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非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质的研制

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 308-315页

作者：苏佳张敏白洪旭张兵赵炜薛青红杨承槐陈晓春中国兽医药品监察所北京100081

标准物质是分子生物学诊断技术的金标准。针对国内无非洲马瘟病毒标准物质的现状,以其AV1311株为原料,通过病毒培养、灭活、分装、特性检验等,成功制备非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质。同时,建立数字PCR方法,对标准物质进行均... 详细信息

标准物质是分子生物学诊断技术的金标准。针对国内无非洲马瘟病毒标准物质的现状,以其AV1311株为原料,通过病毒培养、灭活、分装、特性检验等,成功制备非洲马瘟病毒(AV1311株)核糖核酸标准物质。同时,建立数字PCR方法,对标准物质进行均匀性评估、稳定性考察及9家实验室联合定值,并进行临床试用。结果显示,组内和组间无统计学差异,样品均匀;-20℃保存可稳定6个月,4℃保存可稳定7 d,25℃保存可稳定24 h,可冻融5次,需干冰运输;标准物质认定值为(6.9±1.1)×10^(3)copis/μL;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样品互通性良好;最终通过全国标准物质管理委员会评审,获得国家二级标准物质证书[GBW(E)091272]。综上,本标准物质定值准确,均匀性好,量值稳定,为做好国内非洲马瘟防范工作提供了物质基础。

关键词：非洲马瘟病毒核糖核酸标准物质检测定值数字PCR

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饲料添加中药抗病促生长与替抗应用研究

中国兽药杂志 2024年第7期58卷 26-33页

作者：顾进华龚旭昊赵振宇王柏峣李慧杰中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心) 农业农村部中兽医生物学重点实验室北京100081

重点回顾兽用中药抗病促生长的历史背景,对兽用中药饲料添加应用经验进行总结,提出兽用中药“替抗”应以饲料添加为主要应用方向。对农业农村部饲料药物添加剂品种、《饲料原料目录》、卫生部门发布的“食药物质”目录进行全面梳理,提... 详细信息

重点回顾兽用中药抗病促生长的历史背景,对兽用中药饲料添加应用经验进行总结,提出兽用中药“替抗”应以饲料添加为主要应用方向。对农业农村部饲料药物添加剂品种、《饲料原料目录》、卫生部门发布的“食药物质”目录进行全面梳理,提出“药饲同源”品种名单,研究提出科学遴选和应用兽用中药“替抗”品种原则建议,在现有兽药国家标准和注册标准品种基础上,通过与“药饲同源”品种比对分析,筛选出21种“替抗”兽用中药制剂,为兽用抗菌药使用减量化提供参考。

关键词：兽用中药饲料添加替抗抗病促生长

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兽用中药制剂工艺的传承与创新

中国兽药杂志 2024年第4期58卷 27-33页

作者：顾进华龚旭昊李慧杰董玲玲王伯峣中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心)农业农村部中兽医生物学重点实验室北京100081

为了推动兽用中药制剂工艺的传承与创新发展,本文在总结中兽医方剂传承基础上,研究兽用中药粉碎与超微粉碎、提取等现代工艺发展,剖析中药制剂剂型定位及生产投料存在的问题,探索兽用中药制剂工艺传承创新导向和途径,对《中国兽药典》... 详细信息

为了推动兽用中药制剂工艺的传承与创新发展,本文在总结中兽医方剂传承基础上,研究兽用中药粉碎与超微粉碎、提取等现代工艺发展,剖析中药制剂剂型定位及生产投料存在的问题,探索兽用中药制剂工艺传承创新导向和途径,对《中国兽药典》制剂通则提出修改建议,为兽用中药制剂研究和2025年版《中国兽药典》编撰提供参考。

关键词：兽用中药制剂工艺传承创新

猪链球菌2型关键毒力因子及诱发疾病机制的研究进展

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微生物学通报 2024年

作者：董晨晖金美君李建岳怀宁刘燕王豪杰胡云皓朱良全中国兽医药品监察所

开展致病机制研究是揭示病原菌引起宿主感染发病规律的重要途径。猪链球菌(Streptococcus suis， SS)是造成全球养猪业重大经济损失的主要病原体之一。在不同SS血清型中，猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2， SS2)致病性最强... 详细信息

开展致病机制研究是揭示病原菌引起宿主感染发病规律的重要途径。猪链球菌(Streptococcus suis， SS)是造成全球养猪业重大经济损失的主要病原体之一。在不同SS血清型中，猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2， SS2)致病性最强，流行最广。本文简述了SS2关键毒力因子情况，重点对SS2引发的链球菌中毒休克样综合征(streptococcal toxic shock-like syndrome， STSLS)和脑膜炎致病机制进行系统梳理凝练，以期对猪链球菌病防控提供新思路。

