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陆地棉耐盐相关基因GhSAMS的克隆及表达

2017年全国养羊生产与学术研讨会暨养羊学分会第七次全国会员代表大会

作者：张帆崔凯屠焰张乃锋刁其玉中国农业科学院饲料研究所农业部饲料生物技术重点实验室

前言妊娠后期是胎儿在母体内发育的关键时期,随胎儿发育增快,母羊营养需要量增加,当母羊的饲粮营养水平发生改变,可能影响母羊的健康。生产中通过对反刍动物多喂精料,少喂饲草来提高营养水平;或少喂精料多喂饲草以降低营养水平是较为常... 详细信息

前言妊娠后期是胎儿在母体内发育的关键时期,随胎儿发育增快,母羊营养需要量增加,当母羊的饲粮营养水平发生改变,可能影响母羊的健康。生产中通过对反刍动物多喂精料,少喂饲草来提高营养水平;或少喂精料多喂饲草以降低营养水平是较为常用的方法。因此,研究通过改变精料饲喂水平调控妊娠后期母羊营养的影响具有重要意义。本试验采用相同的精料补充料和饲草,以不同比例饲喂妊娠后期母羊,旨在研究其对妊娠后期母羊生长、消化和

关键词：母羊精料饲喂水平生长性能养分消化率血清生化指标

来源： cnki会议评论

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作物学报 2011年第6期37卷 1012-1019页

作者：周凯宋丽艳叶武威王俊娟王德龙樊保香中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室/农业部棉花遗传改良重点实验室河南安阳455000

为了挖掘棉花耐盐相关基因,根据陆地棉耐盐性抑制消减文库中的一个S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的同源EST设计引物,利用RACE结合RT-PCR技术克隆陆地棉S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的cDNA全长,命名为GhSAMS。该cDNA全长1576bp,ORF为1182bp,编码... 详细信息

为了挖掘棉花耐盐相关基因,根据陆地棉耐盐性抑制消减文库中的一个S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的同源EST设计引物,利用RACE结合RT-PCR技术克隆陆地棉S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的cDNA全长,命名为GhSAMS。该cDNA全长1576bp,ORF为1182bp,编码393个氨基酸的多肽。生物信息学分析表明GhSAMS蛋白与拟南芥、盐地碱蓬、水稻中该蛋白的相似性分别为91%、93%和93%。系统发育树结果显示GhSAMS与盐地碱蓬中该蛋白的亲缘关系最近。Real-time PCR分析结果表明,GhSAMS的表达受盐胁迫诱导,在盐敏感材料中诱导被推迟,而且,该基因表达水平在耐盐材料中9835中明显高于在盐敏感材料中S9612中。构建了原核表达载体pET28-GhSAMS,经IPTG诱导,实现了GhSAMS在大肠杆菌中的表达,为进一步开展GhSAMS的遗传转化工作奠定了有益基础。

关键词：陆地棉盐胁迫 S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因原核表达

重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价

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中国预防兽医学报 2009年第3期31卷 217-222页

作者：刘春国刘明万春和陈浩李洪涛孙恩成杜金玲刘大飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室/国家禽流感参考实验室/OIE禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

为评价佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以反向遗传学技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTM ISA 70MVG(简称70M)和MontanideTM ISA 206 VG(简称206)3种佐剂制备的灭活疫苗进行了SPF鸡... 详细信息

为评价佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以反向遗传学技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTM ISA 70MVG(简称70M)和MontanideTM ISA 206 VG(简称206)3种佐剂制备的灭活疫苗进行了SPF鸡免疫攻毒试验。结果表明国产矿物油佐剂组与70M佐剂组都能对SPF鸡100%保护,206佐剂组仅能保护40%,攻毒的SPF鸡发病,但不死亡;从抗体水平上比较发现70M佐剂组稍好于国产矿物油佐剂组,但两组之间差异不显著,而这两组与206佐剂组差异极显著。这3种佐剂组免疫鸭均能够诱导产生较高的抗体水平,70M佐剂组优于国产矿物油佐剂组和206佐剂组,但3者差异不显著。用70M系的8种佐剂MontanideTM ISA 70 essai Mi(i=1-8)(简称70Mi)佐剂乳化的疫苗免疫SPF鸡,结果表明70M佐剂组效果最好,攻毒后免疫鸡不排毒,而且无临床症状;统计学分析显示70M佐剂组与所有70Mi佐剂组差异均显著。这些结果表明70M佐剂可以作为新型疫苗佐剂用于禽流感疫苗的制备。

关键词：禽流感 H5N1亚型细胞苗佐剂

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一株猪流行性腹泻病毒强毒株的分离与鉴定

畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3049-3063页

作者：刘维哲罗成刚袁蓉廖艺杰文艺悯孙莹俞恩波曹三杰黄小波四川农业大学动物医学院猪病研究中心成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站成都611130 成都市畜禽遗传资源保护中心成都610081

