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山羊Aichivirus C的分离鉴定及演化分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：程玉婷阿比克哈莫杨晨张丁中任云鑫岳华汤承西南民族大学畜牧兽医学院西南民族大学畜牧兽医学院

C型爱知病毒（AichivirusC）是新近证实的致山羊腹泻病毒，本研究旨在分离山羊AichivirusC并分析其基因组特征。在四川某暴发腹泻的山羊场采集腹泻粪便9份，1只病死羔羊的组织样本13份，进行常见的腹泻病原检测。采用Vero细胞系对山羊Ai... 详细信息

C型爱知病毒（AichivirusC）是新近证实的致山羊腹泻病毒，本研究旨在分离山羊AichivirusC并分析其基因组特征。在四川某暴发腹泻的山羊场采集腹泻粪便9份，1只病死羔羊的组织样本13份，进行常见的腹泻病原检测。采用Vero细胞系对山羊AichivirusC阳性样本进行病毒分离，以PCR、间接免疫荧光试验和电镜技术对分离毒株进行鉴定，并扩增获得其基因组序列。结果显示：通过RT-PCR方法从9份山羊腹泻粪便样本中检出AichivirusC阳性8份，羔羊的组织样本中检出AichivirusC阳性8份，其它常见的腹泻病原在上述粪便和组织样本中均未检出。使用Vero细胞系成功从阳性样品中分离到2株山羊AichivirusC，其病毒滴度分别为106.5TCID50·mL-1和105.9TCID50·mL-1。获得两条近乎全长基因组序列，与GenBank中山羊源 Aichivirus C毒株的核苷酸相似性为78.8%～97.4%，与国内SWUN/F11/2019 毒株的核苷酸相似性为97.0%～97.4%。此外，本研究还从5份临床阳性样本中扩增出VP0、VP3和VP1基因完整序列。基于基因组的演化分析显示：获得的两个病毒株与SWUN/F11/2019 毒株在系统发育树上聚为一支。并且，这些毒株的VP0和VP1基因编码蛋白也有独特的氨基酸突变。综上所述，本研究分离得到2株山羊Aichivirus C，获得了其近乎全长基因组序列，与国内SWUN/F11/2019 毒株亲缘关系最近，其VP0和VP1基因具有独特的分子特征。本结果丰富了国内山羊源Aichivirus C的分子遗传信息，为进一步研究山羊Aichivirus C的致病性和分子生物学特征提供了参考。

关键词：山羊腹泻 C型爱知病毒分离鉴定分子特征

施马伦贝格病毒实时荧光RT-RAA快检方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年

作者：陈嘉仪黄晓琪王炜杰莫竣喻王苏艳丹珍翁姆陈劲松张瑞周泷李彦敏张志东西南民族大学畜牧兽医学院

旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因，设计特异性引物和探针，通过优化反应条件，建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示，该方法在38℃条件下，8 min内即可特异性检出SBV... 详细信息

旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因，设计特异性引物和探针，通过优化反应条件，建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示，该方法在38℃条件下，8 min内即可特异性检出SBV，与口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、非洲马瘟病毒(AHSV)、塞内卡谷病毒(SVV)、水疱性口炎病毒(VSV)无交叉反应，其敏感性为 103拷贝/反应，且批内和批间重复性变异系数均小于5%。对模拟阳性和阴性绵羊样品的检出率为100%，与SBV 的RT-qPCR检测结果一致。本研究成功建立了一种快速、敏感、特异的SBV实时荧光RT-RAA方法，为SBV防控提供新技术手段。

关键词：施马伦贝格病毒重组酶介导核酸恒温扩增方法快速检测

沉默PREX1表达对CHMp细胞增殖及侵袭性的影响

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3706-3713页

作者：徐禧莹王毅恒区倩婷洪琳媛刘栩靖卢羡盈贾坤华南农业大学兽医学院广州510642

犬乳腺肿瘤是犬常发肿瘤之一,且有50%左右为恶性,其转移倾向明显,易引起动物死亡。Rho-GTPase蛋白家族中的PREX1蛋白,过度激活会导致Rac-GEF功能紊乱,影响细胞周期,改变细胞生理功能,PREX1的改变可能对细胞癌变有促进作用。为探讨PREX1... 详细信息

