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内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况及分子鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 36-41页

作者：李娜藏达热乌日力格阿拉腾布日古德海鹰哈斯苏荣内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室国家级动物医学实验教学中心呼和浩特010018 乌审旗动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯017300

目的了解内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况。方法2022年8月至2023年3月在乌审旗嘎鲁图、苏力德苏木、乌兰陶勒盖、乌审召和图克镇采集牛、羊血样和粪样,间接ELISA检测血清抗肝片形吸虫抗体,随机抽取部分血清抗体检测样品对应的... 详细信息

目的了解内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况。方法2022年8月至2023年3月在乌审旗嘎鲁图、苏力德苏木、乌兰陶勒盖、乌审召和图克镇采集牛、羊血样和粪样,间接ELISA检测血清抗肝片形吸虫抗体,随机抽取部分血清抗体检测样品对应的牛、羊粪样,采用虫卵沉淀法定性检查虫卵,对血清抗体检测和粪样虫卵检查结果进行一致性检验。2023年4月,在嘎鲁图、苏力德苏木和图克镇因感染片形吸虫死亡牛、羊尸首的肝脏和胆汁中采集片形吸虫成虫和虫卵,提取虫体和虫卵DNA,PCR扩增片形吸虫核糖体内转录间隔区2(ITS2)并测序,在NCBI数据库中进行BLAST比对分析,采用邻接法构建系统进化树。采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,不同地区的阳性率的比较采用χ^(2)检验。结果共采集825份牛、羊血样,其中295份血清肝片形吸虫抗体阳性,总阳性率为35.8%(295/825),羊、牛阳性率分别为34.7%(227/655)、40.0%(68/170)。羊血清阳性率以苏力德苏木最高[81.8%(45/55)],乌审召镇最低[22.0%(27/123)],不同地区血清抗体阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=73.93,P<0.05)。牛血清抗体阳性率以嘎鲁图镇最高[65.1%(28/43)],图克镇最低[19.2%(5/26)],不同地区血清抗体阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=21.50,P<0.05)。共抽取88份牛、羊粪样(羊粪样59份,牛粪样29份)检查,其中1份羊粪样、5份牛粪样检出肝片形吸虫虫卵,4份牛粪样检出同盘吸虫虫卵。88份牛、羊血样、粪样样品中,血清肝片形吸虫抗体的阳性率为29.5%(26/88),粪样肝片形吸虫卵的阳性率为6.8%(6/88),kappa值为0.086,两种方法的一致性为微弱。从2头牛体内收集到成虫和虫卵,从2头羊体内收集到成虫。共取5条成虫和2份虫卵提取DNA,PCR扩增共获得7条约550 bp的条带。BLAST比对分析结果显示,4条序列与来自中国的巨片形吸虫ITS2(GenBank:HQ700438)的序列一致性分别96.62%、95.91%、95.74%和92.97%,鉴定为巨片形吸虫;3条序列与来自中国的肝片形吸虫ITS2(GenBank:JF496717)的序列一致性分别为95.69%、99.80%和99.23%,鉴定为肝片形吸虫。系统进化树分析结果显示,本研究鉴定的肝片形吸虫与来自中国(GenBank:JF496717)、肯尼亚(GenBank:MZ396926)、埃及(GenBank:MW620063)的肝片形吸虫聚在同一分支上;巨片形吸虫与来自中国(GenBank:HQ700438)和印度(GenBank:OL691113)的巨片形吸虫聚在同一分支上。结论内蒙古乌审旗地区牛、羊均存在肝片形吸虫和巨片形吸虫感染,片形吸虫的感染率较高。

关键词：片形吸虫肝片形吸虫巨片形吸虫血清抗体 ELISA 分子鉴定牛羊内蒙古

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结核分枝杆菌免疫逃逸机制研究进展

科学通报 2024年第4期69卷 531-541页

作者：李娜宋银娟储岳峰兰州大学动物医学与生物安全学院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州730000

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的一种对全球人类健康和经济社会发展具有重大影响的人兽共患病.结核分枝杆菌感染人类已有数千年的历史,在其与人类宿主共同进化的过程中,Mtb已发展... 详细信息

