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基于Rho/ROCK信号通路探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞迁移的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第18期30卷 35-42页

作者：范淑月吴璐蔚孙彤彤倪钰莹高婧崔颖刘敏北京中医药大学中医学院北京100029

目的:探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞(DCs)迁移的抑制作用及其潜在机制。方法:分离并培养小鼠骨髓源性DCs,显微镜观察不同时期细胞形态变化,流式细胞术检测CD11c+比例,鉴定DCs纯度;麻黄细辛附子汤(1、2、5、10、20、40、50、100 g... 详细信息

目的:探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞(DCs)迁移的抑制作用及其潜在机制。方法:分离并培养小鼠骨髓源性DCs,显微镜观察不同时期细胞形态变化,流式细胞术检测CD11c+比例,鉴定DCs纯度;麻黄细辛附子汤(1、2、5、10、20、40、50、100 g·L^(-1))处理细胞24 h,细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测麻黄细辛附子汤对细胞增殖的影响,筛选给药浓度;脂多糖(LPS)造模后,将DCs分为空白组、模型组、麻黄细辛附子汤组(2、4、8 g·L^(-1)),流式细胞术检测各组细胞表面分子CD80、CD86、主要组织相容性复合物-Ⅱ(MHC-Ⅱ)分子表达;Transwell小室观察细胞迁移情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞表面趋化因子C-C-基元受体7(CCR7)、趋化因子C-X-C-基元受体4(CXCR4)含量;免疫荧光法(IF)检测细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白(F-actin)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RhoA、ROCK1蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达显著升高(P室数量显著增加(P室数量明显减少(P<0.05),CCR7、CXCR4含量明显减少(P<0.05,P<0.01),F-actin表达显著降低(P<0.01),RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:麻黄细辛附子汤可以抑制小鼠DCs迁移,其作用机制可能与降低Rho/ROCK信号通路活性影响细胞骨架改变有关。

关键词：麻黄细辛附子汤 Rasm同源基因家族成员(Rho)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶(ROCK)信号通路变应性鼻炎树突状细胞细胞迁移

血府逐瘀汤对肺动脉内皮细胞间质转化的影响及机制

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中国药理学通报 2024年第1期40卷 155-161页

作者：曾作梅王昕玥田雷瑜崔力丹郭健陈俞材北京中医药大学中医学院北京100050

目的研究血府逐瘀汤对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells, PMVECs)内皮间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition, EndMT)的影响,并从TGF-β1/Smad信号通路进一步分析其作用机制。方法采用TGF-β1(5μg·L^(-1))建立EndMT细胞模型。实验分组为正常组,模型组(TGF-β1,5μg·L^(-1)),血府逐瘀汤低、中、高浓度组(3、10、30 mg·L^(-1)XFZYD+5μg·L^(-1)TGF-β1),SB 431542阳性药组(5μmol·L^(-1)SB 431542+5μg·L^(-1)TGF-β1)。观察细胞形态,鬼笔环肽染色观察细胞骨架,免疫荧光法观察内皮细胞标志物-血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。蛋白免疫印迹法检测血府逐瘀汤对CD31、α-SMA、Snail、p-Smad2、p-Smad1/5蛋白表达的影响。结果 TGF-β1刺激后,细胞形态由鹅卵石形向梭形转变。CD31、p-Smad1/5表达明显减少,α-SMA、p-Smad2、Snail表达则显著升高。血府逐瘀汤干预后,与模型组相比,细胞形态不同程度的接近于正常组,CD31和p-Smad1/5表达呈上升趋势,α-SMA、p-Smad2、Snail表达呈下降趋势。结论血府逐瘀汤可以减轻大鼠肺微血管内皮细胞发生内皮间质转化,其作用可能是通过影响TGF-β1/Smad信号通路实现的。

关键词：血府逐瘀汤肺微血管内皮细胞内皮间质转化 TGF-β1 TGF-β1/Smad信号通路肺动脉高压

黄芪总皂苷调控Wnt3a/β-catenin/EMT通路抑制结肠癌肝转移的作用机制

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中华中医药杂志 2024年第4期39卷 1763-1768页

作者：王旭万林鹭殷启航孙若岚顾俊菲唐德才南京中医药大学中医学院南京210023 江苏省方剂研究重点实验室南京210023

目的:观察黄芪总皂苷对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,并探讨其通过调节Wnt3a/β-catenin/EMT通路发挥抑制作用的相关机制。方法:用***细胞构建结肠癌原位移植瘤小鼠模型,将50只BA L B/c小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、黄芪... 详细信息

