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滇龙胆草中香叶醇10-羟化酶基因的克隆、蛋白结构及表达分析

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天然产物研究与开发 2024年第9期36卷 1542-1553页

作者：王迎夏赵赛静田维圣崔晓雪黄文倩屠鹏飞史社坡刘晓北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京中医药大学中药学院北京100029

本研究基于滇龙胆草转录组数据分析,使用RT-PCR技术克隆获得两条香叶醇10-羟化酶基因,命名为GrG10H1和GrG10H2。使用在线软件对其进行了生物信息学分析,两条基因全长分别为1548 bp、1482 bp。系统进化分析显示该基因与细胞色素P450家族... 详细信息

本研究基于滇龙胆草转录组数据分析,使用RT-PCR技术克隆获得两条香叶醇10-羟化酶基因,命名为GrG10H1和GrG10H2。使用在线软件对其进行了生物信息学分析,两条基因全长分别为1548 bp、1482 bp。系统进化分析显示该基因与细胞色素P450家族中CYP76B亚家族亲缘关系最近。通过对该蛋白进行三维结构预测、同源模建和分子对接,分析了GrG10H蛋白活性口袋中可能参与催化功能发挥的关键氨基酸残基。荧光定量PCR表明GrG10H1基因在叶中表达水平最高,茎次之,根最低。而GrG10H2基因在根和叶中表达水平较高,在茎中几乎不表达。本研究还建立了能够生产龙胆苦苷的愈伤组织细胞培养体系,为进一步解析龙胆苦苷生物合成机制奠定了基础。

关键词：滇龙胆草龙胆苦苷生物信息学分析香叶醇10-羟化酶基因克隆

利用三级质谱与二级质谱匹配策略鉴定丹参中酚酸类成分

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分析化学 2024年第2期52卷 267-285页

作者：李菡张珂李婷陈蔚李军屠鹏飞赵云芳宋月林北京中医药大学北京中医药研究院北京中医药大学中药学院

多级质谱信息(MS/MS information)可提供鉴定化合物结构的关键线索，多级质谱(MS/MS)图谱到结构的转换(MS/MS spectrum to structure)是精准鉴定化合物结构的重要过程。本研究提出了化合物的三级质谱(MS3)图谱与其结构单元的二级质谱(M... 详细信息

多级质谱信息(MS/MS information)可提供鉴定化合物结构的关键线索，多级质谱(MS/MS)图谱到结构的转换(MS/MS spectrum to structure)是精准鉴定化合物结构的重要过程。本研究提出了化合物的三级质谱(MS3)图谱与其结构单元的二级质谱(MS2)图谱匹配策略，实现了化合物结构的精准鉴定。首先，利用三重四极杆复合线性离子阱质谱仪(Qtrap-MS)的双碰撞池，采集酯类化合物酯基质谱裂解产生的特征碎片离子(c~–和y~–)在线性离子阱(LIT)内经第二次碰撞诱导解离(Collision-induced dissociation, CID)后的MS3图谱，并同步采集其结构单元化合物([M–H]~–)在LIT中经碰撞诱导解离后的MS2图谱，结果表明，酯类化合物特征碎片离子的MS3图谱与结构单元化合物的MS2图谱匹配。最后，采用HR-MS/MS对丹参总酚酸(Total salvianolic acid derivatives, TSA)进行定性分析，结合文献报道及数据库信息，初步鉴定了36种化合物。进一步利用MS3与MS2图谱匹配策略实现了对迷迭香酸和丹酚酸B的精准鉴定，证明了本方法的可行性。本方法为化合物的精准定性分析提供了新的思路和参考。

关键词：多级质谱信息三级质谱与二级质谱图谱匹配酯类化合物丹参总酚酸结构鉴定

来源：博看期刊

基于脂肪可塑性研究大黄素对肥胖小鼠的改善作用和机制

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中草药 2024年第4期55卷 1228-1236页

作者：冯倩倩贺润铖张磊耿杨赵子阳史浩男贾占红张硕峰孙建宁董世芬北京中医药大学中药学院中药药理系北京102488

目的基于脂肪可塑性探究大黄素改善肥胖的作用和机制。方法通过高脂饲养8周建立肥胖小鼠模型,肥胖小鼠随机分为对照组、模型组、大黄素(40、80 mg/kg)组、CL316243(1 mg/kg)组和罗格列酮(10 mg/kg)组,连续给药4周。测量各组小鼠体质量,... 详细信息