犬乳腺肿瘤是犬常发肿瘤之一,且有50%左右为恶性,其转移倾向明显,易引起动物死亡。Rho-GTPase蛋白家族中的PREX1蛋白,过度激活会导致Rac-GEF功能紊乱,影响细胞周期,改变细胞生理功能,PREX1的改变可能对细胞癌变有促进作用。为探讨PREX1对犬乳腺肿瘤细胞生理功能的影响,本研究使用shRNA沉默PREX1表达,利用Western blot试验检测沉默后细胞PREX1蛋白表达量的变化,通过CCK-8试验、克隆形成试验探究其对犬乳腺肿瘤细胞系CHMp增殖能力的影响,通过划痕试验和Transwell试验探索沉默其对犬乳腺肿瘤细胞系CHMp侵袭性的影响。研究结果表明,PREX1的低表达,可以抑制CHMp的增殖及侵袭能力。

关键词：犬乳腺肿瘤 CHMp细胞增殖迁移侵袭

一株铜绿假单胞菌噬菌体全基因组分析及与抗生素体外联合应用效果

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 727-738页

作者：王晋宇张凯川王芮杰高铎蒋祺丰贾坤华南农业大学兽医学院广州510642

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分... 详细信息

旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分离到一株铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB,TEM显示病毒颗粒具有一个平均直径为73.02 nm的二十面体头部和一个平均长度为155.57 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,具有双链DNA基因组,宿主谱较窄,耐低温(-20℃)并且在37℃达到最适温度,有良好的酸碱耐受性,在pH为3~12时保持活性,最佳MOI为0.001,一步生长曲线显示潜伏期为10 min,爆发量为50 PFU·cell^(-1),吸附性试验表明PaVOB在10 min的吸附率为99.1%。PaVOB基因组全长为72179 bp,(G+C)%含量为54.81%,与VB PaeP FBPa1亲缘关系小于0.1,ORF预测显示,PaVOB包括74个ORF,软件预测均未发现毒力基因、耐药基因和tRNA存在。此外,抗生素联合应用结果显示,PaVOB与头孢曲松联合应用有协同作用,在效价为107 PFU·mL^(-1)时与恩诺沙星产生协同作用,与庆大霉素产生无关作用。铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB对环境适应能力强,且基因组信息清晰,能够选择性地与不同抗生素联合应用发挥协同作用,具有治疗临床耐药铜绿假单胞菌感染的可能性。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体生物学特性基因组学抗生素联合应用

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新城疫病毒F蛋白和禽致病性大肠杆菌OmpA嵌合蛋白的表达及双特异性抗体制备

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黑龙江畜牧兽医 2024年第1期 103-108页

作者：袁橙王永娟郭梦娇刘思琪周雨豪江苏农牧科技职业学院动物医学院江苏泰州225300 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

为获得Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)融合蛋白(fusion protein,F蛋白)和O18型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)外膜基因A(outer-membrane proteases,OmpA)嵌合蛋白和双特异性抗体,试验首先采用基因合成技术获得Ⅶ型NDV F基因和O18型APEC的OmpA基因片段,使用同源重组技术将F基因插入到OmpA基因中,再将重组基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中构建嵌合表达质粒,对重组质粒中的插入基因序列进行测序鉴定;将序列正确的嵌合表达质粒转入大肠杆菌BL21(Rosetta)感受态细胞中,利用IPTG诱导嵌合蛋白表达,使用SDS-PAGE和Western-blot检验嵌合蛋白的表达情况;纯化嵌合蛋白后免疫兔获得抗血清,抗血清再经抗原亲和纯化层析柱纯化获得多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定抗体效价。结果表明:成功合成了Fo和OmpA1、OmpA2基因片段,构建并表达了重组质粒pGEX-O1-Fo-O2,纯化后的嵌合蛋白O1FoO2在大肠杆菌中以包涵体形式存在,制备的多克隆抗体对O1FoO2的效价约为1.1×10^(6),对GST的效价约为4.1×10^(4)。说明制备的嵌合蛋白和双特异性抗体质量较好。

