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沉香中倍半萜类化学成分研究

中国中药杂志 2022年第16期47卷 4385-4390页

作者：张航马家乐昝妮利王嵘晔赵云芳宋月林郑姣屠鹏飞霍会霞李军北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

采用硅胶、ODS和半制备HPLC等色谱技术对沉香石油醚部位进行化学成分研究。通过其理化性质及IR、UV、MS、NMR等谱学数据共鉴定了8个倍半萜类化合物,分别为(4S,5S,7R,10S)-5,7-dihydroxy-11-en-eudesmane(1)、(7R,10S)-eudesma-4-en-11,15-diol(2)、(2R,4S,5R,7R)-2-hydroxyeremophila-9,11-dien-8-one(3)、7α-H-9(10)-ene-11,12-epoxy-8-oxoeremophilane(4)、(+)-9β,10β-epoxyeremophila-11(13)-en(5)、4(14)-eudesmene-8α,11-diol(6)、12,15-dioxo-selina-4,11-dien(7)、2β,8aα-dihydroxy-11-en-eremophilane(8)。其中化合物1和2为新化合物,通过计算ECD确定了其绝对构型。化合物1、4、6~8在20μmol·L浓度时能显著改善牛磺胆酸(TCA)诱导的GES-1人胃黏膜细胞损伤,其细胞保护率分别为23.51%±2.79%、16.10%±1.25%、24.45%±4.89%、17.48%±2.93%、21.44%±2.39%。

关键词：沉香化学成分倍半萜胃黏膜细胞保护

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中药诱导细胞周期阻滞抗肿瘤研究进展

中国实验方剂学杂志 2023年第2期29卷 222-234页

作者：刘亚鑫魏雪娇黄惠铭欧阳里山谢锦欣王龙燕刘东晓屠鹏飞胡仲冬北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

癌症患病率和死亡率逐年上升,已成为当今世界上造成死亡的主要原因之一。癌症的诱因多种多样,遗传、辐射、致癌物等都可能诱发癌症,细胞周期调控的异常也是诱因之一。细胞周期是一个复杂的事件序列,细胞通过该事件重复其内容并分裂。细... 详细信息

癌症患病率和死亡率逐年上升,已成为当今世界上造成死亡的主要原因之一。癌症的诱因多种多样,遗传、辐射、致癌物等都可能诱发癌症,细胞周期调控的异常也是诱因之一。细胞周期是一个复杂的事件序列,细胞通过该事件重复其内容并分裂。细胞周期有高度的组织性和条理性,以确保遗传物质的完整性。该过程依赖于许多基因和蛋白的共同调节,当这些物质发生改变时,细胞周期出现异常,导致细胞增殖失去管控,细胞凋亡被抑制,最终导致肿瘤的发生。目前,肿瘤的治疗手段有传统的手术切除、放射治疗和化学药物治疗及靶向治疗等。中药来源广泛、不良反应小,是中医药文化的瑰宝,值得进一步地研究和开发。越来越多的研究发现,多种中药能够通过诱导细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用,从而提升肿瘤中晚期患者的生存质量,延长患者生存期。该文首先介绍了细胞周期各时期的特点和相关调控因子,列举了细胞周期异常导致肿瘤发生的临床和实验实例,接着综述了国内外靶向细胞周期抗肿瘤热点药物,如周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂、细胞分裂周期因子25(CDC25)抑制剂、ATR丝氨酸/苏氨酸激酶(ATR)抑制剂和细胞周期检查点激酶1(CHK1)抑制剂等,最后从细胞周期G0/G1期、S期和G2/M期3个方面切入,总结了近些年来中药通过诱导细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用的相关研究,以期为中药抗肿瘤作用研究提供一定的参考。

关键词：中药抗肿瘤细胞周期研究进展

槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞增殖的作用

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中国实验方剂学杂志 2022年第1期28卷 79-84页

作者：杨爱琳刘亚鑫黄惠铭欧阳里山谢锦欣刘东晓王龙燕屠鹏飞胡仲冬北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

目的:观察槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞自噬的影响及对核纤层蛋白B;(Lamin B;)表达的调控作用,并探讨其在VCaP细胞增殖中发挥的作用。方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测0,2,4,6,8,10 g·L^(-1)槐耳清膏在不同时间下对人前列腺... 详细信息

