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原代大鼠主动脉血管干细胞的体外培养扩增及鉴定

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南方医科大学学报 2024年第10期44卷 1881-1886页

作者：马华根黄燕杨盈欣刘海琴唐元瑜丛伟红中国中医科学院西苑医院北京100091 北京中医药大学中医学院北京100029 海军军医大学上海长征医院上海200003 福建中医药大学中医学院福建福州350122

目的采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞,为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法无菌分离2~3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉,切成长约2.0 mm的血管节段,均匀种瓶,经外膜贴壁固化后... 详细信息

目的采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞,为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法无菌分离2~3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉,切成长约2.0 mm的血管节段,均匀种瓶,经外膜贴壁固化后进行原代培养,待细胞生长融合度达80%~90%时传代。镜下观察细胞形态及其生长特性,采用流式细胞仪分析目的细胞表面标志物CD分子表达情况,成脂、成骨诱导分化实验检测其多向分化潜能。结果接种3 d后,少量梭形、星形或多角形的细胞从血管节段周围爬出;5~6 d后形成岛屿状细胞集落,细胞增殖迅速,呈放射状向外扩大,并出现细胞克隆现象;7~8 d后细胞融合成片,呈涡旋状分布;传至第3代后,细胞匀质性较高,表现为典型的“成纤维样”排列生长。流式细胞仪分析细胞主要表达CD44、CD73、CD90,阳性率分别为80.3%、62.2%、46.8%;低表达CD34、CD45、CD11b/c,阳性率分别为1.1%、0.2%、0.2%。体外诱导分化实验表明目的细胞具有成脂、成骨分化潜能。结论“切段外膜贴壁培养法”可成功分离培养出具有间充质干细胞特性的大鼠主动脉血管干细胞。

关键词：血管干细胞主动脉切段外膜贴壁培养法原代培养免疫表型分化潜能血管重构

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中医知识库质量评价现状分析及指标构建

中医杂志 2024年第11期65卷 1115-1119,1125页

作者：赵赛赛范雅祺张云王维广陈子杰刘晓峰翟双庆北京中医药大学中医学院北京市100029 北京中医药大学东直门医院电子科技大学

从中医资料类知识库和辅助决策类知识库两个角度,梳理目前中医知识库建设、质量评价现状及其存在的问题,在借鉴其他学科知识库质量评价策略和维度的基础上,探讨中医知识库质量评价指标,初步形成质量评价框架,为中医知识库评价体系的完... 详细信息

从中医资料类知识库和辅助决策类知识库两个角度,梳理目前中医知识库建设、质量评价现状及其存在的问题,在借鉴其他学科知识库质量评价策略和维度的基础上,探讨中医知识库质量评价指标,初步形成质量评价框架,为中医知识库评价体系的完善提供思路。评价指标中,基础性评价维度包括数据来源、数据整理、数据应用;资料类知识库的特异性评价维度为数据质量,辅助决策类知识库的特异性评价维度为数据匹配。各指标中,数据应用维度中的数据量指标根据库中有效数据条目计数评价,其他指标根据“是”“否”或“未知”定性评价后计分,基础评价得分与特异评价得分相加得到总分,根据分数将知识库分级,结果以等级+数字的形式呈现。

关键词：中医知识库资料类知识库辅助决策类知识库质量评价评价指标质量控制

基于肠道炎症反应研究降糖3号方抗糖尿病的作用机制

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世界中医药 2024年第8期19卷 1085-1091页

作者：赵祎徐冰蕊叶紫梦玮莫芳芳穆倩倩田甜杨晓达高思华赵丹丹北京中医药大学中医学院北京100029 北京中医药大学东直门医院北京100007 北京大学医学部北京100191

目的:观察降糖3号方对2型糖尿病小鼠肠道炎症相关指标的影响,揭示其抗糖尿病的作用机制。方法:选取4周龄C57BL/6N雄性小鼠,高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)注射构建2型糖尿病小鼠模型,采用随机数字表法将成模小鼠分成模型组、二甲双... 详细信息

目的:观察降糖3号方对2型糖尿病小鼠肠道炎症相关指标的影响,揭示其抗糖尿病的作用机制。方法:选取4周龄C57BL/6N雄性小鼠,高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)注射构建2型糖尿病小鼠模型,采用随机数字表法将成模小鼠分成模型组、二甲双胍组、降糖3号方组,每组8只。选取8只标准饲料喂养的小鼠作为正常组。药物干预8周结束后,应用细胞因子抗体芯片技术检测小鼠结肠组织中多种炎症介质水平,并进行差异表达蛋白筛选、基因本体(GO)蛋白功能、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。蛋白质印迹法检测各组小鼠结肠组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活与肠道黏膜屏障相关的因子G蛋白偶联受体43(GPR43)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶(Caspase-1)以及闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的蛋白表达水平。结果:各组间肠道炎症介质差异明显,与模型组比较,降糖3号方组IL-1β、IL-6等炎症介质表达下降,降糖3号方可上调结肠组织中ZO-1、Occludin、GPR43蛋白表达水平,降低ASC、Caspase-1蛋白表达水平(P<0.05)。结论:2型糖尿病小鼠结肠炎症反应明显,降糖3号方能够有效抑制2型糖尿病小鼠肠道炎症,其作用可能与调控NLRP3炎症小体,进而影响下游炎症介质有关。