关键词：新城疫病毒F蛋白大肠杆菌OmpA蛋白嵌合蛋白原核表达多克隆抗体

猫泛白细胞减少症病毒A91S变异株对猫的致病性及基因组特征研究

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2560-2568页

作者：周宁汤承许佳岳华陈曦西南民族大学畜牧兽医学院成都610041

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus, FPV)是一种对猫危害严重的病原。近年来,一种VP2 91位氨基酸残基由A突变为S的FPV变异株(FPV A91S变异株)已经在国内广泛流行,但目前还未见该变异株对猫致病性的报道,本试验旨在探究FP... 详细信息

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus, FPV)是一种对猫危害严重的病原。近年来,一种VP2 91位氨基酸残基由A突变为S的FPV变异株(FPV A91S变异株)已经在国内广泛流行,但目前还未见该变异株对猫致病性的报道,本试验旨在探究FPV A91S变异株对猫的感染特性及其分子特征。利用F81细胞分离FPV A91S变异株,并研究其血凝特性、对猫的致病性及其基因组特征。成功分离到一株FPV A91S变异株,纯化后病毒滴度为10~(4.6 )TCID_(50)·mL^(-1);该毒株能在pH 6.0~6.5、4和37℃条件下有效凝集猪红细胞;分离株经口服成功感染幼猫,引起呕吐、腹泻、白细胞急剧降低、眼睑脓性分泌物等症状,并在5 d内导致猫死亡;大体和组织病理变化发现严重的肠道和肺出血。获得该毒株近乎全长的基因组序列,其VP2蛋白的关键位点氨基酸符合典型FPV特征。除了VP2 A91S的突变外,其NS1蛋白也有3个独特的氨基酸突变(D23N、I443V和H596Q),这些特征导致FPV A91S毒株在进化树中单独聚为一支,具有独特的遗传进化趋势。本研究首次探究了FPV A91S变异株的血凝性和对猫的致病性,为进一步了解FPV的生物学特性和遗传变异提供参考。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒 FPV VP2 A91 S变异体血凝性致病性遗传进化

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桑杜口服液对环磷酰胺致鸡免疫抑制的调节作用

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中国家禽 2024年第8期46卷 31-36页

作者：杨海峰崔怡李艳艳陈晓兰邱树磊李金贵江苏农牧科技职业学院江苏泰州225300 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

为研究桑杜口服液对鸡免疫抑制的调节作用,试验采用环磷酰胺(40 mg/kg)建立鸡免疫抑制模型,并给予鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)免疫和不同剂量桑杜口服液(分别为4.8 g/kg、9.6 g/kg和19.2 g/kg)处理,由此将120只13日龄雏鸡随机均分为6... 详细信息

为研究桑杜口服液对鸡免疫抑制的调节作用,试验采用环磷酰胺(40 mg/kg)建立鸡免疫抑制模型,并给予鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)免疫和不同剂量桑杜口服液(分别为4.8 g/kg、9.6 g/kg和19.2 g/kg)处理,由此将120只13日龄雏鸡随机均分为6组,通过抗体水平检测、组织切片和RT-qPCR等技术评估不同剂量桑杜口服液对环磷酰胺诱导免疫抑制的调节作用。结果显示:9.6 g/kg和19.2 g/kg桑杜口服液预处理可有效缓解环磷酰胺造成的B87疫苗抗体生成减少、法氏囊指数下降和法氏囊滤泡损伤现象。此外,在鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)免疫的基础上,环磷酰胺处理显著降低白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)和γ-干扰素(IFN-γ)mRNA表达量(P0.05),而9.6 g/kg桑杜口服液处理显著降低IL-2 mRNA表达量(P<0.05),19.2 g/kg桑杜口服液可显著升高IFN-γ mRNA表达量(P<0.05)。此外,9.6 g/kg和19.2 g/kg桑杜口服液可显著拮抗环磷酰胺对IL-4和IL-10的抑制作用(P<0.05)。研究表明,19.2 g/kg桑杜口服液可以缓解环磷酰胺造成的鸡的免疫抑制。

关键词：桑杜口服液免疫抑制免疫调节鸡

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山羊Aichivirus C的分离鉴定及演化分析

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3612-3622页

作者：程玉婷阿比克哈莫杨晨张丁中任云鑫岳华汤承西南民族大学畜牧兽医学院成都610041

C型爱知病毒(Aichivirus C)是新近证实的致山羊腹泻病毒,本研究旨在分离山羊Aichivirus C并分析其基因组特征。在四川某暴发腹泻的山羊场采集腹泻粪便9份,1只病死羔羊的组织样本13份,进行常见的腹泻病原检测。采用Vero细胞系对山羊Aichi... 详细信息