目的:观察槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞自噬的影响及对核纤层蛋白B;(Lamin B;)表达的调控作用,并探讨其在VCaP细胞增殖中发挥的作用。方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测0,2,4,6,8,10 g·L^(-1)槐耳清膏在不同时间下对人前列腺癌VCaP细胞的增殖抑制作用。采用吖啶橙染色法分析槐耳清膏给药对VCaP细胞中自噬溶酶体形成的影响。借助蛋白免疫印迹法(Western blot)检测槐耳清膏给药后细胞中与自噬密切相关的蛋白微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3),自噬相关蛋白3(Atg3),自噬相关蛋白5(Atg5),自噬相关蛋白7(Atg7)的表达。采用CCK-8法检测槐耳清膏与自噬抑制剂(Bafilomycin A1)联合给药及槐耳清膏单独给药对细胞增殖的作用。通过Western blot检测槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞中Lamin B;表达的影响,并采用RNA干扰技术探究Lamin B;在槐耳抗人前列腺癌VCaP细胞增殖中的作用。结果:与空白组比较,槐耳清膏能抑制人前列腺癌VCaP细胞的增殖(P研究发现抑制自噬能够降低人前列腺癌VCaP细胞对槐耳清膏的敏感性(P<0.05)。与空白组比较,槐耳清膏给药能够抑制人前列腺癌VCaP细胞中Lamin B;蛋白表达(P<0.01),下调Lamin B;蛋白表达,在一定程度上也能够减弱VCaP细胞对槐耳清膏的敏感性(P<0.01)。结论:自噬活化和Lamin B;表达下调可能参与了槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞的增殖抑制作用,能够为槐耳临床应用提供一定的理论基础。

关键词：槐耳清膏人前列腺癌VCaP细胞自噬核纤层蛋白B 细胞增殖

沉香提取物对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

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中草药 2022年第4期53卷 1093-1099页

作者：马家乐符昭君王鑫玉靳凤玉赵一慕孟英心王凌潇李军郑姣北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

目的利用皮质酮诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12损伤,模拟糖皮质激素诱发神经功能障碍的病理过程,探讨沉香提取物对神经细胞的保护作用及其机制。方法采用400μmol/L皮质酮诱导的PC12细胞作为神经元损伤模型,给予沉香提取物(5... 详细信息

目的利用皮质酮诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12损伤,模拟糖皮质激素诱发神经功能障碍的病理过程,探讨沉香提取物对神经细胞的保护作用及其机制。方法采用400μmol/L皮质酮诱导的PC12细胞作为神经元损伤模型,给予沉香提取物(5、10、20μg/mL)干预细胞24 h后,利用CCK-8试剂盒检测细胞存活率;采用Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡率;通过Western blotting检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、cleaved Caspase-3、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]、cleaved PARP表达情况。结果与对照组比较,皮质酮处理PC12细胞24 h后细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),cleaved PARP/PARP和cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,给予沉香提取物24 h后细胞存活率显著升高(P<0.05、0.01),凋亡率显著降低(P<0.01),cleaved PARP/PARP和cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论沉香提取物通过调控Caspase-3/PARP通路改善皮质酮诱导的PC12细胞凋亡,从而保护神经元。

关键词：沉香 PC12细胞神经损伤皮质酮凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶

血竭石油醚提取物对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞的抗肿瘤作用

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中国实验方剂学杂志 2022年第1期28卷 85-91页

作者：黄惠铭田颖颖庞道然刘亚鑫欧阳里山屠鹏飞李军胡仲冬北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

目的:研究血竭石油醚提取物(SDPEF)对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞增殖、凋亡、体外迁移能力及自噬的影响,并阐明其分子作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测SDPEF(0,20,40,60,80 mg·L^(-1))作用24,48,72 h时,对人胃癌HGC... 详细信息

目的:研究血竭石油醚提取物(SDPEF)对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞增殖、凋亡、体外迁移能力及自噬的影响,并阐明其分子作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测SDPEF(0,20,40,60,80 mg·L^(-1))作用24,48,72 h时,对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞体外增殖的影响。借助Hoechst染色实验观察不同浓度的SDPEF作用48 h后对HGC-27和MGC-803细胞凋亡的影响。采用流式细胞术检测不同浓度SDPEF作用48 h,对HGC-27和MGC-803细胞凋亡率的影响。采用细胞划痕实验观察不同浓度SDPEF在不同作用时间点对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞体外迁移能力的影响。借助吖啶橙染色实验检测不同浓度SDPEF对HGC-27和MGC-803细胞自噬的影响。利用蛋白免疫印迹法检测SDPEF作用人胃癌HGC-27和MGC-803细胞48 h后对信号通路相关蛋白表达水平的调控作用。结果:与空白组比较,SDPEF(30 mg·L^(-1))组人胃癌HGC-27和MGC-803细胞的增殖和体外迁移能力明显降低(P研究能够为血竭抗肿瘤作用研究提供一定的参考。

