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黄颡鱼细胞因子信号传导抑制因子SOCS1的原核表达及多克隆抗体制备

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水产学报 2020年第4期44卷 523-527页

作者：叶汉梅魏晓雷谭肖英华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室

细胞因子信号传导抑制因子(suppressor of cytokine signaling, SOCS)是一类由细胞产生的胞内蛋白,能够反馈性阻断细胞因子信号传导过程的负性调控因子。为深入研究黄颡鱼细胞因子信号传导的发生过程和机制,实验从黄颡鱼cDNA中克隆获得5... 详细信息

细胞因子信号传导抑制因子(suppressor of cytokine signaling, SOCS)是一类由细胞产生的胞内蛋白,能够反馈性阻断细胞因子信号传导过程的负性调控因子。为深入研究黄颡鱼细胞因子信号传导的发生过程和机制,实验从黄颡鱼cDNA中克隆获得561 bp的黄颡鱼SOCS1(PfSOCS1)基因编码序列,成功构建了重组质粒pET32a(+)-PfSOCS1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行表达,确定最佳表达条件。本实验采用包涵体纯化的方法得到纯度较高的重组SOCS1蛋白;以重组PfSOCS1蛋白免疫Balb/C小鼠,制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfSOCS1抗血清可以特异性识别重组PfSOCS1蛋白。蛋白水平的组织分布显示,黄颡鱼SOCS1蛋白在肝脏中表达水平较高。

关键词：黄颡鱼 SOCS1 原核表达多克隆抗体制备蛋白表达

太湖流域湖荡湿地沉积物砷汞的空间分布及污染评价

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长江流域资源与环境 2013年第5期22卷 626-632页

作者：徐泽新张敏华中农业大学水产学院、农业部淡水生物繁育重点实验室湖北武汉430070

以太湖流域湖荡湿地表层沉积物作为研究对象,用双道氢化物原子荧光光谱法分析了太湖流域湖荡湿地沉积物中重金属砷(As)和汞(Hg)的空间分布特征,用地累积指数法(Geoaccumulation Index,Igeo)对太湖流域湖荡湿地As和Hg的污染状况进行了分... 详细信息

以太湖流域湖荡湿地表层沉积物作为研究对象,用双道氢化物原子荧光光谱法分析了太湖流域湖荡湿地沉积物中重金属砷(As)和汞(Hg)的空间分布特征,用地累积指数法(Geoaccumulation Index,Igeo)对太湖流域湖荡湿地As和Hg的污染状况进行了分析和评价。结果表明:湖州和无锡地区湖荡湿地沉积物As的含量相对较高,且高于太湖流域As的环境背景值,各研究区域湖荡湿地沉积物均未受到As的污染;常州地区湖荡湿地沉积物中Hg的含量相对较低,0部区域(如无锡,湖州)有增加的趋势,表明人类活动的干扰可能是太湖流域湖荡沉积物中Hg和As含量增加的主要因素。

关键词：湖荡湿地沉积物砷汞污染评价太湖流域

黄颡鱼溶酶体酸性脂肪酶基因的cDNA序列、启动子及其转录调控分析

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水生生物学报 2022年第1期46卷 98-105页

作者：谌芳仲崇超陈姝为张电光吕武宏谭肖英华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁育重点实验室武汉430070

通过分子结构、组织表达及启动子结构功能分析,探讨黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)溶酶体酸性脂肪酶(Lysosmal acid lipase,lal)基因的分子特征及转录调控,为lal在鱼类脂质代谢和转录水平的调控提供新的视野。实验采用RT-PCR和RACE克... 详细信息