关键词：糖尿病降糖3号方炎症介质核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体抗体芯片结肠组织作用机制

从获得性脑淀粉样血管病病机探讨“毒损脑络”的新内涵

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北京中医药大学学报 2024年第5期47卷 598-602页

作者：张帆刘佳霖姜俊辰张元馨陈俊龙刘金民北京中医药大学东方医院北京100078 北京中医药大学研究生院北京中医药大学东直门医院

获得性脑淀粉样血管病作为近年来发现的脑血管疾病,其传播途径与医源性因素相关。本文以获得性脑淀粉样血管病为研究对象,深入探讨王永炎院士提出的“毒损脑络”理论在中风病研究中的新应用及其深层含义。从“毒损脑络”的视角出发,综... 详细信息

获得性脑淀粉样血管病作为近年来发现的脑血管疾病,其传播途径与医源性因素相关。本文以获得性脑淀粉样血管病为研究对象,深入探讨王永炎院士提出的“毒损脑络”理论在中风病研究中的新应用及其深层含义。从“毒损脑络”的视角出发,综合分析获得性脑淀粉样血管病的发病原因及其病理机制,强调了外毒、伏毒和浊毒等在本病发病机制中的重要性,揭示了“毒损脑络”为获得性脑淀粉样血管病的核心病机,在此基础上,提出了“毒损脑络”的新内涵:一为“毒”既包括内毒也包括外毒,二为“毒损脑络”新内涵的具体延伸,指导了中风病理论研究、临床治疗、预防策略的完善,也促进对中风病的深层次理解。从“毒损脑络”认识获得性脑淀粉样血管病的方法不仅展现了中医学理论与现代生物医学的有效融合,也为临床诊治本病提供了思路与参考。

关键词：毒损脑络外毒获得性脑淀粉样血管病医源性脑淀粉样血管病脑淀粉样血管病

淫羊藿苷经PI3K/Akt/mTOR通路调控激素对骨微血内皮细胞自噬的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第15期30卷 73-80页

作者：岳峥嵘张悦汤建成张亚奇张琛钟子康李博李铭王卫国北京中医药大学研究生院北京100029 北京大学医学部北京100191 北京协和医学院北京100730 中日友好医院北京100029

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)介导磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路对激素性骨微血管内皮细胞(BMECs)自噬的影响。方法:从人工全髋关节置换术中获得的股骨头分离培养BMECs,并通过免疫荧光染色法... 详细信息

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)介导磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路对激素性骨微血管内皮细胞(BMECs)自噬的影响。方法:从人工全髋关节置换术中获得的股骨头分离培养BMECs,并通过免疫荧光染色法鉴定细胞种类。实验细胞分为空白组、激素组(100 mg·L^(-1)氢化可的松)、ICA组(100 mg·L^(-1)氢化可的松+6.7×10^(-3)mg·L^(-1)ICA)及雷帕霉素组(100 mg·L^(-1)氢化可的松+6.7×10^(-3)mg·L^(-1)ICA+1 mg·L^(-1)雷帕霉素),使用100 mg·L^(-1)的氢化可的松诱导BMECs自噬,运用荧光染色观察不同时间节点下BMECs自噬出现的峰值,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析各组自噬及PI3K/Akt/m TOR通路相关蛋白表达,以电镜观察各组细胞自噬小体及自噬溶酶体的产生。结果:100 mg·L^(-1)氢化可的松可诱导BMECs自噬并在5 h左右出现自噬峰值,但随着干预时间的进一步增加,自噬峰值下降。与空白组比较,激素组细胞膜破坏,细胞器排列紊乱,可见大量自噬小体及自噬溶酶体;与激素组比较,ICA组细胞膜较为完整,细胞器排列较为稀疏,自噬小体数量及自噬溶酶体数量低于激素组;与ICA组比较,雷帕霉素组细胞膜破坏,细胞器排列紊乱,有较多自噬小体及自噬溶酶体。与空白组比较,激素组自噬相关蛋白4B(Atg4B)、人微管相关蛋白/轻链3B(LC3B)、p62表达显著提高(P<0.01);与激素组比较,ICA组LC3B、Atg4B、p62、自噬效应蛋白-1(Beclin-1)表达显著下降(P<0.01);与ICA组比较,雷帕霉素组Atg4B、p62表达显著升高(P<0.01);与空白组比较,激素组磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR表达显著降低(P<0.01);与激素组比较,ICA组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR显著提高(P<0.01);与ICA组比较,雷帕霉素组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR表达显著降低(P<0.01);与空白组比较,激素组泛素化水平显著降低(P<0.01);与激素组比较,ICA组泛素化表达显著提高(P<0.01);与ICA组比较,雷帕霉素组泛素化水平显著下降(P<0.01)。结论:激素所诱导的BMECs自噬具有时间依赖性,ICA对激素诱导的BMECs的自噬具有抑制作用,且该作用可能与调控PI3K/Akt/m TOR通路有关。