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的一种对全球人类健康和经济社会发展具有重大影响的人兽共患病.结核分枝杆菌感染人类已有数千年的历史,在其与人类宿主共同进化的过程中,Mtb已发展出多种巧妙的策略以逃避宿主的免疫防御,从而建立持续性感染.然而,我们对其免疫逃逸的分子机制以及细菌的毒力因子在Mtb不同感染阶段下发挥的作用了解有限.研究表明,在Mtb感染的早期阶段,肺泡巨噬细胞无法控制Mtb的感染,在进入肺间质后,Mtb可通过调控细胞内感染、损害抗原提呈、破坏巨噬细胞和T细胞功能等手段达到免疫逃逸的目的.本文详细回顾并综述了近年来结核分枝杆菌调控巨噬细胞自噬、凋亡以及适应性免疫应答等过程的分子机制,这些分子机制对于开发新的宿主导向疗法以及保护性疫苗至关重要.

关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞免疫逃逸宿主导向疗法

鸭疫里默氏杆菌九型分泌系统(T9SS)分泌蛋白B739_0093的功能鉴定

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微生物学报 2024年第7期64卷 2407-2418页

作者：江茵罗睿心程安春刘马峰西南动物疫病防控技术教育部工程研究中心四川成都611130 四川省动物疫病防控国际联合研究中心四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心四川成都611130

【目的】鸭疫里默氏杆菌是引起鸭浆膜炎的一种革兰氏阴性病原菌,该菌编码的九型分泌系统(type IX secretion system,T9SS)参与滑动、致病等过程。前期研究结果表明,鸭疫里默氏杆菌CH-1株B739_0093基因在限铁培养条件明显上调。序列分析... 详细信息

【目的】鸭疫里默氏杆菌是引起鸭浆膜炎的一种革兰氏阴性病原菌,该菌编码的九型分泌系统(type IX secretion system,T9SS)参与滑动、致病等过程。前期研究结果表明,鸭疫里默氏杆菌CH-1株B739_0093基因在限铁培养条件明显上调。序列分析表明,B739_0093编码蛋白含有一个T9SS分泌蛋白保守的C端结构域,然而其具体功能未知。本研究旨在鉴定该基因编码蛋白是否被T9SS分泌,以及在该菌致病中的作用。【方法】用荧光定量PCR检测B739_0093是否被铁离子和铁转运调节子(ferric uptake regulator,Fur)调控;用大肠杆菌表达重组B739_0093截短蛋白制备多克隆抗体,通过Western blotting检测是否由T9SS分泌;构建B739_0093基因缺失株,通过毒力和定殖试验鉴定B739_0093在鸭疫里默氏杆菌致病中的功能。【结果】荧光定量PCR结果表明,B739_0093基因在铁离子限制性培养基明显上调,此调控是由调控蛋白Fur介导的;Western blotting结果显示,B739_0093基因编码蛋白在亲本株RA CH-1主要定位在分泌物中,而在T9SS缺失株定位在菌体且不能在分泌物被检测到;与亲本株RA CH-1相比,RA CH-1ΔB739_0093对雏鸭的致病力减弱,在雏鸭各组织器官的定殖能力明显降低。【结论】B739_0093基因编码蛋白是由鸭疫里默氏杆菌T9SS分泌的,其表达受铁离子及Fur调控,并且参与了该菌的致病。

关键词：鸭疫里默氏杆菌九型分泌系统毒力

2019-2022年中国H6N1亚型禽流感病毒的生物学特性分析

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中国农业科学 2024年第9期57卷 1820-1832页

作者：陈源崔鹏飞施建忠张元成于晴晴颜成张亚萍王丛丛张洁王燕邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室/国家禽类实验动物资源库

【背景】H6亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）广泛流行于我国南方地区，是我国家禽中最常见AIV之一。H6N1亚型AIV频繁地与其他野鸟源毒株重配，并且可以作为供体为高致病性AIV提供内部基因片段，产生新型重组病毒，进而威胁... 详细信息

