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鸭瘟病毒疫苗株UL44.5和UL44基因间隔区作为复制非必需区的鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第8期41卷 795-799页

作者：赵玉博陈普成胡玉珍丁蕾蕾王波焦晨晨姜永萍陈化兰柳金雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中适合外源基因插入的复制非必需区,本研究利用本实验室前期建立的DEV疫苗株多片段拯救系统,结合E/T克隆技术、LR克隆技术将含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的目的片段,定向插入到含DEV基因组复制非必需区的粘... 详细信息

为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中适合外源基因插入的复制非必需区,本研究利用本实验室前期建立的DEV疫苗株多片段拯救系统,结合E/T克隆技术、LR克隆技术将含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的目的片段,定向插入到含DEV基因组复制非必需区的粘粒中,该位点位于DEV基因组UL区的UL44.5和UL44之间,拯救获得了重组病毒(rDEV)。通过PCR和荧光显微镜鉴定该重组病毒。结果显示,经PCR扩增,r DEV可以扩增到预期目的片段,观察可见红色荧光,表明RFP基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果显示,重组病毒在CEF中的增殖效率与DEV疫苗株无显著差异。将r DEV以105 TCID50的剂量免疫SPF鸭后,DEV攻毒保护试验结果显示,r DEV和亲本株DEV活疫苗对SPF鸭的保护效率均为100%。本研究筛选到DEV基因组中的一个可供外源基因插入的位点,为以DEV为载体构建相关重组疫苗研制提供依据。

关键词：重组鸭瘟病毒复制非必需区 DEV拯救系统

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棉花CML基因家族成员鉴定与功能分析

棉花学报 2019年第4期31卷 307-318页

作者：杨秀许艳超杨芳芳蔡小彦侯宇清王玉红王星星王坤波刘方周忠丽棉花生物学国家重点实验室/中国农业科学院棉花研究所

【目的】类钙调素(Calmodulin-like,CML)蛋白是1种重要的Ca2+传感器,在调节植物应激反应机制中起重要作用。对CML基因家族进行全基因组学分析,以便深入研究CML基因在棉花逆境胁迫下的作用。【方法】利用生物信息学的方法进行了棉花CML... 详细信息

【目的】类钙调素(Calmodulin-like,CML)蛋白是1种重要的Ca2+传感器,在调节植物应激反应机制中起重要作用。对CML基因家族进行全基因组学分析,以便深入研究CML基因在棉花逆境胁迫下的作用。【方法】利用生物信息学的方法进行了棉花CML家族成员的鉴定。利用转录组数据和反转录聚合酶链式反应分析陆地棉(Gossypium hirsutum L.)CML基因在盐胁迫下的表达模式。利用病毒诱导基因沉默技术对GhCML44-2基因进行沉默并进行功能验证。【结果】在陆地棉(Gossypium hirsutum L.)、雷蒙德氏棉(G. raimondii Ulbrich)、亚洲棉(G. arboreum L.)中分别获得了154个、74个、78个CML蛋白。进化树和保守基序分析表明,GhCML蛋白分为8个亚类,都含有保守的EF-hand结构域;在盐胁迫下,107个GhCML基因在叶和根中有显著的差异表达,且在根和叶中的差异表达模式不同。启动子分析表明,这些基因启动子中存在多种不同的胁迫响应元件;利用病毒诱导基因沉默技术成功沉默GhCML44-2的棉株相较于对照更加不耐盐。【结论】该研究结果有助于了解棉花CML基因家族的进化与功能,为后续研究其功能提供了一定的理论依据。

关键词：棉花类钙调素蛋白盐胁迫病毒诱导基因沉默基因功能

携带FMDV前导蛋白基因逆转录病毒载体的构建及其在牛肾细胞中的表达

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生物工程学报 2008年第5期24卷 740-745页

作者：丛国正周建华高闪电独军政邵军军林彤常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

以口蹄疫病毒株OA/58RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA。通过分子克隆技术将前导蛋白编码序列Lab与逆转录病毒载体pBPSTR1连接,将构建正确的重组载体命名为pBPSTR1-Lab。通过分别利用不同浓度的嘌呤霉素和四环素来确定最佳筛选浓度和最... 详细信息