关键词：血竭石油醚提取物人胃癌细胞增殖凋亡迁移自噬

非手性-手性色谱-预测多反应监测法分析中药毛前胡的化学成分

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色谱 2021年第6期39卷 642-651页

作者：许霞李婷贾金茹汤慧婷李军赵云芳宋月林北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

中药毛前胡为伞形科植物短片藁本Ligusticum brachylobum Franch.的干燥根,主要用于治疗风热咳嗽痰多、痰热喘满、咯痰黄稠等证,富含香豆素类化学成分,含有多组对映异构体和非对映异构体。为了深入研究毛前胡的化学成分组成,特别是对映... 详细信息

中药毛前胡为伞形科植物短片藁本Ligusticum brachylobum Franch.的干燥根,主要用于治疗风热咳嗽痰多、痰热喘满、咯痰黄稠等证,富含香豆素类化学成分,含有多组对映异构体和非对映异构体。为了深入研究毛前胡的化学成分组成,特别是对映异构体的组成,研究建立了非手性-手性色谱-预测多反应监测法(achiral-chiral-LC predictive MRM),同步实现毛前胡化学成分的化学选择性和立体选择性分离,以及高灵敏度定性分析。非手性色谱和手性液相色谱-串联质谱系统结合了RP-C18色谱柱的高效化学选择性分离能力以及手性色谱柱的立体选择性优势,有效避免了中心切割非手性-手性二维液相色谱构造复杂、重现性难以满足定量要求等缺陷。采用小内径核-壳型RP-C18色谱柱作为前端化学分离柱,实现结构类似香豆素的高效化学选择性分离;采用反相大内径AD-RH手性色谱柱,实现对映异构体的手性拆分;采用预测多反应监测模式,实现化学成分的高灵敏度检出;利用增强子离子扫描模式(EPI)采集各色谱峰的二级质谱信息,鉴定化学结构。通过定量离子对、定性离子对及两者的比值,判定是否为对映异构体。利用所构建的非手性-手性色谱耦联系统从毛前胡中共鉴定出60个化学成分,其中8对香豆素对映异构体得到了良好分离。本研究为毛前胡以及含有对映异构体中药的深入定性、定量分析提供可靠的方法。

关键词：非手性-手性色谱预测多反应监测对映异构体拆分角型吡喃香豆素毛前胡

氯化钠诱导白木香悬浮细胞合成苯乙基色酮类成分的LC-MS分析

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中国中药杂志 2023年第9期48卷 2480-2489页

作者：杜宇张晓雪张泽坤王雯静张蓓蓓张明亮王阳葛祥宇史社坡北京中医药大学中药学院、中药现代研究中心北京100029

采用超高效液相色谱-串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)结合超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)对氯化钠诱导的白木香悬浮细胞中苯乙基色酮类成分进行定性和定量分析。UPLC-Q-Exactive-MS和UPLC-QQQ-MS/M... 详细信息

采用超高效液相色谱-串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)结合超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)对氯化钠诱导的白木香悬浮细胞中苯乙基色酮类成分进行定性和定量分析。UPLC-Q-Exactive-MS和UPLC-QQQ-MS/MS均采用Waters T3色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相分别进行梯度洗脱色谱分离,质谱分析均采用电喷雾正离子模式采集。利用UPLC-Q-Exactive-MS从氯化钠诱导的白木香悬浮细胞样品中鉴定出苯乙基色酮类化合物47个,其中简单苯乙基色酮及其苷22个、四羟基四氢苯乙基色酮10个、三元氧环四氢苯乙基色酮15个。通过UPLC-QQQ-MS/MS技术对氯化钠诱导处理后白木香悬浮细胞中25个苯乙基色酮进行了定量。通过2种液质联用技术快速、高效地对氯化钠诱导白木香悬浮细胞中苯乙基色酮类成分进行定性、定量分析,为利用体外培养等生物技术制备沉香中主要的药效和香味物质苯乙基色酮提供重要参考。