通过分子结构、组织表达及启动子结构功能分析,探讨黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)溶酶体酸性脂肪酶(Lysosmal acid lipase,lal)基因的分子特征及转录调控,为lal在鱼类脂质代谢和转录水平的调控提供新的视野。实验采用RT-PCR和RACE克隆lal基因的cDNA全长序列,其长度为1802 bp,5′上游启动子长度为2052 bp,其中ORF长度为1197 bp,编码398个氨基酸,理论蛋白分子量大小为45.42 kD,等电点为7.70,含有23个残基的信号肽、5个糖基化位点(Asn^(35)-Ile^(36)-Ser^(37)、Asn^(101)-Thr^(102)-Ser^(103)、Asn^(273)-Met^(274)-Thr^(275)、Asn^(320)-Gln^(321)-Ser^(322)、Lys^(161)-Thr^(162)-Thr^(163))、3个半胱氨酸(Cys^(257)、Cys^(265)、Cys^(284))、催化三元体(Ser^(174)、Asp^(344)、His^(373))、一个“帽子”(Thr^(205)-Val^(329))和一个“盖子”(Phe^(233)-Leu^(272))结构域。氨基酸序列对比和系统发育树分析显示,黄颡鱼的lal与斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)亲缘关系最近。组织表达分析显示,lal基因的mRNA在脾脏、肠和精巢表达量最高。黄颡鱼lal启动子上存在Sp1、STAT3、PPARα、FOXO1、PPARγ及HNF4α等转录位点,启动子活性实验表明,–1507 bp/–1016 bp区域负调控启动子活性,–1016 bp/+51 bp区域正调控启动子活性。研究对黄颡鱼溶酶体酸性脂肪酶(lal)基因序列的分子特征进行了解析,有助于了解鱼类lal的结构和功能,为进一步研究鱼类脂质代谢的调控机制奠定基础。

关键词：黄颡鱼 lal 分子特征组织表达启动子

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氨和空气暴露对大鳞副泥鳅组织中谷氨酰胺含量的影响

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中国水产科学 2017年第5期24卷 1115-1122页

作者：张云龙张海龙王凌宇顾贝易樊启学安徽农业大学动物科技学院华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室

为研究氨对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)(体重1825 g)生理指标的影响,将其暴露于30 mmol/L NH4Cl溶液和空气中0 h,6 h,12 h,24 h,48 h,72 h,以研究体外和体内氨对其体组织中谷氨酰胺含量、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶活性的... 详细信息

为研究氨对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)(体重1825 g)生理指标的影响,将其暴露于30 mmol/L NH4Cl溶液和空气中0 h,6 h,12 h,24 h,48 h,72 h,以研究体外和体内氨对其体组织中谷氨酰胺含量、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶活性的影响。研究发现,氨和空气暴露下,随着暴露时间的延长,大鳞副泥鳅肝脏和肌肉组织中谷氨酰胺含量有明显累积的趋势,脑、肝脏和肠道组织中谷氨酰胺合成酶活性均显著上升。氨和空气暴露显著影响大鳞副泥鳅脑和肠道组织中谷氨酸脱氢酶活性,但对肝脏组织中谷氨酸脱氢酶活性并没有显著性影响。结果表明,大鳞副泥鳅可通过体组织中累积谷氨酰胺来应对体外或体内氨浓度的上升,氨暴露和空气暴露可刺激体内谷氨酰胺的合成,将氨转化为无毒性的谷氨酰胺。肠道中谷氨酸脱氢酶活性显著上升,可能在鱼类应对氨氮毒性中,肠道谷氨酸脱氢酶比谷氨酰胺合成酶有更重要的作用。而大鳞副泥鳅肝脏组织中谷氨酸脱氢酶活性并不受氨和空气暴露的影响,这可能是由于肝脏组织中转氨酶催化生成了足量的谷氨酸。

关键词：大鳞副泥鳅谷氨酰胺氨暴露空气暴露

鱼类早期发育阶段异速生长及核酸、消化酶变化的研究进展

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中国水产科学 2017年第3期24卷 648-656页

作者：张云龙张海龙王凌宇顾贝易樊启学安徽农业大学动物科技学院华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室

