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4种藏药提取物与抗生素对产气荚膜梭菌生物被膜的影响

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 766-773页

作者：罗润波蔡重振黄家旗吴丹郭晓庆白吉格桑卓玛边巴央拉苏中华索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 农业农村部西藏包虫病防治重点实验室西藏林芝860000 西藏自治区动物疫病预防控制中心畜牧总站西藏拉萨850000

采用微量肉汤稀释法测定3种方法提取的4种藏药提取物及12种抗生素对(Clostridium perfringens,***)的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),棋盘法检测藏药提取物与抗生素的联合抑菌效果,结晶紫染色法测定20株牦牛源产... 详细信息

采用微量肉汤稀释法测定3种方法提取的4种藏药提取物及12种抗生素对(Clostridium perfringens,***)的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),棋盘法检测藏药提取物与抗生素的联合抑菌效果,结晶紫染色法测定20株牦牛源产气荚膜梭菌生物被膜(biofilm,BF)成膜能力,并检测藏药提取物与抗生素单用及联合使用对BF的抑制效果。结果显示:水提诃子对45.0%的***的MIC≤0.80g/L;波棱瓜子75%乙醇提取物及马兜铃甲醇提取物对20株***的MIC均≤0.40g/L;强力霉素和氨苄西林对19株***的MIC≤0.25mg/L,万古霉素的MIC均≤0.50mg/L;诃子75%乙醇提取物与庆大霉素联用抑菌效果较好,对70.0%的***产生协同作用;20株产气荚膜梭菌均具有BF成膜能力,55.0%的菌株呈强成膜能力;被检抗生素中多黏菌素B对BF的抑制作用最强,在1/4MIC处有强抑制效果;被检藏药提取物中马兜铃甲醇提取物与诃子75%乙醇提取物在1/2MIC处对BF具有强抑制效果;庆大霉素与诃子75%乙醇提取物联用及多黏菌素B与马兜铃甲醇提取物联用在两者均为1/4MIC时对BF仍有强抑制效果。结果表明,4种藏药提取物对***具有抑菌效果,对其BF的形成具有抑制作用,与抗生素联用能增强抑制效果,需进一步对藏药抑菌机制进行研究。

关键词：产气荚膜梭菌藏药 MIC 药敏试验 BF

大豆胞囊线虫病相关GmGRAS21克隆、亚细胞定位及功能分析

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分子植物育种 2024年

作者：曲硕刘芳孙浩文姜海鹏赵雪韩英鹏东北农业大学农学院农业农村部东北大豆生物学与遗传育种重点实验室

大豆胞囊线虫病分布地域广泛，土壤中胞囊存活时间长、致病力强等特点，导致大豆胞囊线虫病防治困难。传统杀线剂虽能有效防治，但会造成土壤周围微生物不可逆伤害。目前主要围绕Rhg1和Rhg4位点附近基因展开研究。过度的利用抗原会造成... 详细信息