【背景】H6亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）广泛流行于我国南方地区，是我国家禽中最常见AIV之一。H6N1亚型AIV频繁地与其他野鸟源毒株重配，并且可以作为供体为高致病性AIV提供内部基因片段，产生新型重组病毒，进而威胁人类健康。【目的】通过对我国H6N1亚型AIV的演化动态及其相关生物学特性分析研究，为我国禽流感的综合防控提供数据支持。【方法】采集2019—2022年我国25个省（直辖市、自治区）的活禽交易市场及养殖场家禽喉和泄殖腔拭子，通过接种鸡胚分离到7株H6N1亚型AIVs并对其进行全基因组测序，分析其遗传演化特征、受体结合特性及其对SPF鸡和BALB/c小鼠的感染性。【结果】遗传演化分析表明，7株病毒的基因与分离于北美及东南亚地区的野鸟源病毒基因同源性较高，基因来源复杂，具有明显的遗传多样性。贝叶斯演化分析表明，H6亚型AIV HA基因曾发生过多次的跨洲际传播，欧亚谱系病毒在北美地区也有着较长时间流行。1株病毒HA基因与北美地区毒株基因高度同源，根据贝叶斯演化分析结果，推测该病毒在野鸟体内经历了复杂的基因重配后形成，后经野鸟传入我国。特殊氨基酸位点分析结果显示，病毒HA蛋白裂解位点序列均为PQIETR↓GLF，符合低致病性AIV特征；此外，另有1株病毒的NP蛋白发生Y52H突变，据报道，该突变对AIV获得抵抗人干扰素刺激基因BTN3A3的能力起到关键作用。受体结合特性分析表明，部分毒株具有双受体结合特性，但结合人源受体能力弱于结合禽源受体能力。病毒对SPF鸡的感染性试验表明，鸡感染A/chicken/Jiangxi/S40445/2019(H6N1)后能通过呼吸道及消化道排毒，并且病毒可在鸡群内通过接触传播。鸡感染A/duck/Jiangxi/S10941/2019(H6N1)后仅有少数鸡通过呼吸道排毒，病毒无法在鸡群间通过接触传播。BALB/c小鼠的感染性试验表明，H6N1亚型AIV无需提前适应便可在小鼠呼吸道内有效复制，但对小鼠仍呈低致病力。【结论】2019—2022年分离于我国的H6N1亚型AIV基因大部分来源于野鸟源病毒，候鸟可经东亚-澳大利亚迁徙路线将病毒传入我国；部分病毒能够结合人源唾液酸受体并在小鼠呼吸道内有效复制，表明该亚型病毒对公共卫生安全构成潜在威胁。

关键词： H6N1 禽流感病毒跨洲际传播重配感染性

鸭疫里默氏杆菌CH-1株37℃和42℃的转录组测序及比较分析

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微生物学报 2024年第7期64卷 2368-2380页

作者：汪思懿郭方程安春刘马峰西南动物疫病防控技术教育部工程研究中心四川成都611130 四川省动物疫病防控国际联合研究中心四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心四川成都611130

【目的】鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种感染鸭的革兰氏阴性菌,给养鸭业造成较大经济损失。由于鸭体内温度为42℃,当鸭疫里默氏杆菌感染鸭后必然会调节自身基因表达来适应鸭体内温度。为鉴定鸭疫里默氏杆菌CH-1株感染... 详细信息

【目的】鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种感染鸭的革兰氏阴性菌,给养鸭业造成较大经济损失。由于鸭体内温度为42℃,当鸭疫里默氏杆菌感染鸭后必然会调节自身基因表达来适应鸭体内温度。为鉴定鸭疫里默氏杆菌CH-1株感染鸭的适应性机制,本研究测定和比较了鸭疫里默氏杆菌CH-1株在37℃和42℃下的转录组。【方法】将鸭疫里默氏杆菌RA-CH-1株在37℃培养至对数生长期后,分别在37℃和42℃热应激1 h,收集菌体,提取总RNA。利用转录组测序(RNA-seq)技术获得RA-CH-1在37℃和42℃下的转录组原始数据,筛选得到差异表达基因,通过基因本体论(geneontology,GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(Kyotoencyclopediaof genes and genomes,KEGG)数据库对差异表达基因进行富集分析。选取dnaK作为热应激反应基因进行功能初步鉴定。【结果】共筛选获得234个显著差异表达基因,其中169个基因显著上调,65个基因显著下调。显著差异表达基因通过GO富集分析主要富集在核苷代谢过程、糖基化合物代谢过程和核心RNA聚合酶结合转录因子活性等;显著差异表达基因通过KEGG富集分析主要富集在氧化磷酸化、核糖体和细菌分泌系统等通路。与37℃条件下生长能力比较,dnaK缺失后导致鸭疫里默氏杆菌在42℃条件下生长能力受损。【结论】RA-CH-1在37℃和42℃下生长不受影响,通过热休克反应相关蛋白等因子表达上调或下调来应对温度升高后的应激状况。