关键词：猪链球菌2型毒力因子致病机制

分光光度法快速测定副鸡禽杆菌菌液浓度的应用

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微生物学通报 2024年第7期51卷 2702-2710页

作者：佟仁冬冯妍刘燕张一帜任小侠郝力力朱良全姚文生中国兽医药品监察所北京100081 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041

[背景]感染副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)会引起一种鸡的急性上呼吸道疾病——传染性鼻炎。一般情况下该病潜伏期短、发病急且传染性强,易给养殖场造成巨大的经济损失。[目的]比较分光光度法(spectrophotometry,SP)与平板菌... 详细信息

[背景]感染副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)会引起一种鸡的急性上呼吸道疾病——传染性鼻炎。一般情况下该病潜伏期短、发病急且传染性强,易给养殖场造成巨大的经济损失。[目的]比较分光光度法(spectrophotometry,SP)与平板菌落计数法(plate colony count,PCC)测定副鸡禽杆菌菌液浓度的准确性,探究SP替代PCC的可行性。[方法]无菌生理盐水悬浮副鸡禽杆菌菌液沉淀物,用SP测定不同稀释度菌悬液吸光度值(OD值),用PCC测定活菌数。以不同波长(450、540、600和650 nm)测定的OD值为自变量,活菌数为因变量,获得标准曲线和线性方程,比较分析确定最适测定波长。设置胰蛋白胨大豆肉汤培养基(tryptone soy broth,TSB)组和无菌生理盐水(sterile physiological saline solution,SPSS)组,分别以TSB和SPSS为悬浮液和稀释液,用SP和PCC法分别测定不同稀释度的副鸡禽杆菌菌悬液,通过标准曲线和线性方程比较分析两种悬液对OD值与菌液浓度相关性的影响。取不同培养阶段(10、12、14、16和18 h)菌液,以测定OD值直接输入线性方程获得菌液浓度,同时进行平板菌落计数,采用SPSS 17.0软件统计分析以验证SP法适用性。[结果]在波长600 nm下测定的OD值与PCC结果线性关系最佳(R^(2)>0.995)。在该波长下,TSB组与SPSS组测定的OD值与PCC结果无显著差异(R_(差)^(2)=0.0005),且TSB组略优于SPSS组(R_(TSB)^(2)=0.9989>R_(SPSS)^(2)=0.9984)。培养10、12、14 h时SP与PCC法测定结果差异不显著(P>0.05),而培养16h和18h时差异显著(P<0.05)。[结论]在对数生长期及稳定期,采用分光光度法测定OD600值可快速确定副鸡禽杆菌菌液浓度。

关键词：副鸡禽杆菌分光光度法平板菌落计数法菌液浓度

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少孢节丛孢菌几丁质酶AO-492对线虫的降解作用研究

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生物技术通报 2024年第5期40卷 261-268页

作者：张嘉华张慧梅马喜喜孙焱森李若冰李柠杏才学鹏乔军孟庆玲石河子大学动物科技学院石河子832003 中国兽医药品监察所北京100081

【目的】为探究捕食线虫真菌少孢节丛孢菌几丁质诱导过程中分泌蛋白AO-492的生物学功能。【方法】对少孢节丛孢菌几丁质酶AO-492主要结构域编码区进行基因克隆及分子特征分析,并在毕赤酵母中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白Re... 详细信息

【目的】为探究捕食线虫真菌少孢节丛孢菌几丁质诱导过程中分泌蛋白AO-492的生物学功能。【方法】对少孢节丛孢菌几丁质酶AO-492主要结构域编码区进行基因克隆及分子特征分析,并在毕赤酵母中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白ReAO-Z492,采用NAG检测法分析了该重组蛋白在不同温度、pH及金属离子条件下的酶学活性,并将其作用于秀丽隐杆线虫及虫卵分析其生物学功能。【结果】几丁质酶AO-492有信号肽,无跨膜结构域,含有两个几丁质结合结构域和一个糖苷水解酶18家族结构域,并含有糖苷水解酶18家族几丁质酶高度保守的底物结合位点-SVGGWT-和水解酶活性位点-FDGGDLDWE-,含有典型的TIM桶形分子结构。系统进化分析显示,该蛋白与坚粘孢单顶孢几丁质酶(EPS35099.1)的亲缘关系相对最近。SDS-PAGE和Western Blot分析表明,ReAO-Z492分子量约为59 kD,可与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生特异性反应。ReAO-Z492最适温度为40℃,最适pH为7.0;Mg^(2+)对其酶活有促进作用,而Ag^(+)、Cu^(2+)、Fe^(3+)和Zn^(2+)有抑制作用。ReAO-Z492对秀丽隐杆线虫体壁及其虫卵卵壳有较强的降解活性。【结论】少孢节丛孢菌几丁质酶 AO-492 对秀丽隐杆线虫及虫卵具有较强的降解作用。