为了掌握猪流行性腹泻病毒(PEDV)最新流行毒株的病原特征与致病性,开展了PEDV的分离与鉴定。将PEDV阳性病料样品接种Vero细胞连续盲传,分离PEDV流行毒株,并开展了分离毒株的培养特性、全基因组序列分析和仔猪致病性评价。结果显示:传至... 详细信息

为了掌握猪流行性腹泻病毒(PEDV)最新流行毒株的病原特征与致病性,开展了PEDV的分离与鉴定。将PEDV阳性病料样品接种Vero细胞连续盲传,分离PEDV流行毒株,并开展了分离毒株的培养特性、全基因组序列分析和仔猪致病性评价。结果显示:传至第3代(P3)分离出一株病毒,病毒在细胞上形成典型的“合胞体”样病变;电镜下病毒大小60~110 nm;P10到P35代滴度从10^(4.7)TCID_(50)·mL^(-1)升至10^(6.43)TCID_(50)·mL^(-1);CHN-SC2021(P5)基因组全长28014 bp(GenBank收录号:OM505025.1),与中国地区、欧美地区、亚洲其他国家毒株的相似性分别为99.16%~96.32%、99.01%~96.57%、98.94%~96.33%;系统进化树显示CHN-SC2021株与江西CH/JXJA/2017(MF375374.1)、河南CH/HNAY/2015(KT199103.1)、CH/HNKF-16(KY649107.1)毒株亲缘关系较近,属于GⅡa型毒株。S基因序列与参考毒株相似度在98.7%~93.4%。将CHN-SC2021病毒液以每头3 mL 10~5 TCID_(50)·mL^(-1)的剂量口服感染6日龄哺乳仔猪,12 h开始出现食欲不振,20 h时呕吐,24 h出现剧烈呕吐和黄色水样腹泻;剖检病变主要是胃肠臌气、空肠和回肠透明;组织病变显示各肠段均有不同程度的肠绒毛病变、脱落、结缔组织疏松、黏膜肌层与肌层间距增宽等;免疫组化结果显示小肠各段均有病毒,回肠中病毒最多。本研究分离获得一株GⅡa型的PEDV强毒株,有助于丰富我国PEDV的流行毒株信息及为临床防控提供参考。

关键词：猪流行性腹泻病毒分离鉴定序列分析哺乳仔猪致病性

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瘤胃细菌脲酶抑制剂瑞香素的筛选与效果评价

动物营养学报 2021年第9期33卷 5256-5265页

作者：贺越赵圣国张晓音郑楠王加启中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室(北京)北京100193

本试验旨在获得植物来源的脲酶抑制剂并探究其对瘤胃细菌脲酶抑制的基本特征。首先试验以奶牛瘤胃脲酶为靶标,利用分子对接虚拟筛选植物源化合物库,结合瘤胃细菌脲酶活性抑制试验,探究抑制效果最好的化合物对瘤胃细菌脲酶的半抑制浓度(I... 详细信息

本试验旨在获得植物来源的脲酶抑制剂并探究其对瘤胃细菌脲酶抑制的基本特征。首先试验以奶牛瘤胃脲酶为靶标,利用分子对接虚拟筛选植物源化合物库,结合瘤胃细菌脲酶活性抑制试验,探究抑制效果最好的化合物对瘤胃细菌脲酶的半抑制浓度(IC_(50))值、酶动力学特征以及作用位点,最后通过瘤胃微生物体外厌氧培养试验评价该化合物对尿素分解的影响。结果表明:1)在同浓度条件下,瑞香素对瘤胃细菌脲酶的抑制效果最好。2)瑞香素对瘤胃细菌脲酶的IC_(50)值为(93.43±3.87)μmol/L,是瘤胃细菌脲酶的混合型抑制剂。3)硫醇试剂存在时,瑞香素对瘤胃细菌脲酶的抑制效果显著降低(P生物体外厌氧培养2、4、6 h后体系中尿素的分解(P所述,瑞香素能通过与瘤胃细菌脲酶活性中心的氨基酸相互作用来抑制脲酶的活性,减缓尿素的分解。

关键词：瘤胃细菌脲酶脲酶抑制剂天然化合物瑞香素

禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定

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病毒学报 2011年第4期27卷 353-357页

作者：孙美玉秦立廷高玉龙祁小乐高宏雷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞... 详细信息

本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞,使σC基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidσC。通过脂质体介导将其转染到sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rBacσC。通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:σC蛋白在重组杆状病毒rBacσC感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达,分子质量约为37kD,表达的σC蛋白具有良好的反应活性。