关键词： ICA 激素性股骨头坏死骨微血管内皮细胞自噬磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路

双膝骨胶宝通过调节骨生长因子与TGF-β/Smad3通路对大鼠骨折愈合影响研究

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辽宁中医杂志 2024年

作者：武怡平周刚高帅连雅君宋丹萍程发峰王雪茜王庆国北京中医药大学中医学院北京市西城区广外医院骨伤科南京中医药大学中医学院

目的探讨双膝骨胶宝用通过TGF-β/Smad3信号通路对骨折模型大鼠骨折愈合及相关骨生长因子表达的影响。方法将大鼠随机分为对照组、骨折模型组、碳酸钙D3组、双膝骨胶宝低剂量组（6.65g/kg）、双膝骨胶宝中剂量组（13.3g/kg）、双膝骨胶... 详细信息

目的探讨双膝骨胶宝用通过TGF-β/Smad3信号通路对骨折模型大鼠骨折愈合及相关骨生长因子表达的影响。方法将大鼠随机分为对照组、骨折模型组、碳酸钙D3组、双膝骨胶宝低剂量组（6.65g/kg）、双膝骨胶宝中剂量组（13.3g/kg）、双膝骨胶宝高剂量组（26.6g/kg），每组24只。骨折模型组、碳酸钙D3组和双膝骨胶宝各剂量组建立胫骨骨折模型，并用钢针进行髓内固定。骨折模型组、假手术对照组给予等体积生理盐水灌胃，碳酸钙D3组和双膝骨胶宝低中高组予相应药物灌胃，于实验第1、3、5周3个时间点分别取材，HE观察骨折后第1、3、5周骨组织病理变化，番红固绿染色观察骨折后第1、3、5周骨折部位软骨与骨组织表达。ELISA检测第5周血清中血管内皮生长因子（VEGF）、前胶原Ⅰ型前肽（PINP）、Ⅰ型胶原C端肽（CTX-1）含量表达，X线观察大鼠胫骨愈合情况，三点弯曲法检测骨折5周后胫骨骨生物力；WesternBlot法检测骨折胫骨内TGF-β、Smad3蛋白表达。结果与对照组比较，骨折模型组大鼠血清VEGF、PINP表达增加（P生软骨组织；而双膝骨胶宝可刺激新生软骨的生成，加速骨折愈合进程，促进骨质成熟。骨生物力可见，与对照组比较，骨折模型组大鼠胫骨最大载荷与弯曲刚度显著降低（P生长调节因子VEGF表达及TGF-β/Smad3信号通路有关。

关键词：双膝骨胶宝骨折 TGF-β VEGF

基于网络药理学和代谢组学探讨黄芪四妙汤治疗2型糖尿病的作用机制

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中国中药杂志 2024年第15期49卷 4207-4219页

作者：谭丽龙江兰曾志华高慧娟艾菲拉·艾克帕尔张建文王威孟醒林宇涵孙超凡袁宇莲王春潺陈元昊令国兴唐煜冯兴中清华大学玉泉医院(清华大学中西医结合医院) 北京100040 首都医科大学附属北京朝阳医院北京100020 首都医科大学附属北京友谊医院北京100050 右江民族医学院研究生院广西百色531412 北京中医药大学东直门医院北京100700 天津中医药大学中医学院天津301617 清华大学药学技术中心北京100084

为探析黄芪四妙汤(Huangqi Simiao Decoction,HSD)治疗2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的作用机制。通过网络药理学筛选HSD的成分靶点及T2DM相关疾病靶点,构建交集靶点的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络、药物-成分-交集靶点网络... 详细信息