大豆胞囊线虫病分布地域广泛，土壤中胞囊存活时间长、致病力强等特点，导致大豆胞囊线虫病防治困难。传统杀线剂虽能有效防治，但会造成土壤周围微生物不可逆伤害。目前主要围绕Rhg1和Rhg4位点附近基因展开研究。过度的利用抗原会造成SCN产生抵抗能力，因此挖掘到新位点、新抗病基因是加快抗线虫育种进程有效途径之一。本文以抗SCN病种质东农L-10和感SCN病种质黑农37为试验材料接种大豆胞囊线虫3号生理小种，取根部组织进行RNA-seq测序并筛选出差异表达基因GmGRAS21，以pCAMBIA3300为基础载体构建pCAMBIA3300-GFP-GmGRAS21过表达载体。根癌农杆菌侵染大豆毛状根法对东农50大豆遗传转化，获得阳性根幼苗并接SCN Race3号生理小种进行抗病鉴定。对GmGRAS21基因的编码蛋白二级和三级蛋白结构、磷酸化位点及蛋白的亲疏水性等进行生物信息学分析。以pCAMBIA1302为基础载体构建pCAMBIA1302-GmGRAS21亚细胞载体，倒置荧光显微镜下观察基因定位情况。结果表明成功构建pCAMBIA3300-GFP-GmGRAS21过表达载体和pCAMBIA1302-GmGRAS21亚细胞载体，分别转化到农杆菌K599和GV3101中。生物信息学结果表明GmGRAS21编码545个氨基酸，分子量为61.47 ku，等电点为5.42、含57个磷酸化位点、蛋白三级结构α-螺旋(44.95%)、无规则卷曲(39.63%)、延伸链(10.64%)和β-转角(4.77%)4种结构、蛋白为亲水性蛋白。亚细胞定位结果表明该基因编码蛋白为核定位蛋白。根癌农杆菌K599侵染大豆毛状根，试验结果表明过表达pCAMBIA3300-GFP-GmGRAS21根部较对照东农50根部单位面积线虫明显减少，初步表明该基因对SCN Race3存在一定的抗性效果。为进一步研究抗大豆胞囊线虫提供科学依据

关键词：大豆胞囊线虫 GRAS21 过表达亚细胞定位

鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：倪君丽刘欣超孙栋方肆云王定爱申翰钦严专强戚南山孙铭飞顾有方广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室温氏食品集团股份有限公司安徽科技学院动物科技学院

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒，同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及... 详细信息

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒，同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位，分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA，通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因，构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体，构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven；将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞，利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达；以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化，间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示：成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven，RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达，质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后，检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达，其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明，pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功，在鸡体内有良好的免疫原性，为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。

关键词：柔嫩艾美耳球虫多表位重组质粒真核表达 DNA疫苗

小鼠慢性弓形虫病发生过程及其动态变化规律初探

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 304-309页

作者：周国庆白邵缘李宇渊朱国鼎黄思扬扬州大学兽医学院比较医学研究院、江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 国家卫生健康委员会寄生虫病预防和控制技术重点实验室、江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室、江苏省医学重点实验室、江苏省血吸虫病防治研究所教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

目的观察不同形态刚地弓形虫感染后小鼠脑内包囊形成及其动态变化,为弓形虫病防控提供依据。方法取6~8周龄ICR小鼠(20~25 g)建立慢性弓形虫感染模型,其中弓形虫PRU株速殖子按1×10^(5)个/只剂量腹腔注射感染小鼠,包囊和卵囊分别按20、20... 详细信息