关键词：鸭疫里默氏杆菌转录组温度

柔嫩艾美耳球虫表面抗原EtSAG的特性分析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：姚亚文王青杰朱顺海赵其平董辉黄兵韩红玉中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室陕西省动物疫病预防控制中心

为了探索球虫产生耐药性的分子机制，实验室前期构建了柔嫩艾美耳球虫药物敏感株（DS）、由DS诱导的盐霉素耐药株（SMR）和马杜拉霉素耐药株（MRR）的基因差异表达谱，发现SMR和MRR中表面抗原（SAG family member， EtSAG，基因号：ETH... 详细信息

为了探索球虫产生耐药性的分子机制，实验室前期构建了柔嫩艾美耳球虫药物敏感株（DS）、由DS诱导的盐霉素耐药株（SMR）和马杜拉霉素耐药株（MRR）的基因差异表达谱，发现SMR和MRR中表面抗原（SAG family member， EtSAG，基因号：ETH＿00034990）相对于DS存在显著的表达差异。本研究对EtSAG基因的开放阅读框进行了克隆、表达和蛋白特性分析。IFA分析表明，EtSAG蛋白主要在子孢子和第二代裂殖子的表面分布。qPCR检测发现EtSAG基因在DS孢子化卵囊中的mRNA转录水平高于其他三个阶段（未孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子）；与DS相比，EtSAG基因的mRNA转录水平在SMR中明显下调，而在MRR中则出现上调。上述这些发现为后续探索柔嫩艾美耳球虫对离子载体类药物耐药的机制，开发快速检测田间鸡球虫耐药性的方法提供基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG 耐药性耐药相关基因

发酵柴胡茎叶对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道健康的影响

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动物营养学报 2024年第3期36卷 1628-1640页

作者：王磊卿郝科阳马慧张封东冯嘉李景河向玉军侯红斌闵育娜西北农林科技大学动物科技学院杨陵712100 铜川市动物卫生监督所铜川629000 旬邑县动物疫病预防控制中心旬邑711300

本试验旨在研究饲粮中添加发酵柴胡茎叶对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道健康的影响。选取384只35周龄京粉6号蛋鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复12只鸡。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加5%(TM5%组)、10%(TM... 详细信息

本试验旨在研究饲粮中添加发酵柴胡茎叶对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道健康的影响。选取384只35周龄京粉6号蛋鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复12只鸡。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加5%(TM5%组)、10%(TM10%组)和15%发酵柴胡茎叶(TM15%组)的试验饲粮。预试期2周,正试期12周。结果表明:1)与CON组相比,TM5%、TM10%和TM15%组的37~48周龄平均蛋重显著提高(P<0.05),TM5%和TM10%组的41~44周龄和45~48周龄平均蛋重显著提高(P<0.05),TM10%组的蛋壳厚度显著提高(P<0.05)。2)与CON组相比,TM15%组的十二指肠绒毛高度和绒隐比显著提高(P<0.05)。3)与CON组相比,TM5%、TM10%和TM15%组的十二指肠和空肠超氧化物歧化酶(SOD)活性显著提高(P<0.05),TM10%和TM15%组的十二指肠和空肠丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),TM10%和TM15%组的十二指肠和回肠过氧化氢酶(CAT)活性显著提高(P<0.05),TM10%组的十二指肠和空肠总抗氧化能力(T⁃AOC)显著提高(P<0.05)。4)与CON组相比,TM5%、TM10%和TM15%组的盲肠微生物Chao1、Observed⁃Otus和Shannon指数显著提高(P<0.05),盲肠另支菌属(Alistipes)相对丰度显著降低(P<0.05);TM15%组的盲肠未分类的梭菌纲UCG⁃014(Clostridia_UCG⁃014_unclassified)相对丰度显著降低(P<0.05),沙特尔沃思菌属(Shuttleworthia)和普雷沃氏菌科UCG⁃001(Prevotellaceae_UCG⁃001)相对丰度显著升高(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加发酵柴胡茎叶可以调节肠道微生物区系,改善肠道形态和抗氧化性能,提高蛋重和蛋壳厚度。结合生产性能、蛋品质和肠道抗氧化性能,蛋鸡饲粮中发酵柴胡茎叶的适宜添加水平为10%。