为探析黄芪四妙汤(Huangqi Simiao Decoction,HSD)治疗2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的作用机制。通过网络药理学筛选HSD的成分靶点及T2DM相关疾病靶点,构建交集靶点的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络、药物-成分-交集靶点网络,并筛选出潜在活性成分及靶点;使用AutoDock Vina软件进行分子对接验证潜在成分与核心靶点的相互作用;通过超高效液相色谱-串联质谱代谢组学技术检测血清,采用主成分分析(PCA)及偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)等多元统计分析,结合MetaboAnalyst数据库寻找各组差异代谢物与相关代谢通路,并将筛选的差异代谢物结合网络药理学筛选的交集靶点联合分析相同代谢通路。网络药理学显示,HSD治疗T2DM的9个核心成分为槲皮素、山柰酚、豆甾醇、汉黄芩素、β-谷甾醇、黄藤素、黄连素、黄连碱、小檗红碱;5个核心靶点为AKT1、TP53、TNF、IL6、VEGFA。分子对接显示,核心成分和靶点基因结合较好。代谢组学显示,共鉴定出112个共同差异代谢物,经HSD治疗后,其中88个代谢物浓度上升,24个代谢物下降。富集分析表明,HSD调节T2DM患者机体代谢主要与氨基酸代谢、三羧酸循环等7条代谢通路有关。代谢组学与网络药理学联合分析显示,二者均涉及组氨酸代谢通路、精氨酸和脯氨酸代谢通路。结果表明,HSD对T2DM具有较好的治疗作用,基于代谢组学和网络药理学分析发现其作用机制可能是HSD中槲皮素、山柰酚、豆甾醇等药效基础通过调控多种代谢物,加强对组氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢通路的影响,为进一步防治T2DM提供了依据。

关键词：黄芪四妙汤 2型糖尿病网络药理学分子对接代谢组学

原代大鼠主动脉血管干细胞的体外培养扩增及鉴定

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南方医科大学学报 2024年

作者：马华根黄燕杨盈欣刘海琴唐元瑜丛伟红中国中医科学院西苑医院北京中医药大学中医学院海军军医大学上海长征医院福建中医药大学中医学院

目的采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞，为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法无菌分离2～3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉，切成长约2.0 mm的血管节段，均匀种瓶，经外膜贴壁... 详细信息

目的采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞，为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法无菌分离2～3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉，切成长约2.0 mm的血管节段，均匀种瓶，经外膜贴壁固化后进行原代培养，待细胞生长融合度达80%～90%时传代。镜下观察细胞形态及其生长特性，采用流式细胞仪分析目的细胞表面标志物CD分子表达情况，成脂、成骨诱导分化实验检测其多向分化潜能。结果接种3 d后，少量梭形、星形或多角形的细胞从血管节段周围爬出；5～6 d后形成岛屿状细胞集落，细胞增殖迅速，呈放射状向外扩大，并出现细胞克隆现象；7～8 d后细胞融合成片，呈涡旋状分布；传至第3代后，细胞匀质性较高，表现为典型的“成纤维样”排列生长。流式细胞仪分析细胞主要表达CD44、CD73、CD90，阳性率分别为80.3%、62.2%、46.8%；低表达CD34、CD45、CD11b/c，阳性率分别为1.1%、0.2%、0.2%。体外诱导分化实验表明目的细胞具有成脂、成骨分化潜能。结论 “切段外膜贴壁培养法”可成功分离培养出具有间充质干细胞特性的大鼠主动脉血管干细胞。

关键词：血管干细胞主动脉切段外膜贴壁培养法原代培养免疫表型分化潜能血管重构

450例糖耐量减低患者中医体质分布及相关影响因素

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北京中医药大学学报 2024年第4期47卷 459-465页

作者：李梓荣杨俏丽谢雨刘尚建北京中医药大学研究生院北京100029 中国中医科学院西苑医院北京中医药大学东方医院北京中医药大学东直门医院

目的研究糖耐量减低(IGT)患者的中医体质分布及相关影响因素。方法采用横断面研究方法,收集2021年1月—2021年8月就诊于全国8家协作单位的IGT患者。纳入符合要求的研究对象后记录基本信息,完善体格检查及实验室检查,并依据“中医体质分... 详细信息

目的研究糖耐量减低(IGT)患者的中医体质分布及相关影响因素。方法采用横断面研究方法,收集2021年1月—2021年8月就诊于全国8家协作单位的IGT患者。纳入符合要求的研究对象后记录基本信息,完善体格检查及实验室检查,并依据“中医体质分类与判定表”进行体质资料的收集。最后将患者信息录入Excel表,利用SPSS 26.0统计软件分析数据。结果450例研究对象中,体质分布以平和质(37.3%)、阳虚质(15.6%)、痰湿质(14.4%)和湿热质(10.9%)为主。其中在偏颇体质分布中,男性湿热质占比明显高于女性,女性阳虚质和血瘀质占比明显高于男性(P中医体质分布以平和质、阳虚质、痰湿质和湿热质为主,性别、血脂及尿酸情况是影响IGT患者体质状况的主要因素。

关键词：糖耐量减低糖尿病前期中医体质影响因素治未病