目的:观察黄芪总皂苷对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,并探讨其通过调节Wnt3a/β-catenin/EMT通路发挥抑制作用的相关机制。方法:用***细胞构建结肠癌原位移植瘤小鼠模型,将50只BA L B/c小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、黄芪总皂苷低剂量组(50 m g·k g^(-1)·d^(-1))、黄芪总皂苷高剂量组(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。取各组小鼠肝脏组织,观察结肠肿瘤肝转移情况,采用HE染色观察肝组织病理形态学变化,Western Blot检测Wnt3a/β-catenin/EMT相关蛋白的表达,免疫荧光染色检测β-catenin蛋白在肝组织中的表达情况。结果:模型组小鼠肝脏出现明显转移结节,且病理变化较明显,尤其出现较多肿瘤细胞浸润情况。与模型组比较,黄芪总皂苷高剂量组及阳性对照组小鼠肝组织转移灶数量明显减少,肝脏病理得到明显改善,肿瘤细胞浸润明显减少,肝组织中Wnt3a、β-catenin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01),GSK3β和E-cadherin蛋白表达量显著升高(P<0.05)。结论:黄芪总皂苷可能通过调控肝组织中Wnt3a/β-catenin/EMT信号通路发挥抑制结肠癌原位移植瘤小鼠肝转移的作用。

关键词：黄芪总皂苷结肠癌肝转移 Wnt3a/β-catenin 上皮-间充质转化

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《伤寒论》的辨证知机思维探讨

北京中医药大学学报 2024年第4期47卷 501-505页

作者：李奥柔汤阳郑丰杰北京中医药大学中医学院北京100029

辨证知机、审机论治是中医临床诊疗的基本原则。《伤寒论》创立六经辨证论治体系,系统总结外感热病的病证演变规律,借外感以论杂病,载有112首经典方剂,倡导“病皆与方相应者乃服之”,辨病与辨证相结合,既有辨证论治的学问,也有辨证知机... 详细信息

辨证知机、审机论治是中医临床诊疗的基本原则。《伤寒论》创立六经辨证论治体系,系统总结外感热病的病证演变规律,借外感以论杂病,载有112首经典方剂,倡导“病皆与方相应者乃服之”,辨病与辨证相结合,既有辨证论治的学问,也有辨证知机的奥妙。本文基于“机”之本义,从“微义”“关义”“宜义”3个角度出发,例举《伤寒论》六经辨证思维,“以方带证”分析经方的方证衍化关系及内涵,探讨《伤寒论》中所蕴含的辨证知机思维。本文强调在临床实践中,辨证知机,见微知著,洞烛先机,识机于病象之先,防患于未然;辨识机关,执简驭繁,洞悉病证之机要,牵一发而动全身;辨识机宜,把握时机,见机而作,乘机用势,顺势而为,因势利导。从辨证知机的角度解读《伤寒论》,为应用《伤寒论》相关理论指导临床实践提供思路与启发。

关键词：辨证知机见微知著辨识机关因势利导

基于网络药理学和动物实验研究麝香通心滴丸防治糖尿病心肌病的作用机制

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1905-1914页

作者：白亚利崔鑫钰袁悦莹张雨婷王伟刘天华吴晏北京中医药大学中医学院北京100029 北京中医药大学证候与方剂基础研究教育部重点实验室北京100029 证候与方剂基础研究北京市重点实验室北京100029 北京中医药大学中医药研究院北京100029

通过网络药理学、分子对接及动物实验探究麝香通心滴丸(Shexiang Tongxin Dropping Pills,STDP)防治糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)的作用机制。借助BATMAN、TCMSP、GeneCards等数据库筛选STDP防治DCM的活性成分及作用靶点,利用STRING数据库及Cytoscape软件构建STDP防治DCM作用靶点的蛋白-蛋白相互作用(protein-protein inte-raction,PPI)网络及“药物-活性成分-靶点”网络,通过DAVID数据库对作用靶点进行GO和KEGG富集分析,采用AutoDock Vina软件对关键信号通路核心受体蛋白与其对应活性成分进行分子对接验证。采用高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素的方法建立DCM大鼠模型,分为对照组、模型组、STDP低剂量组(20 mg·kg^(-1))、STDP高剂量组(40 mg·kg^(-1))、二甲双胍组(200 mg·kg^(-1));连续给药8周后超声心动图检测各组大鼠心功能,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察各组大鼠心肌病理改变,天狼猩红染色检测各组大鼠心肌胶原纤维沉积,WGA染色检测心肌肥大程度,蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38)、磷酸化p38(phosphorylation-p38,p-p38)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylation-JNK,p-JNK)、caspase-3及C-caspase-3蛋白的表达。网络药理学筛选得到STDP活性成分199种,对应靶点1655个,与463个DCM疾病靶点取交集,得到134个STDP防治DCM的潜在作用靶点,并筛选出糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路;分子对接结果显示miltirone、dehydromiltirone和tryptanthrin与RAGE均有较好的结合力。动物实验结果证实,STDP可有效保护DCM大鼠心功能,与模型组比较,STDP低、高剂量组p-p38、p-JNK、C-caspase-3蛋白表达水平均显著降低。综上,SDTP可能通过影响AGE-RAGE信号通路发挥对DCM大鼠心功能的保护作用。