关键词：少孢节丛孢菌几丁质酶 ReAO-Z492 酶学活性捕食线虫真菌

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羊口疮实验室检测方法研究进展

中国兽药杂志 2024年第6期58卷 72-78页

作者：张嘉雯周祉玉朱真杜吉革莘若兰王诗研陈小云中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心) 北京100081

羊口疮是由羊口疮病毒(Orf Virus,ORFV)引起的嗜上皮性人畜共患传染病。该病在国内外均有流行,对养羊业造成了巨大的经济损失。快速高效的检测方法对羊口疮的防治至关重要,目前常用的羊口疮实验室检测方法包括病毒分离鉴定、病毒中和试... 详细信息

羊口疮是由羊口疮病毒(Orf Virus,ORFV)引起的嗜上皮性人畜共患传染病。该病在国内外均有流行,对养羊业造成了巨大的经济损失。快速高效的检测方法对羊口疮的防治至关重要,目前常用的羊口疮实验室检测方法包括病毒分离鉴定、病毒中和试验(VNT)、酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、琼脂扩散试验(ATD)、蛋白质印迹法(WB)、侧流免疫层析测定法(LFIA)、聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR(qPCR)等。本文概述了ORFV实验室检测方法的研究进展,为快速、准确的诊断ORFV提供依据。

关键词：羊传染性脓疱皮炎人畜共患病实验室检测方法

牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力检验用攻毒菌的研究

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中国兽药杂志 2024年第8期58卷 9-14页

作者：王琦李建刘元杰刘燕姚文生王秀丽中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心) 北京100081

为提高我国牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力评价方法的稳定性、可靠性及检验效率,研究制备了活菌数定量的攻毒用牛多杀性巴氏杆菌C45-2株的冻干菌。对其性状、纯粹、真空度、剩余水分、均一性、活菌数稳定性及毒力稳定性进行了检验和评价。... 详细信息

为提高我国牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力评价方法的稳定性、可靠性及检验效率,研究制备了活菌数定量的攻毒用牛多杀性巴氏杆菌C45-2株的冻干菌。对其性状、纯粹、真空度、剩余水分、均一性、活菌数稳定性及毒力稳定性进行了检验和评价。冻干攻毒菌在疫苗效力检验中进行应用,并与-70℃冻存的攻毒菌液进行了比较研究。结果表明,定量冻干菌的性状、纯粹、真空度和剩余水分均符合冻干制品的要求;均一性检查变异系数与低温冻存菌液变异系数均小于6%,均一性良好;保存15个月活菌数稳定性良好,较冻存菌液有明显的优势;保存12个月内毒力略有下降,但不影响疫苗的效力检验,可有效评价疫苗质量。试验表明冻干菌株能满足牛多杀性巴氏杆菌效力检验使用,且简化了细菌培养步骤,提高了检验结果的稳定性和工作效率。

关键词：牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力检验冻干攻毒菌

重组犬IFN-α的原核表达及抗病毒活性研究

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 632-640页

作者：李乐琴曹众达李海珠杜吉革朱真陈小云罗玉峰胡仕凤印春生湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 中国兽医药品监察所北京102629

本试验旨在建立犬α干扰素(CaIFN-α)原核表达及纯化方法,并对其抗病毒活性进行研究。通过构建pET-28a/CaIFN-α表达载体,高效表达和纯化rCaIFN-α;采用CCK-8法在犬肾细胞(MDCK)上测定rCaIFN-α的细胞毒性,在MDCK/VSV系统中测定其抗病... 详细信息

本试验旨在建立犬α干扰素(CaIFN-α)原核表达及纯化方法,并对其抗病毒活性进行研究。通过构建pET-28a/CaIFN-α表达载体,高效表达和纯化rCaIFN-α;采用CCK-8法在犬肾细胞(MDCK)上测定rCaIFN-α的细胞毒性,在MDCK/VSV系统中测定其抗病毒活性效价;RT-qPCR检测rCaIFN-α作用MDCK细胞后下游ISGs的表达水平;进一步利用TCID 50和间接免疫荧光(IFA)测定rCaIFN-α抗犬副流感病毒(CPIV)和犬瘟热病毒(CDV)的感染能力。电泳和Western-blot结果显示,成功制备原核表达的特异性rCaIFN-α;CCK-8结果显示重组蛋白无明显细胞毒性,细胞病变抑制法测定抗VSV病毒活性效价为1.39×107 U/mL;RT-qPCR显示rCaIFN-α可显著上调ISG15、Mxl等ISGs的转录水平;IFA等结果显示,rCaIFN-α对CPIV和CDV具有良好的抗病毒作用。结果表明,本试验制备的rCaIFN-α具有优良的抗病毒感染活性,为进一步研发新型宠物抗病毒制剂奠定了基础。

关键词：犬IFN-α 原核表达干扰素刺激基因(ISGs) 抗病毒活性