关键词：白木香悬浮细胞沉香苯乙基色酮 LC-MS

UPLC-Q-TOF-MS结合分子量印迹和质量亏损过滤策略快速筛选并鉴定血竭中黄酮类化学成分

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中国中药杂志 2023年第4期48卷 993-1004页

作者：赵依佳李军宋青青屠鹏飞北京中医药大学中药学院、中药现代研究中心北京100029

血竭为名贵活血化瘀中药,现有研究表明其药效成分群为黄酮类化合物。血竭中黄酮类化合物化学结构的多样性为其化学成分轮廓深入表征带来了巨大的挑战。为了系统表征血竭化学成分轮廓,该研究首先采集化学成分质谱信息,进一步利用分子量印... 详细信息

血竭为名贵活血化瘀中药,现有研究表明其药效成分群为黄酮类化合物。血竭中黄酮类化合物化学结构的多样性为其化学成分轮廓深入表征带来了巨大的挑战。为了系统表征血竭化学成分轮廓,该研究首先采集化学成分质谱信息,进一步利用分子量印迹(molecular weight imprinting,MWI)以及质量亏损过滤(mass defect filtering,MDF)方法处理高分辨数据集,实现血竭中黄酮类化合物的快速鉴定。采用UPLC-Q-TOF-MS采集正离子模式下m/z 100~1000质谱数据;根据前期文献报道中的血竭黄酮类化合物,建立[M+H]+质荷比的数据库,以±10×10^(-3)为误差范围构建分子量印迹,快速检索已知黄酮类化合物,并结合MS2数据确证化学结构。通过已知血竭黄酮类化合物建立MDF的“五点筛选框”,获取可能的目标成分,进一步结合诊断离子(DFI)、中性丢失(NL)和质谱裂解规律,推断化学结构。最终从血竭提取物中初步鉴定了70个黄酮类化合物,包括黄烷氧化同系物类5个、黄烷类12个、二氢查尔酮类1个、黄酮二聚体类49个、三聚体类1个以及其他类型2个。该研究阐明了血竭中黄酮类化学成分组成,同时也表明高分辨质谱技术结合MWI与MDF等数据后处理方法可以实现中药化学成分组成的快速表征。

关键词：血竭黄酮分子量印迹质量亏损过滤 UPLC-Q-TOF-MS

基于DNA条形码及HPLC对市售黄芩的种质资源鉴定和质量评价

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中国中药杂志 2022年第7期47卷 1814-1823页

作者：张靖晗刘珊瑚张志飞石玥满金辉尹光耀王馨刘凤波王晓晖魏胜利北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 中药材规范化生产教育部工程研究中心北京100102

黄芩Scutellaria baicalensis是我国常用的大宗药材,该研究根据以前的叶绿体基因组测序结果,选取trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA序列对市售黄芩样品进行种质资源鉴定,并通过HPLC测定市售样品的黄芩苷含量,以期确定检测黄芩市场样品的... 详细信息

黄芩Scutellaria baicalensis是我国常用的大宗药材,该研究根据以前的叶绿体基因组测序结果,选取trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA序列对市售黄芩样品进行种质资源鉴定,并通过HPLC测定市售样品的黄芩苷含量,以期确定检测黄芩市场样品的最佳DNA条形码,市场样品的种质资源和质量。该研究从我国24个省收集104份样品并提取DNA进行PCR扩增,trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA 3段序列的扩增效率分别为100%、59.62%、25.96%;序列分析结果表明利用trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA分别能够鉴定5、4、2个基因型,但是与野生型基因型序列不相同,3段序列联合分析仅形成6个基因型;系统进化树和遗传距离分析结果表明,trnH-psbA片段可用于鉴别黄芩真伪样品,因此trnH-psbA片段为鉴定市场样品种质资源最佳片段,对其所鉴定的市场样品基因型(THap1~THap5)进行分析,发现THap2为市场样品主要流通基因型,占总样品量的86.55%,说明市场黄芩样品种质资源比较少。HPLC检测市售黄芩样品中的黄芩苷含量结果表明,所有采集的市售黄芩样品黄芩苷含量均超过药典规定标准,样品之间黄芩苷含量差异显著,最大相差12.21%,说明市售黄芩样品质量参差不齐,而且不同采集省份和各个基因型之间的黄芩苷含量没有显著性差异。该研究为建立黄芩鉴定标准化体系提供依据,有利于指导黄芩市场样品的流通及临床科学合理用药。

关键词：黄芩 DNA条形码分子鉴定质量评价