关键词：禽呼肠孤病毒 σC基因 sf9细胞杆状病毒

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植物健康概念的商榷

植物保护 2017年第5期43卷 1-10页

作者：刘永强张昊王忠跃刘崇怀中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009

植物健康是经常在植物科学尤其是植物保护领域被使用的术语,但迄今仍然没有一个明确并普遍被认可的概念。通过梳理和总结不同哲学思想下植物健康概念的探讨和争论,试图在分析现有成果的基础上,获得植物健康概念的科学内涵,同时结合中国... 详细信息

植物健康是经常在植物科学尤其是植物保护领域被使用的术语,但迄今仍然没有一个明确并普遍被认可的概念。通过梳理和总结不同哲学思想下植物健康概念的探讨和争论,试图在分析现有成果的基础上,获得植物健康概念的科学内涵,同时结合中国哲学观念提出了"特定遗传基质的植物(种或品种或生物型等)生长在适宜的环境中(土壤、水分和气候),没有受到其他生物和非生物(环境)因子侵扰和伤害,各种生理功能平和或平衡的自然状态,植物的这种状态就是植物健康"的概念,明确了植物健康的动态性质及阐述了植物健康下的植物种群健康,并对依据这个概念从事农林生产进行了剖析,供大家商榷。

关键词：植物健康概念中国哲学观念

不同冻结温度下牛肉的肌原纤维蛋白变性与肌肉持水性

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食品科学 2018年第15期39卷 24-30页

作者：钱书意李侠孙圳尚柯关文强张春晖天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室天津300134 中国农业科学院农产品加工研究所农业部农产品加工综合性重点实验室北京100193

为明确冷冻温度对牛肉肌原纤维蛋白变性和肌肉持水性(water-holding capacity,WHC)的影响、探讨肌原纤维蛋白变性与WHC的相关性。以牛背最长肌作实验材料,探究-9、-18、-23、-38℃下冻结后肌原纤维蛋白理化特性和牛肉WHC。通过测定巯基... 详细信息

为明确冷冻温度对牛肉肌原纤维蛋白变性和肌肉持水性(water-holding capacity,WHC)的影响、探讨肌原纤维蛋白变性与WHC的相关性。以牛背最长肌作实验材料,探究-9、-18、-23、-38℃下冻结后肌原纤维蛋白理化特性和牛肉WHC。通过测定巯基含量、蛋白质溶解度、Ca2+-三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase,ATPase)活力及蛋白质热稳定性考察牛肉冻结后肌原纤维蛋白变性情况,利用解冻汁液流失与加压失水率指标衡量牛肉WHC,采用低场核磁共振(low field-nuclear magnetic resonance,LF-NMR)波谱和磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)技术对比分析了肌肉水分分布情况,并于4℃解冻后测定了色差与剪切力。结果表明:-23℃与-38℃下冻结试样较-9℃与-18℃肌原纤维蛋白变性程度小:-23℃与-38℃下冻结试样蛋白质溶解度、Ca^(2+)-ATPase活力、巯基含量和总变性焓相比-9℃与-18℃实验组较高(P实验结果。肌原纤维蛋白理化特性(蛋白质溶解度、Ca^(2+)-ATPase活力、巯基含量、总变性焓)与WHC(解冻汁液流失率、加压失水率)均呈极显著相关(P<0.01),L~*、b~*值及剪切力亦与WHC存在极显著相关(P<0.01)。相关性分析结果验证了牛肉冻结过程中肌原纤维蛋白变性对肌肉持水性存在显著影响,进而导致牛肉解冻后出现肉色劣变、嫩度下降及汁液流失。

关键词：冻结温度牛肉肌原纤维蛋白变性持水性

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外来入侵杂草黄顶菊与棉花的竞争作用

棉花学报 2012年第3期24卷 272-278页

作者：彭军马艳李香菊马小艳奚建平马亚杰李希风中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室河南安阳455000 中国农业科学院植物保护研究所北京100193

研究了外来入侵杂草黄顶菊不同密度、不同共生期对棉花生长的影响,结果表明当黄顶菊密度达0.5株.m-1行长以上时,棉花现蕾期明显推迟,茎秆变细、果枝数、蕾铃数等产量因子显著降低,但株高、4 m行长棉株数和纤维品质未受明显影响;黄顶菊... 详细信息

研究了外来入侵杂草黄顶菊不同密度、不同共生期对棉花生长的影响,结果表明当黄顶菊密度达0.5株.m-1行长以上时,棉花现蕾期明显推迟,茎秆变细、果枝数、蕾铃数等产量因子显著降低,但株高、4 m行长棉株数和纤维品质未受明显影响;黄顶菊与棉花共生期达4周以上,棉花主茎直径明显下降,共生期达8周以上棉花产量显著降低。由此得出,黄顶菊对棉花具有较强的入侵性和竞争性,应在密度低于0.5株.m-1行长、共生期达8周前进行防除,初步确定其棉田防除经济阈值为0.25株.m-1行长。

关键词：黄顶菊棉花竞争作用经济阈值