鱼类早期发育阶段是其生活史中的关键时期之一,生理、形态学变化剧烈,死亡率极高。研究鱼类早期发育阶段的生长规律及其生理特性,可为了解鱼类早期阶段的致死因子提供理论依据,有助于提高苗种阶段的生长率和成活率,也对制定合理的早期... 详细信息

鱼类早期发育阶段是其生活史中的关键时期之一,生理、形态学变化剧烈,死亡率极高。研究鱼类早期发育阶段的生长规律及其生理特性,可为了解鱼类早期阶段的致死因子提供理论依据,有助于提高苗种阶段的生长率和成活率,也对制定合理的早期培育策略具有重要的指导意义。异速生长模式对确定仔鱼的养殖模式有重要的指示作用,鱼类在早期阶段会优先发育与生命活动关系较密切的器官,以期达到较高的早期成活率。RNA/DNA是评价鱼类早期发育阶段生长率的有效指标,也可用于评价仔稚鱼的生长潜力、营养状况、饲料营养水平以及确定关键期。研究仔稚鱼消化酶的发生和演变有助于深入了解鱼类在个体发育早期的消化生理,有助于选择适口饵料和制定投喂策略。因此,本文综述了鱼类早期发育阶段的异速生长模式、核酸及蛋白含量变化规律以及消化酶的发生和变化,为鱼类早期阶段健康养殖的发展提供依据。

关键词：早期阶段异速生长核酸消化酶演变

三峡库区重金属的生物富集、生物放大及其生物因子的影响

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环境科学 2016年第1期37卷 325-334页

作者：韦丽丽周琼谢从新王军李君华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室武汉430070 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心武汉430070

三峡水库于2010年10月蓄水到最大水位(175 m),为揭示最大水位蓄水对库区典型水域重金属污染可能存在的影响于2011年7月至2012年8月研究了三峡库区水生生物体内汞(Hg)、镉(Cd)、铅(Pb)的含量水平及其沿着水体食物链可能存在的生物放大现... 详细信息

三峡水库于2010年10月蓄水到最大水位(175 m),为揭示最大水位蓄水对库区典型水域重金属污染可能存在的影响于2011年7月至2012年8月研究了三峡库区水生生物体内汞(Hg)、镉(Cd)、铅(Pb)的含量水平及其沿着水体食物链可能存在的生物放大现象,并分析水体无脊椎动物、鱼类组织的重金属含量与生物因子(体长、体重、食性、栖息水层、碳源、营养级)之间的关系.结果表明,3种重金属浓度的最大值均未超过我国水产品食用安全标准,Hg浓度比库区蓄水前稍高,Cd和Pb浓度则低于蓄水前的水平.与国外水库相比,三峡库区重金属的浓度整体上偏低.鲤鱼Cd浓度与其体长、体重有显著的相关性,翘嘴鲌和鲇的Hg浓度与体长、体重显著性相关.整体上3种重金属的浓度与食性显著相关,与栖息水层之间的相关性并不显著,底栖生活鱼类的重金属浓度高于中上层鱼类.3种重金属的浓度与δ^(15)N值的回归分析结果显示,Hg浓度与δ^(15)N值之间表现出显著的相关性,但生物放大效率低于美国及加拿大等地水库的水平,这与三峡库区土壤中较低的有机碳含量有关.

关键词：三峡水库重金属生物富集生物放大食物网稳定同位素

青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用

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水生生物学报 2017年第4期41卷 748-754页

作者：李玲玉方健于淼陈天圣华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室武汉430070

青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类,为探究prdm14同源基因的潜在作用,实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体。首先,将prdm14基因的部分编码区连接到p ET32a质粒中,构建重组表达载体p E... 详细信息