C型爱知病毒(Aichivirus C)是新近证实的致山羊腹泻病毒,本研究旨在分离山羊Aichivirus C并分析其基因组特征。在四川某暴发腹泻的山羊场采集腹泻粪便9份,1只病死羔羊的组织样本13份,进行常见的腹泻病原检测。采用Vero细胞系对山羊Aichivirus C阳性样本进行病毒分离,以PCR、间接免疫荧光试验和电镜技术对分离毒株进行鉴定,并扩增获得其基因组序列。结果显示:通过RT-PCR方法从9份山羊腹泻粪便样本中检出Aichivirus C阳性8份,羔羊的组织样本中检出Aichivirus C阳性8份,其它常见的致山羊腹泻病原在上述粪便和组织样本中均未检出。使用Vero细胞系成功从阳性样品中分离到2株山羊Aichivirus C,其病毒滴度分别为10^(6.5)TCID_(50)·mL^(-1)和10^(5.9)TCID 50·mL^(-1)。获得两条近乎全长基因组序列,与GenBank中山羊源Aichivirus C毒株的核苷酸相似性为78.8%~97.4%,与国内SWUN/F11/2019毒株的核苷酸相似性为97.0%~97.4%。此外,本研究还从5份临床阳性样本中扩增出VP0、VP 3和VP 1基因完整序列。基于基因组的演化分析显示:获得的两个病毒株与SWUN/F11/2019毒株在系统发育树上聚为一支。并且,这些毒株的VP 0和VP 1基因编码蛋白也有独特的氨基酸突变。综上所述,本研究分离得到2株山羊Aichivirus C,获得了其近乎全长基因组序列,与国内SWUN/F11/2019毒株亲缘关系最近,其VP 0和VP 1基因具有独特的分子特征。本结果丰富了国内山羊源Aichivirus C的分子遗传信息,为进一步研究山羊Aichivirus C的致病性和分子生物学特征提供了参考。

关键词：山羊腹泻 C型爱知病毒分离鉴定分子特征

20~35kg川中黑山羊公羊能量需要量研究

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动物营养学报 2024年第1期36卷 428-437页

作者：吴璇杨尚霖罗巧慧黄太华张正帆史海涛郭春华西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 阿坝职业学院阿坝623200

本试验旨在研究20~35 kg川中黑山羊公羊的能量需要量,为川中黑山羊的科学饲养提供营养需要参数。采用比较屠宰试验法,选择2.5月龄、体重(19.97±5.47)kg的健康断奶川中黑山羊去势公羔22只,试验开始时屠宰4只,其余18只羔羊分为3个饲喂水... 详细信息

本试验旨在研究20~35 kg川中黑山羊公羊的能量需要量,为川中黑山羊的科学饲养提供营养需要参数。采用比较屠宰试验法,选择2.5月龄、体重(19.97±5.47)kg的健康断奶川中黑山羊去势公羔22只,试验开始时屠宰4只,其余18只羔羊分为3个饲喂水平组(每组6只羊):自由采食组(AL组)、75%自由采食组(AL75组)、60%自由采食组(AL60组)。试验羊单笼单饲,试验期96 d。在饲养试验结束前4 d开展消化代谢试验,收集全粪全尿。当AL组试验羊平均体重达到35 kg时结束饲养试验,每组选取接近该组平均体重的4只羊(共12只)进行屠宰,屠体冷冻保存待测。结果表明:1)20~35 kg生长川中黑山羊维持净能需要量(NE m)为178.24 kJ/(kg BW 0.75·d),维持代谢能需要量(ME m)为263.74 kJ/(kg BW 0.75·d),代谢能维持利用效率(k m)为0.68。2)日增重100~300 g/d的川中黑山羊的生长净能需要量(NE g)为0.99~3.71 MJ/d,生长代谢能需要量(ME g)为3.15~11.78 MJ/d,代谢能生长利用效率(kg)为0.31。本研究可为我国地方品种肉羊饲养标准的健全提供数据参考。

关键词：川中黑山羊代谢能净能能量需要量