关键词：麝香通心滴丸糖尿病心肌病网络药理学分子对接动物实验 AGE-RAGE信号通路心功能

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《伤寒杂病论》“饮食如故”涵义浅析

北京中医药大学学报 2024年第7期47卷 934-938页

作者：成佳琳李长香任梓林兰芯郑雨晓韩金华王雪茜北京中医药大学中医学院北京100029

《伤寒杂病论》中共有5条涉及“饮食如故”的条文。医家们对此类条文进行注解时,多将“饮食如故”解释为饮食正常或胃气未受疾病影响,忽略“饮食如故”的真实意义及其在临床鉴别诊断中的作用。本文通过整理归纳“饮食如故”相关条文,结... 详细信息

《伤寒杂病论》中共有5条涉及“饮食如故”的条文。医家们对此类条文进行注解时,多将“饮食如故”解释为饮食正常或胃气未受疾病影响,忽略“饮食如故”的真实意义及其在临床鉴别诊断中的作用。本文通过整理归纳“饮食如故”相关条文,结合《说文解字》及古今医家对“饮食如故”条文的注解,探究其背后的涵义。笔者认为“饮食如故”作为兼症,当理解为“饮食同之前一样”,因其存在于多种疾病中,故不可一味引申为“饮食正常”。“饮食如故”在临床鉴别诊断中发挥两种作用:一方面为提示病邪性质,胃里空虚,无实无饮阻滞气机,或胃肠积滞化热,但尚未形成燥屎;另一方面,当中焦成为疾病的致病因素之一时,“饮食如故”可提示胃气尚存,排除中焦影响。

关键词：伤寒杂病论饮食如故病邪病位

复方玉液汤通过调控PI3K/Akt信号通路抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡和炎症反应

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南方医科大学学报 2024年第7期44卷 1306-1314页

作者：张文祥顾惠贤陈鹏德吴思宇马洪艳姚蓝新疆医科大学中医学院新疆乌鲁木齐830057 新疆名医名方与特色方剂学重点实验室新疆乌鲁木齐830057

目的运用网络药理学技术分析复方玉液汤防治糖尿病心肌病(DCM)的作用机制,并通过动物实验进行验证。方法利用TCMSP数据库检索复方玉液汤所含6种中药(黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉)中的化学成分,根据口服生物利用度(OB)和药... 详细信息

目的运用网络药理学技术分析复方玉液汤防治糖尿病心肌病(DCM)的作用机制,并通过动物实验进行验证。方法利用TCMSP数据库检索复方玉液汤所含6种中药(黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉)中的化学成分,根据口服生物利用度(OB)和药物相似性(DL)筛选出活性化学成分以及与DCM相关的靶点;利用Drugbank、Gene Cards、OMIM和PharmGKb数据库获取与DCM相关靶点;STRING数据库对核心靶点进行PPI网络的构建和分析;Metascape进行核心靶点的GO和KEGG富集分析;利用Cytoscape3.9.1构建“中药-关键成分-核心靶点-关键通路”网络,并对核心靶点对接的关键成分进行分子对接。建立糖尿病心肌病Wistar大鼠动物模型,将大鼠分为正常组、模型组、玉液汤低剂量组(YYT-低组,0.29 g/kg)、玉液汤高剂量组(YYT-高组,1.15 g/kg),15只/组,药物剂量为生药含量。给药8周后观察各组大鼠的心脏组织病理切片,检测各组大鼠心脏电生理变化、血清中的LDH、CK、CK-MB含量变化以及心脏组织中PI3K、P-PI3K、Akt、P-AKT、BAX、IL-6、TNF-α蛋白的表达情况。结果筛选后得到复方玉液汤中61个活性化合物,1057个靶点;3682个DCM相关疾病靶点,共同靶点551个。根据筛选获得的核心靶点富集得到的核心通路发现,凋亡和炎症及相关PI3K/Akt信号通路可能是治疗DCM的关键信号通路;分子对接结果显示,金色酰胺醇酯、山柰酚等活性成分与AKT1和PIK3R1的结合活性较好。利用动物实验对筛选的靶点及通路进行验证,结果显示,与DCM模型组大鼠比较,复方玉液汤能改善模型大鼠心肌组织细胞紊乱及炎性浸润的病理特征,降低模型大鼠血清中LDH、CK、CK-MB水平及模型大鼠心脏组织中BAX、IL-6、TNF-α的蛋白含量并升高P-PI3K和P-AKT的蛋白含量(P<0.05)。结论复方玉液汤防治DCM是多成分、多靶点和多信号通路共同作用的结果。复方中主要活性成分金色酰胺醇酯、山柰酚等通过调控PI3K/Akt信号通路,抑制DCM发病过程中心肌细胞凋亡及炎症反应,发挥对DCM的保护作用。