以口蹄疫病毒株OA/58RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA。通过分子克隆技术将前导蛋白编码序列Lab与逆转录病毒载体pBPSTR1连接,将构建正确的重组载体命名为pBPSTR1-Lab。通过分别利用不同浓度的嘌呤霉素和四环素来确定最佳筛选浓度和最佳调控浓度,结果显示嘌呤霉素的最佳筛选浓度为3μg/mL,四环素的最佳调控浓度为1μg/mL。利用pBPSTR1-Lab和包装质粒pVSV-G双质粒瞬时转染Gp2-293包装细胞来获得重组逆转录病毒。利用重组逆转录病毒来感染牛肾细胞,并连续筛选12天来获得阳性克隆。通过除去四环素来诱导目的基因在牛肾细胞中表达,发现牛肾细胞病变死亡。经过PCR和蛋白质免疫印迹证实稳定表达前导蛋白的牛肾细胞系已经建立,为今后研究前导蛋白致病机理提供了平台。

关键词：口蹄疫病毒前导蛋白嘌呤霉素四环素逆转录病毒载体

两株H9N2亚型禽流感病毒的基因组序列分析及其对小鼠的致病性研究

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中国预防兽医学报 2020年第11期42卷 1089-1094页

作者：侯玉杰尹馨房敬真邓国华崔鹏飞王冬雪施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2019年自青海省活禽市场家禽拭子和青海湖野鸟粪便中各分离到的一株H9N2亚型AIV,CK/QH/S1182/2019株和WB/QH/S1355/2019,并进行了病毒基因组序列测定、遗传演化分析和BALB/c小鼠致... 详细信息

为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2019年自青海省活禽市场家禽拭子和青海湖野鸟粪便中各分离到的一株H9N2亚型AIV,CK/QH/S1182/2019株和WB/QH/S1355/2019,并进行了病毒基因组序列测定、遗传演化分析和BALB/c小鼠致病性试验。HA序列分析显示,两株病毒的HA裂解位点均为333PSRSSR↓GLF341,不存在多个连续碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒(LPAIV)分子特征。遗传演化分析结果显示,两株病毒的HA、NA基因均属欧亚分支。除WB/QH/S1355/2019株的M基因与A/chicken/Zhejiang/S1074/2016(H7N9)AIV株的M基因高度同源外,分离的两株病毒的其余基因节段均来源于H9N2亚型AIV。分离的两株H9N2 AIV的NA、PB1及NP基因亲缘关系较近,核苷酸同源性高达99%~100%,提示野鸟携带的H9N2亚型AIV与家禽来源的H9N2 AIV株可能存在基因重组的可能性。小鼠感染性试验结果显示,两株病毒均可在小鼠的鼻甲和肺中有效复制,但在小鼠的脑、脾脏和肾脏中均未检测到病毒,且在观察期内小鼠体质量均无明显变化,也未出现明显的临床症状,表明两株H9N2亚型AIV均对小鼠呈现低致病力。本研究对H9N2亚型AIV感染哺乳动物的风险评估提供了一定的数据支持,对该亚型AI的综合防控具有指导意义。

关键词：禽流感病毒 H9N2 进化分析致病力野鸟

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猪T细胞受体β链的基因结构及其多样性分析

畜牧兽医学报 2014年第11期45卷 1874-1882页

作者：曾爽李玩生房永祥冯海燕陈国华何小兵贾怀杰景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室兰州730046

设计猪TCRβ链基因的一对特异性引物,用RT-PCR法从合作小型猪外周血、淋巴结和脾淋巴细胞中高通量克隆和鉴定了82个猪TCRβ基因(简称STB)。测序分析表明,克隆的猪TCRβ链的基因都含有可变的信号肽区和V区、高变的D区和J区以及恒定的C区... 详细信息

设计猪TCRβ链基因的一对特异性引物,用RT-PCR法从合作小型猪外周血、淋巴结和脾淋巴细胞中高通量克隆和鉴定了82个猪TCRβ基因(简称STB)。测序分析表明,克隆的猪TCRβ链的基因都含有可变的信号肽区和V区、高变的D区和J区以及恒定的C区的基因片段,绝大部分基因间的核苷酸序列组成都不完全相同,且具有十分复杂的多态性和多样性,基因间的相似性在36.6%~99.9%,这与TCRβ链的基本基因结构特征相一致。猪TCRβ基因的分子结构、遗传演化关系和归类分析发现,在同一类基因分子中其信号肽区、FR1区和CDR1区、FR2区和CDR2区以及FR3区之间的差异主要由V基因片段的多态性引起,而CDR3区的差异主要由其D、J基因片段的多样性造成。同时发现猪TCRβ与人类的遗传演化关系较近,大部分基因序列都能找到与人类对应的TRBV、TRBD、TRBJ基因片段,但又存在一定的差异性。这表明,猪TCRβ基因既有应对外界复杂微生物环境的免疫多样性分子遗传基础,也有物种间的相似性与特异性。