目的基于脂肪可塑性探究大黄素改善肥胖的作用和机制。方法通过高脂饲养8周建立肥胖小鼠模型,肥胖小鼠随机分为对照组、模型组、大黄素(40、80 mg/kg)组、CL316243(1 mg/kg)组和罗格列酮(10 mg/kg)组,连续给药4周。测量各组小鼠体质量,检测Lee’s指数和皮下腹股沟白色脂肪组织(inguinal white adipose tissue,iWAT)、附睾白色脂肪组织(epididymal white adipose tissue,eWAT)、肾周白色脂肪组织(perirenal white adipose tissue,pWAT)、肩胛区棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)指数,测量肩胛骨体温;检测口服葡萄糖耐受量、血糖曲线下面积(area under curve,AUC)及血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察脂肪组织病理变化;免疫组化法检测脂肪组织中棕色化相关蛋白解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)表达;Western blotting检测皮下iWAT中脂肪可塑性相关蛋白葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂-1α(peroxisome proliferator-activated receptor-gamma coactivator-1α,PGC-1α)、PR结构域蛋白16(positive regulatory domain-containing 16,PRDM16)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-dependent/activated protein kinase,AMPK)、磷酸化AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)蛋白表达。结果与模型组比较,大黄素组小鼠体质量、Lee’s指数及皮下iWAT、eWAT、pWAT指数均显著降低(P<0.05、0.01、0.001),肩胛区体温升高(P<0.01),血糖和血清中TC、TG、LDL-C水平均显著降低(P<0.05、0.01、0.001);BAT中UCP1表达显著增加(P<0.001),皮下iWAT中PGC-1α、PRDM16、TFAM、p-AMPK/AMPK、GLUT4蛋白表达水平均显著升高(P<0.05、0.01)。结论大黄素能够有效抑制肥胖小鼠模型的体质量增加,改善糖脂代谢紊乱,其机制与激活BAT、诱导WAT棕色化有关。

关键词：大黄素脂肪可塑性肥胖糖脂代谢棕色脂肪组织白色脂肪组织

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中药皂苷类化合物生物转化研究进展

中草药 2024年第3期55卷 989-1003页

作者：李忆红梁雨璐解嘉琪王灿黄建梅北京中医药大学中药学院北京102488

皂苷广泛存在于药用植物中,按母核结构可分为三萜和甾体皂苷,具有多种药理活性。众多研究发现皂苷中糖基部分的组成与其药理活性密切相关,改变皂苷分子中的糖基数量和结构能改变皂苷的药理活性及其生物利用度,为开发药物提供更多的化合... 详细信息

皂苷广泛存在于药用植物中,按母核结构可分为三萜和甾体皂苷,具有多种药理活性。众多研究发现皂苷中糖基部分的组成与其药理活性密切相关,改变皂苷分子中的糖基数量和结构能改变皂苷的药理活性及其生物利用度,为开发药物提供更多的化合物资源。相较于传统的化学方法,皂苷生物转化修饰糖基部分具有选择性高、成本低、污染小等优点,被广泛用于次级皂苷与皂苷元的制备。通过对皂苷脱糖基转化生成较高生物活性的次级皂苷与苷元的研究进展进行综述,为皂苷类化合物生物转化研究提供思路和方法。

关键词：皂苷生物转化肠内菌微生物酶脱糖基人参皂苷绞股蓝皂苷黄芪甲苷

盐酸小檗碱树脂复合物冻干口崩片的制备及质量评价

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中国药学杂志 2024年第8期59卷 724-731页

作者：朱笑颜戴俊东郭鹏川吴师月周琦人北京中医药大学中药学院北京102488

目的以盐酸小檗碱为模型药物,Kyron-T114为载药树脂,制备盐酸小檗碱树脂复合物以实现对冻干口崩片的良好掩味效果。方法采用静态制备法,制备药物树脂复合物,绘制吸附等温线、吸附动力学曲线研究树脂的吸附机理,通过扫描电镜(SEM)、差示... 详细信息

目的以盐酸小檗碱为模型药物,Kyron-T114为载药树脂,制备盐酸小檗碱树脂复合物以实现对冻干口崩片的良好掩味效果。方法采用静态制备法,制备药物树脂复合物,绘制吸附等温线、吸附动力学曲线研究树脂的吸附机理,通过扫描电镜(SEM)、差示扫描量热法(DSC)、X射线衍射法(XRD)和傅立叶红外光谱法(FTIR)对制得的树脂复合物进行物性表征。采用冻干赋型技术,制备盐酸小檗碱与树脂复合物口腔崩解片,对其体外溶出度研究与掩味效果进行评价。结果制得的盐酸小檗碱树脂复合物载药量为43.04%,药物在树脂上的吸附为多分子层的化学吸附。盐酸小檗碱粉末的溶出主要受溶解度的影响,其溶出机制以Fick扩散为主。树脂复合物粉末的溶出主要受溶液pH和离子浓度及种类影响,人工胃液中,药物从树脂中快速解离,薄膜扩散成为溶出的限速步骤;水、人工唾液、pH 4.5和pH 6.8的人工肠液中药物解离速度较慢,粒子扩散成为溶出的限速步骤。树脂复合物冻干口崩片在人工唾液中的溶出显著低于盐酸小檗碱冻干口崩片,经感官评价与电子舌检测,证明其具有良好的矫味效果。结论盐酸小檗碱树脂复合物冻干口崩片掩味效果较好,且弱阳离子交换树脂Kyron-T114制备的树脂复合物有利于改善难溶性药物在人工胃液中的溶出,进而改善其口服生物利用度,为中药的掩味提供新的思路。