关键词：网络药理学复方玉液汤糖尿病心肌病

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经典名方左归饮的历史沿革与关键信息考证

中国实验方剂学杂志 2024年

作者：冀迅孙晓霞时洋凯魏凯峰刘涛南京中医药大学中医学院

左归饮出自明代张介宾所著《景岳全书》，于2023年被收录于《古代经典名方目录（第二批）》。该研究遵循《古代经典名方关键信息考证原则》对古今文献中左归饮的方名源流、配伍组成、药物的基原、炮制、剂量、煎煮法、功效主治等关键信... 详细信息

左归饮出自明代张介宾所著《景岳全书》，于2023年被收录于《古代经典名方目录（第二批）》。该研究遵循《古代经典名方关键信息考证原则》对古今文献中左归饮的方名源流、配伍组成、药物的基原、炮制、剂量、煎煮法、功效主治等关键信息进行考证。研究发现左归饮古今配伍组成、药物剂量与炮制、煎煮服用方法等基本沿用原方。左归饮原方剂量换算成现代剂量为熟地黄41.03 g、山药7.46 g、枸杞子7.46 g、炙甘草3.73 g、茯苓5.595 g、山茱萸5.595 g；方中药物基原基本清晰，熟地黄选用玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa 新鲜或干燥块根炮制加工而成；山药选用薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita 的干燥根茎；枸杞子选用茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum 的干燥成熟果实；茯苓选用多孔菌科真菌茯苓Poria cocos的干燥菌核；山茱萸选用山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis 的干燥成熟果肉；炙甘草选用豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis 的干燥根和根茎。其服用方法为上诸药加水600 mL，煎至140 mL，空腹服用。左归饮功擅滋阴补肾，主治治肾阴不足、阴衰阳盛证，如腰酸遗泄，盗汗，口燥咽干，口渴欲饮，舌光红，脉细数等。古今多用于治疗多种以肾阴虚证为主的内、妇科以及神经、循环、生殖系统疾病。但现代文献对左归饮的现代应用研究及治疗机制研究不多，且市场未见规范化左归饮制剂，开发利用程度不高，仍有很大的研究空间。

关键词：经典名方左归饮功效主治煎服法文献考证基原肾阴虚临床应用

基于《中医方剂大辞典》挖掘古代治疗偏头痛的用药和时代规律

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世界中医药 2024年第1期19卷 69-73,81页

作者：张瑶付兴侯鉴宸周冉冉杨凤李芊芊葛飞罗亚敏陶晓华北京中医药大学中医学院北京102401

目的:通过收集整理《中医方剂大辞典》中治疗偏头痛的古代方剂,挖掘其用药和时代规律,为临床治疗偏头痛提供参考。方法:从《中医方剂大辞典》中筛选出符合标准的方剂,导入古今医案云平台,统计不同时代药物种类、四气、五味、归经和功效... 详细信息

目的:通过收集整理《中医方剂大辞典》中治疗偏头痛的古代方剂,挖掘其用药和时代规律,为临床治疗偏头痛提供参考。方法:从《中医方剂大辞典》中筛选出符合标准的方剂,导入古今医案云平台,统计不同时代药物种类、四气、五味、归经和功效频率,运用复杂网络分析和关联分析挖掘治疗偏头痛的核心中药和药物关联情况。结果:共筛选出266首方剂,涉及337种中药,各年代方药不全相同,但均喜用温性、苦味或辛味,归肺、肝或脾的中药。其中,最核心的中药为川芎、防风和当归,并常用甘草、细辛、防风和川芎相配伍。结论:各年代医家辨治偏头痛用药不尽相同,但其用药思想包括性味归经等基本相同,从汉唐至清代整体一脉相承,总不离祛风、活血、止痛和从肝论治,可为现代临床治疗偏头痛提供重要参考。

关键词：偏头痛数据挖掘中医方剂大辞典古今医案云平台用药规律时代规律关联规则复杂网络