共48例患者有过敏性疾病家族史,117例患者有过敏史;70例患者养宠物,养宠物与对猫狗毛过敏有相关性(P<0.05);202例的患者合并其他过敏性疾病,过敏性鼻炎、荨麻疹和湿疹是合并最多的三类疾病;嗜酸性气道炎症患者有177人。过敏性哮喘证型依次排列为风哮证134例(53.17%)、热哮证51例(20.24%)、寒哮证32例(12.7%)、虚哮证15例(5.95%)、气郁哮证14例(5.56%)、瘀哮证6例(2.38%)。二元Logistic回归分析结果提示,女性阳虚质与气郁质较男性多;年龄越大出现痰湿质与湿热质可能性越小;体质量指数与痰湿质呈正相关,与阳虚质呈负相关(P<0.05)。结论:过敏性哮喘以特禀质为主,风哮证为最常见的证型。特禀质与其他偏颇体质兼夹致使过敏性哮喘反复发作,兼夹体质中气虚质、阳虚质多见。过敏性哮喘中女性、青年发病率更高,女性更易兼夹阳虚质和气郁质。肥胖可能是过敏性哮喘的重要危险因素,肥胖者更易兼夹痰湿质和湿热质。宠物接触、过敏性鼻炎可能与过敏性哮喘控制不佳有关。

关键词：过敏性哮喘体质特点特禀质兼夹体质临床资料

影响慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰热郁肺证患者治疗疗效相关因素的回顾性分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 117-122页

作者：张志杰崔红生黄贵锐张诗瑜王妍妍李佳琦靳锐锋北京中医药大学第三附属医院北京100029 北京中医药大学北京100029

目的:分析影响慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)痰热郁肺证患者治疗效果的相关因素。方法:收集100例AECOPD患者的一般资料[性别、年龄、烟酒史、慢性阻塞性肺疾病(COPD)病程],实验室检查结果,既往病史,改良版英国医学研究委员会呼吸... 详细信息

目的:分析影响慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)痰热郁肺证患者治疗效果的相关因素。方法:收集100例AECOPD患者的一般资料[性别、年龄、烟酒史、慢性阻塞性肺疾病(COPD)病程],实验室检查结果,既往病史,改良版英国医学研究委员会呼吸困难问卷(mMRC)调查,COPD患者自我评估测试问卷(CAT)评分,6 min步行距离,中医证候量表评分,是否服用中药,发病日期。采用独立样本t检验、χ^(2)检验或者单因素Logistic回归分析进行分析,采用多因素Logistic回归分析来确定影响治疗效果的主要因素。结果:共纳入患者100例,显著有效组47例,非显著有效组53例,两组患者年龄,身体质量指数(BMI),红细胞计数,血红蛋白水平,尿素氮(BUN),mMRC评分,服用中药,发病节气差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者在发病主运、主气、客主加临方面差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者发病节气统计结果显示显效组大多处于春夏发病。多因素Logistic回归显示两组BMI、BUN、服用中药、主气少阴君火(相对于厥阴风木)差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:提高BMI指数、降低BUN水平、服用中药均可提高治疗效果,在主气少阴君火(相对于厥阴风木)时治疗效果较好。

关键词：慢性阻塞性肺疾病急性加重痰热郁肺证清咳平喘颗粒回顾性研究五运六气

基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱技术与网络药理学揭示金银花与忍冬叶化学成分差异及抗衰老机制

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食品科学 2024年第20期45卷 1-11页

作者：刘舒鹏黄厚钰王笑雪郝巨辉李卫东北京中医药大学中药学院北京中医药大学航空航天中医药协同创新中心北京同仁堂供应链管理有限责任公司

目的：探讨金银花醇提物（ethanol extract of Lonicera japonica flos,EELF）与忍冬叶醇提物（ethanol ***,EELL）化学成分差异、抗衰老潜在活性成分及机制。方法：采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱（ultra-high performanc... 详细信息

目的：探讨金银花醇提物（ethanol extract of Lonicera japonica flos,EELF）与忍冬叶醇提物（ethanol ***,EELL）化学成分差异、抗衰老潜在活性成分及机制。方法：采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱（ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole electrostatic field orbitrap mass spectrometry,UPLC-QE-Orbitrap-MS）测定EELF和EELL，解析两者间化学成分差异。采用含不同质量浓度EELF和EELL的Escherichia coli OP50菌液喂养秀丽隐杆线虫，考察线虫寿命、运动能力、生殖能力、抗氧化应激能力等指标变化。通过网络药理学探究其抗衰老的潜在作用机制。结果：EELF和EELL中共鉴定出122种化合物，有机酸类化合物35种、黄酮类化合物27种、环烯醚萜类化合物37种、其他化合物23种。EELF和EELL化学成分组成大致相同，绿原酸、总酚酸等含量也大致相同，EELL中总黄酮、异绿原酸C和木犀草苷含量显著高于EELF，而异绿原酸A含量显著低于EELF。不同质量浓度的EELF和EELL均能提高线虫抗氧化应激及热应激能力、延长线虫的寿命、提高线虫运动与生殖能力，并降低活性氧与脂褐素水平。共筛选出EELF和EELL中16个潜在活性成分和抗衰老潜在靶点59个，核心靶点有信号转导和转录激活因子3、丝氨酸/苏氨酸激酶1、表皮生长因子受体、类固醇受体辅激活因子、胱天蛋白酶3、肿瘤坏死因子等；主要通过癌症通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路、血脂与动脉粥样硬化等通路发挥抗衰老作用。结论：EELF和EELL具有相似的化学成分，发挥着相似的抗衰老作用，具有多途径、多靶点的特性，本研究可为其深度开发利用提供参考。

关键词：金银花忍冬叶化学成分抗衰老网络药理学