关键词：盐酸小檗碱离子交换树脂 Kyron-T114 掩味作用药物树脂复合物

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辣木叶乙酸乙酯部位化学成分研究

中国药学杂志 2024年第2期59卷 136-141页

作者：周立鹏雒晓卫王树楷常子豪胡倩刘宇琦高晔陈尹心王保锦黄雅王朝慧崔艺彤刘越张兰珍北京中医药大学中药学院北京102488

目的研究辣木叶乙酸乙酯部位的化学成分,并初步评价其抗氧化活性。方法运用各种色谱技术对辣木叶乙酸乙酯部位的化学成分进行分离和纯化,并依据质谱、核磁共振等波谱数据鉴定化合物的结构;采用2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)和2,2′-联... 详细信息

目的研究辣木叶乙酸乙酯部位的化学成分,并初步评价其抗氧化活性。方法运用各种色谱技术对辣木叶乙酸乙酯部位的化学成分进行分离和纯化,并依据质谱、核磁共振等波谱数据鉴定化合物的结构;采用2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)和2,2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法测试各化合物的体外抗氧化活性。结果从辣木叶乙酸乙酯部位中分离得到14个化合物,分别为淫羊藿次苷B1(1)、(3S)-O-β-D-glucopyranosyl-6-[3-oxo-(2S)-butenylideny]-1,1,5-trimethylcyclohexan-(5R)-ol(2)、淫羊藿次苷B2(3)、9-hydroxy-megastigma-4,7-dien-3-one-9-O-β-D-glucopyranoside(4)、鸢尾苷元(5)、鸢尾苷(6)、鸢尾甲苷A(7)、鸢尾甲苷B(8)、5-羟基-2-羟甲基吡啶(9)、草夹竹桃苷(10)、3,4,5-三甲氧基-1-O-β-D-苯酚葡萄糖苷(11)、1-O-(4-羟甲基苯基)α-L-吡喃鼠李糖苷(12)、苄基-O-β-D-葡萄糖苷(13)以及methyl 2-[4-(α-L-rhamnopyranosyl) phenyl] acetate(14)。其中化合物6、7和8具有一定的抗氧化活性,但均弱于阳性对照维生素C的活性。结论化合物2~11为首次从辣木属植物中分离得到。

关键词：辣木叶结构鉴定异黄酮抗氧化

基于中药超分子与肠道菌相互作用探讨大黄-黄连配伍和合的物质基础

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药学学报 2024年第2期59卷 464-475页

作者：林晓钰卢继辉张瑶芝皮雯敏王志家吴林颖黄雪梅王鹏龙北京中医药大学中药学院北京102488

基于中药超分子与肠道菌相互作用过程探讨大黄-黄连配伍和合的物质基础。采用扫描电子显微镜和动态光散射法表征大黄单煎液、黄连单煎液与配伍共煎液的形态学差异,通过建立体外抑菌模型(大肠杆菌***,屎肠球菌***与枯草杆菌***)初步评价... 详细信息

基于中药超分子与肠道菌相互作用过程探讨大黄-黄连配伍和合的物质基础。采用扫描电子显微镜和动态光散射法表征大黄单煎液、黄连单煎液与配伍共煎液的形态学差异,通过建立体外抑菌模型(大肠杆菌***,屎肠球菌***与枯草杆菌***)初步评价大黄黄连配伍对肠道菌的损伤作用;通过超高效液相色谱-串联质谱技术分析单煎与共煎的化学组分变化规律。大黄黄连共煎煮后呈浑浊状,电镜下可见300~400 nm的类球形颗粒,且较单煎液相比其汤剂相态更均一稳定;并直接观察到二者配伍后形成的超分子和肠道菌的相互作用与单煎液相比明显不同,超分子与肠道菌相互作用过程中维持类球形状态,封闭着黄连或大黄中的药效成分,可有效缓和对肠道菌的损伤,为后续大黄-黄连配伍“和合”调控肠道菌群稳态研究提供参考。