关键词：发酵柴胡茎叶蛋鸡生产性能蛋品质肠道微生物

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猪瘟病毒中和抗体与E2蛋白抗体相关性分析

畜牧兽医学报 2024年

作者：夏应菊李琰刘俊徐嫄李芳韬邹兴启李琪李佳昕赵俊杰张乾义刘业兵徐璐中国兽医药品监察所国家猪瘟参考实验室辽宁省动物疫病预防控制中心

为了探索猪瘟病毒中和抗体与E2蛋白抗体的关系，本研究对289份猪血清进行了中和抗体效价和E2抗体测定，比较分析了二者的相关性；同时从中选取15份血清，测定血清对不同猪瘟病毒流行野毒的中和效价。结果表明，从整体上说E2抗体水平与... 详细信息

为了探索猪瘟病毒中和抗体与E2蛋白抗体的关系，本研究对289份猪血清进行了中和抗体效价和E2抗体测定，比较分析了二者的相关性；同时从中选取15份血清，测定血清对不同猪瘟病毒流行野毒的中和效价。结果表明，从整体上说E2抗体水平与中和效价呈正相关。当群体中所有个体E2抗体阻断率都大于60%时，才能保证群体70%以上免疫猪的中和抗体达到保护标准。本研究的结果有助于基层兽医工作者更好评估临床中猪瘟疫苗的免疫保护状况，降低猪瘟疫情发生风险。

关键词：猪瘟病毒中和抗体 E2抗体相关性

鸭坦布苏病毒NS3蛋白原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用

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农业生物技术学报 2024年第10期32卷 2437-2446页

作者：安而立嵇辛勤阮涌陈泽辉曹伟王晗晗罗晓宇龙丹丹陈佳琪杨纯培吴宗豪王丽娟姚碧琼贵州大学动物科学学院贵州省动物疫病研究所贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室三穗县动物疫病预防控制中心

为了建立一种能够快速检测鸭坦布苏病毒病(Duck tembusu virus, DTMUV)抗体的间接ELISA检测方法，本研究构建了pET-28a-NS3的原核重组表达载体以诱导表达NS3蛋白，以NS3蛋白作为包被抗原，对试验条件进行优化，建立了一种检测DTMUV抗体... 详细信息

为了建立一种能够快速检测鸭坦布苏病毒病(Duck tembusu virus, DTMUV)抗体的间接ELISA检测方法，本研究构建了pET-28a-NS3的原核重组表达载体以诱导表达NS3蛋白，以NS3蛋白作为包被抗原，对试验条件进行优化，建立了一种检测DTMUV抗体的间接ELISA方法，使用所建立ELISA方法对30份攻毒试验血清样品及150份采集的血清样品进行检测。结果显示，所建立间接ELISA方法批内与批间变异系数(CV)分别为1.49%～4.31%和1.22%～6.07%，符合国标；该方法可特异性地检测出DTMUV抗体，且与禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV) H5亚型、AIV H7亚型、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、鸭圆环病毒(Duck circovirus, DuCV)和鸭甲肝病毒1型(Duck hepatitis A virus, DHAV-1)阳性血清均无交叉反应；所建立方法对攻毒试验样品阳性、阴性检出数与商品化试剂盒检测符合率为100%，对养殖场采集样品阳性、阴性检出数与商品化试剂盒检测符合率为97.33%。综上所述，本研究所建立的DTMUV NS3蛋白抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性与重复性，为DTMUV流行病学调查提供了快速、有效的检测方法。

关键词：鸭坦布苏病毒(DTMUV) NS3蛋白 ELISA