青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类,为探究prdm14同源基因的潜在作用,实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体。首先,将prdm14基因的部分编码区连接到p ET32a质粒中,构建重组表达载体p ET32a-prdm14?600。随后将重组载体转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,获得分子量为60 k D的Prdm14重组蛋白。接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化,免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),6周后获得阳性抗体,最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性。结果显示,在37℃、0.6 mmol/L IPTG、诱导3h的条件下,可获得Prdm14重组蛋白的高效表达;制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在Hep G2细胞中过表达的青鳉Prdm14:EGFP融合蛋白。综上所述,研究首次制备了一种能有效识别青鳉Prdm14的多克隆抗体,该抗体的获得为后续研究prdm14基因在鱼类多能性干细胞中的作用提供了有力工具。

关键词：青鳉 Prdm14 原核表达多克隆抗体干细胞

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鱼类分批繁殖力和繁殖频率的研究进展

动物学杂志 2013年第1期48卷 143-149页

作者：王腾黄丹孙广文王海生马秀娟沈建忠农业部淡水生物繁育重点实验室华中农业大学水产学院武汉430070

繁殖潜力是决定鱼类的繁殖补充及制定种群评估生物学假设的关键机制,由此分批繁殖力和繁殖频率对评估分批繁殖鱼类的繁殖潜力就十分必要。分批繁殖力和繁殖频率的研究均开始于20世纪80年代,在过去的30年中,评估分批繁殖力最为广泛使用... 详细信息

繁殖潜力是决定鱼类的繁殖补充及制定种群评估生物学假设的关键机制,由此分批繁殖力和繁殖频率对评估分批繁殖鱼类的繁殖潜力就十分必要。分批繁殖力和繁殖频率的研究均开始于20世纪80年代,在过去的30年中,评估分批繁殖力最为广泛使用的方法是水化卵法,而繁殖频率使用最多的方法是产后滤泡法。这两种方法虽然都存在一定的不足,但无可否认是现在最为实用和成熟的方法。

关键词：分批繁殖力繁殖频率水化卵产后滤泡

团头鲂Hox基因家族的鉴定、进化与表达分析

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水产学报 2021年第2期45卷 161-169页

作者：刘宁黄欣刘寒王卫民华中农业大学水产学院农业农村部淡水生物繁殖重点实验室

为探究团头鲂Hox的分布、进化及表达调控,实验基于团头鲂全基因组数据,结合生物信息学分析方法对Hox基因家族进行鉴定、染色体分布、系统进化和表达分析。结果显示,团头鲂基因组中鉴定有49个Hox,根据系统进化树聚集为5个亚类;49个Hox分... 详细信息

为探究团头鲂Hox的分布、进化及表达调控,实验基于团头鲂全基因组数据,结合生物信息学分析方法对Hox基因家族进行鉴定、染色体分布、系统进化和表达分析。结果显示,团头鲂基因组中鉴定有49个Hox,根据系统进化树聚集为5个亚类;49个Hox分属于7个基因连锁群(HoxAa、HoxAb、HoxBa、HoxBb、HoxCa、HoxCb和HoxDa),并且不均匀地分布在5条染色体上;团头鲂Hox基因家族成员具有不同的表达模式,在肌肉中的表达水平与斑马鱼所有Hox的表达存在显著差异;团头鲂不同发育阶段及不同组织的转录组结果显示,在HoxA基因群中,HoxA2a和HoxA3a在幼鱼阶段高表达,其他基因在肌肉、肌间刺及结缔组织中表达量低甚至不表达;HoxB基因群中,HoxB9a、HoxB3a、HoxB8a、HoxB1b、HoxB5a和HoxB5b在幼鱼阶段高表达,HoxB7a、HoxB10a和HoxB9a在成鱼肌肉、结缔组织及肌间刺中高表达;HoxC基因群中,HoxC3a和HoxC4a在幼鱼阶段高表达,HoxC3a和HoxC8a在成鱼的3个组织都有表达;HoxD基因群中,HoxD9a、HoxD10a和HoxD11a在胚胎S2期表达量较高。研究表明,Hox在团头鲂早期胚胎时期和肌间刺的形成中有表达,提示团头鲂肌间刺的形成可能受Hox基因家族调控。

关键词：团头鲂 Hox基因家族基因鉴定表达分析