关键词：大黄黄连配伍超分子肠道菌

基于中药超分子化学探讨甘草与难溶性矿物药石膏配伍的科学内涵

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药学学报 2024年第6期59卷 1048-1056页

作者：张瑶芝皮雯敏吴林颖杨璐平姚舒畅张翔黄雪梅王鹏龙北京中医药大学中药学院北京102488

以甘草-石膏(gancao-shigao,GC-SG)药对为研究对象,运用中药超分子化学探讨中医临床应用植物药GC配伍难溶性矿物药SG的科学内涵。①观察GC、SG单煎及共煎液的丁达尔效应、微观形貌并测定其粒径、出膏量和电导率,运用等温滴定量热法(isot... 详细信息

以甘草-石膏(gancao-shigao,GC-SG)药对为研究对象,运用中药超分子化学探讨中医临床应用植物药GC配伍难溶性矿物药SG的科学内涵。①观察GC、SG单煎及共煎液的丁达尔效应、微观形貌并测定其粒径、出膏量和电导率,运用等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)和红外吸收光谱法(infrared absorption spectroscopy,IR)检测GC-SG之间的相互作用。②以等SG质量的可溶性钙盐氯化钙(CaCl_(2))代替SG与GC共煎探究钙盐含量对水煎剂的影响,结合丁达尔效应、微观形貌、出膏量及电导率进行表征,并运用ITC和IR技术检测二者相互作用;对比研究GC-SG、GC-CaCl_(2)共煎液zeta电位、紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry,UV-vis)光谱差异,并结合电感耦合等离子体发射光谱仪(inductively coupled plasma optical emission spectrometer,ICP-OES)和高效液相色谱仪(high performance liquid chromatography,HPLC)检测共煎液中的无机和有机成分含量差异。结果表明:①与单煎液相比,GC-SG共煎液有更明显的丁达尔效应,且电镜下呈均匀球形纳米颗粒,出膏量、电导率等物理表征结果显示共煎促进彼此成分溶出;ITC和IR结果表明GC-SG之间存在较强相互作用,初步表明GC-SG共煎促使形成均匀、稳定的中药超分子体系。②以可溶性钙盐代替难溶性SG与GC共煎,出现较单煎液强但散光的光路,zeta电位降低,形成大量聚沉物;出膏量和电导率结果显示共煎较单煎成分溶出减少;ITC、UV-vis和IR结果表明GC与SG、Ca^(2+)之间均有相互作用,GC-Ca^(2+)聚沉物的形成表明大量可溶性钙盐会破坏中药超分子的稳定性;ICP-OES和HPLC结果显示,GC-Ca^(2+)中的甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)成分明显低于GC-SG,这与随着Ca^(2+)浓度升高形成大量聚沉物,降低GA等有效成分溶出有关。本研究表明GC-SG配伍可形成均匀、稳定的中药超分子体系,以SG中主要成分钙盐为切入点,过量的可溶性钙盐可促使GA等有效成分聚沉,以此揭示GC与难溶性矿物药SG配伍的科学内涵。

关键词：甘草石膏难溶性矿物药中药超分子可溶性钙盐配伍

中药金属配合物超分子水凝胶的制备及其多重生物活性评价

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药学学报 2024年第5期59卷 1306-1312页

作者：吴林颖皮雯敏林晓钰张瑶芝卢继辉黄雪梅王鹏龙北京中医药大学中药学院北京102488

本研究以中药活性成分甘草酸与锌离子形成金属配合物超分子水凝胶为例,探究不同浓度锌离子对金属配合物自组装的影响,并对形成的无载体超分子水凝胶的性质及组装机制进行表征;采用扫描电子显微镜和zeta电位表征了甘草酸-锌离子配合物水... 详细信息

本研究以中药活性成分甘草酸与锌离子形成金属配合物超分子水凝胶为例,探究不同浓度锌离子对金属配合物自组装的影响,并对形成的无载体超分子水凝胶的性质及组装机制进行表征;采用扫描电子显微镜和zeta电位表征了甘草酸-锌离子配合物水凝胶的微观形貌及稳定性,其微观形态为1μm左右的类球形颗粒,且长期放置稳定性良好;采用流变仪检测其材料学性质,其具有优异的机械稳定性、可愈合性和可逆性;通过体外抑菌实验,发现甘草酸-锌离子配合物无载体超分子水凝胶相比甘草酸具有增强的抑菌效果;分别采用脂多糖和过氧化氢诱导RAW 264.7细胞损伤模型进行活性评价,发现该水凝胶同时具有抗炎和抗氧化的功效。以上研究结果表明,甘草酸-锌离子金属配合物水凝胶不仅具有良好的材料学性质,自身还具有良好的抗菌、抗炎、抗氧化多重生物活性,具有作为无载体多功能抗菌敷料的潜在临床研究价值,本研究为从天然中药活性成分中发现新型生物医疗材料提供参考。

关键词：中药活性成分金属配合物超分子水凝胶