关键词：合作小型猪 TCRβ基因生物信息学多样性

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梧州六堡茶出口历史、现状及发展建议

中国茶叶 2024年第7期46卷 62-69页

作者：林少烽邱瑞瑾吴平韦云飞陈耀进黄少莲邱北连龙志荣梧州市茶产业发展服务中心广西梧州543003 梧州市农业科学研究所广西梧州543003 广西六堡茶生物学与资源利用重点实验室广西梧州543003 中华人民共和国梧州海关广西梧州543000

六堡茶是历史上著名的“侨销茶”,经“茶船古道”畅销东南亚。近年来,梧州市不断拓展六堡茶海外市场,六堡茶出口均价长期高于全国茶叶出口均价,但也存在着出口市场单一,出口企业数量少,出口量持续下降等问题。文章概述了六堡茶出口的历... 详细信息

六堡茶是历史上著名的“侨销茶”,经“茶船古道”畅销东南亚。近年来,梧州市不断拓展六堡茶海外市场,六堡茶出口均价长期高于全国茶叶出口均价,但也存在着出口市场单一,出口企业数量少,出口量持续下降等问题。文章概述了六堡茶出口的历史及出口路线,分析了六堡茶出口的现状及问题,并提出对策,旨在为进一步推动六堡茶乃至我国茶叶外贸出口提供借鉴和参考。

关键词：六堡茶出口茶船古道建议

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郭予元院士在棉铃虫区域性综合防治技术体系研究及应用中的学术贡献——纪念郭予元院士诞辰90周年

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植物保护 2023年第1期49卷 22-27,95页

作者：戴小枫梁革梅王桂荣张永军中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 中国农业科学院深圳农业基因组研究所深圳518120

郭予元院士带领团队研究人员通过多年协同攻关研究,解析了棉铃虫发生为害规律和自然种群生命表机制,明确了棉铃虫对多种农药抗药性动态并应用于棉田抗药性治理,揭示了黄河流域棉区棉花对不同世代棉铃虫为害的补偿生长规律和防治策略,基... 详细信息

郭予元院士带领团队研究人员通过多年协同攻关研究,解析了棉铃虫发生为害规律和自然种群生命表机制,明确了棉铃虫对多种农药抗药性动态并应用于棉田抗药性治理,揭示了黄河流域棉区棉花对不同世代棉铃虫为害的补偿生长规律和防治策略,基于不同世代棉铃虫为害阈值和防治指标创建了准确预报二代棉铃虫发生数量的一代麦田扫网法,开展棉花种质资源抗病虫性鉴定并指导选育多抗棉花系列新品种。通过整合诱杀、选择性杀虫剂、生物农药与化学农药次序使用和局部精准施药等绿色防治技术,组建区域性棉花主要病虫害综合防治技术体系,棉区棉铃虫为害得到有效控制,引领了我国农作物主要病虫害综合防治技术的发展。本文简要回顾了郭予元院士在该领域研究中做出的主要历史贡献。

关键词：郭予元棉花棉铃虫病虫害综合防治

日光温室蔬菜残株堆腐后还田对根区土壤环境及蔬菜产量的影响

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应用生态学报 2016年第5期27卷 1553-1559页

作者：韩伶李衍素于贤昌贺超兴中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081

为了探究设施蔬菜收获后剩余残株合理利用的途径,通过温室土壤栽培试验研究了番茄、黄瓜残株堆肥还田(0、15、20、30 t·hm^(-2))对土壤性状及蔬菜生长和产量的影响.结果表明:将番茄、黄瓜残株堆肥处理后还田可降低土壤容重,提高土壤有... 详细信息

为了探究设施蔬菜收获后剩余残株合理利用的途径,通过温室土壤栽培试验研究了番茄、黄瓜残株堆肥还田(0、15、20、30 t·hm^(-2))对土壤性状及蔬菜生长和产量的影响.结果表明:将番茄、黄瓜残株堆肥处理后还田可降低土壤容重,提高土壤有机质含量、微生物生物量和酶活性,促进蔬菜植株生长,增加蔬菜产量,改善蔬菜营养品质.残株堆肥使用量越多,改善效果越好,且对第二茬春黄瓜的作用效果优于第一茬秋番茄.表明施用蔬菜残株堆肥还田可改善设施蔬菜根区土壤环境,并提高设施蔬菜产量和品质.

关键词：蔬菜残株堆肥日光温室根区环境蔬菜产量

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湖羊羔羊最佳早期断奶日龄的研究

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