目的观察不同形态刚地弓形虫感染后小鼠脑内包囊形成及其动态变化,为弓形虫病防控提供依据。方法取6~8周龄ICR小鼠(20~25 g)建立慢性弓形虫感染模型,其中弓形虫PRU株速殖子按1×10^(5)个/只剂量腹腔注射感染小鼠,包囊和卵囊分别按20、200个/只剂量通过灌胃针口服感染小鼠,观察感染后小鼠临床症状和存活情况。分别以10(低剂量组)、20(中剂量组)、40个包囊/只(高剂量组)剂量感染小鼠,观察弓形虫不同感染剂量对小鼠脑内包囊数量的影响。将小鼠按性别(雌、雄性)、感染时间(感染后20、30、60、90、120、150、180 d)分组,按20个/只剂量口服弓形虫包囊后,分别观察性别和感染时间对小鼠脑内包囊数量的影响。将小鼠分成速殖子组(T组)、包囊1代组(C1组)、包囊2代组(C2组)、包囊3代组(C3组)、包囊4代组(C4组);T组小鼠按1×10^(5)个/只剂量腹腔注射弓形虫速殖子,感染后第30天处死小鼠并收集其脑组织内包囊,再按20个/只感染C1组小鼠。此后每一代小鼠均采用上一代所产生包囊进行口服连续传代,观察连续传代对小鼠脑内弓形虫包囊数量的影响。结果以弓形虫速殖子、包囊、卵囊分别感染小鼠,感染第6~13天小鼠出现明显临床症状、感染第7~12天小鼠出现集中死亡。感染第30天时,感染速殖子、包囊、卵囊的小鼠存活率分别为67.0%、87.0%、53.0%,平均脑内包囊数量分别为(516.0±257.2)、(1203.0±502.0)、(581.0±183.1)个,差异有统计学意义(F=11.94,P0.05);雄、雌性组小鼠存活率分别为73.0%和80.0%,平均脑内包囊数量分别为(946.4±411.4)、(932.1±322.4)个,差异无统计学意义(F=1.63,P>0.05)。通过连续传代感染后,T、C1、C2、C3、C4组小鼠平均脑内包囊数量分别为(516.0±257.2)、(1203.0±502.0)、(896.8±332.3)、(782.5±423.9)、(829.2±306.0)个,差异有统计学意义(F=4.82,P<0.01);C1组小鼠脑内包囊数高于速殖子组,差异有统计学意义(P<0.01)。小鼠口服20个包囊后,感染第20天首次查见脑内弓形虫包囊,随感染时间延长脑内包囊数量逐渐增加;至感染第30、90天时,脑内包囊数量分别达峰值,此后逐步下降,至感染第180天时仍能查见脑内包囊。结论刚地弓形虫包囊较速殖子、卵囊感染后形成慢性感染的可能性更高,且慢性感染程度亦最严重;感染弓形虫包囊数量与慢性感染严重程度无关;脑内包囊形成数量于感染第30天和90天时达高峰。

关键词：刚地弓形虫慢性弓形虫病包囊卵囊速殖子脑组织小鼠

昆虫抗白僵菌免疫应答及其在害虫防治中的应用潜力

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浙江农业学报 2024年第4期36卷 825-836页

作者：杨蕾汪小福魏巍陈笑芸彭城徐晓丽徐俊锋浙江省农业科学院浙江省农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室农业农村部农业转基因生物溯源重点实验室浙江杭州310021

昆虫病原真菌白僵菌能成功侵染多种昆虫寄主并致其死亡,是农业生产中有效的生物杀虫剂。相应地,昆虫依赖多种策略抵御真菌感染,其中先天免疫防御是对抗真菌感染的重要手段。昆虫表皮是抵御真菌入侵的第一道屏障,表皮和外分泌腺可分泌多... 详细信息

昆虫病原真菌白僵菌能成功侵染多种昆虫寄主并致其死亡,是农业生产中有效的生物杀虫剂。相应地,昆虫依赖多种策略抵御真菌感染,其中先天免疫防御是对抗真菌感染的重要手段。昆虫表皮是抵御真菌入侵的第一道屏障,表皮和外分泌腺可分泌多种抑菌化合物降低真菌毒力,当真菌孢子进入血淋巴后,细胞免疫和体液免疫共同作用产生系统性免疫应答,表达的多种防御效应因子在细胞包囊、细胞凋亡、黑化反应中发挥功能。然而昆虫强烈的免疫反应影响田间施用白僵菌的效果,导致该真菌制剂应用的局限性。文章详细阐述昆虫感染白僵菌后的免疫应答机制,参与抗真菌免疫的基因与作用手段。该研究为了解昆虫抗真菌免疫机制提供了详实的基础,为合理改造白僵菌、有效提高白僵菌毒力水平提供坚实基础,为农业虫害治理提供新的策略。

关键词：虫生真菌表皮免疫免疫通路抗真菌免疫应答害虫防治

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旋毛虫免疫逃避机制的研究进展

中国人兽共患病学报 2024年第1期40卷 70-75页

作者：钱艳红宋帅温肖会贾春玲吕殿红袁子国罗胜军华南农业大学兽医学院广州510642 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640

旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种全球分布的食源性人兽共患寄生虫病,对动物生产和人兽公共卫生安全造成严重危害。旋毛虫发育史复杂,整个生命周期都在同一宿主体内完成,为了能与宿主相互共存,其进化出各种免疫逃避机制来躲避宿主的免疫清... 详细信息

旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种全球分布的食源性人兽共患寄生虫病,对动物生产和人兽公共卫生安全造成严重危害。旋毛虫发育史复杂,整个生命周期都在同一宿主体内完成,为了能与宿主相互共存,其进化出各种免疫逃避机制来躲避宿主的免疫清除,从而建立长期的慢性感染。本研究从旋毛虫抗原变异、对宿主的免疫调节作用和通过形成包囊产生免疫隔离3个方面,对其免疫逃避机制进行阐述,将为深入了解旋毛虫的致病机制提供重要帮助。

关键词：旋毛虫感染免疫逃避

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鸡球虫体外培养模型及应用研究进展

中国畜牧兽医 2024年第1期51卷 292-301页

作者：潘晓婷李娟陈兵刘俊杰戚南山廖申权吕敏娜林栩慧蔡海明胡俊菁宋勇乐白银山孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广州510640 佛山科学技术学院佛山528000 深圳海关动植物检验检疫技术中心深圳518038

鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞内所引起的一种寄生性原虫病,感染鸡体重减轻、营养不良、肠道损伤等,严重危害养鸡业的健康发展。球虫的生命周期包括从无性阶段到有性阶段的转换并局限于一个宿主。目前对球虫的研究主要包括... 详细信息

鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞内所引起的一种寄生性原虫病,感染鸡体重减轻、营养不良、肠道损伤等,严重危害养鸡业的健康发展。球虫的生命周期包括从无性阶段到有性阶段的转换并局限于一个宿主。目前对球虫的研究主要包括在细胞生物学及其不同生命阶段的蛋白质表达和运输机制、宿主细胞入侵和宿主-寄生虫相互作用、新型药物靶标筛选等方面。鉴于研究问题的多样性,以及减少和取代动物试验的要求,建立高效的体外培养模型成为研究鸡球虫生物学特性、抗球虫疫苗和药物的基本条件。笔者重点阐述了鸡球虫体外培养模型及其在药物抗虫效果研究中的应用,包括鸡胚培养模型、二维培养模型(原代细胞培养模型、传代细胞系培养模型)及三维类器官培养模型。越来越多培养技术的突破为研究球虫生命周期阶段和干预策略开辟了新的途径,也为深入了解鸡球虫致病机制、抗球虫药物研发提供依据。

关键词：鸡艾美耳球虫体外培养模型

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阿维菌素B2聚硅氧烷微球的制备及生物活性评价

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农药 2024年第3期63卷 174-180页

作者：黄佩然江定心华南农业大学绿色农药全国重点实验室天然农药与化学生物学教育部重点实验室广州510642

[目的]为了利用阿维菌素B1(AVMB1)发酵过程中产生的20%~30%低活性阿维菌素B2(AVMB2)化合物,针对AVMB2易光解和残效期短的缺点,制备防紫外光降解的控释AVMB2聚硅氧烷微球。[方法]以甲基三甲氧基硅烷为前体,通过“溶胶-凝胶”法制备聚硅... 详细信息

[目的]为了利用阿维菌素B1(AVMB1)发酵过程中产生的20%~30%低活性阿维菌素B2(AVMB2)化合物,针对AVMB2易光解和残效期短的缺点,制备防紫外光降解的控释AVMB2聚硅氧烷微球。[方法]以甲基三甲氧基硅烷为前体,通过“溶胶-凝胶”法制备聚硅氧烷微球(PSQ)包埋AVMB2(AVMB2@PSQ),对载药微球的组成和形貌进行了FTIR、TGA、SEM、DLS表征以及缓释和抗紫外光解性能分析,并采用浸渍法评价了载药微球对松材线虫的室内生物活性。[结果]AVMB2成功包埋在PSQ中,形成平均粒径为1.1μm、载药率为32.74%的中空结构光滑球形的AVMB2@PSQ微球;12 h溶出率为55.492%,明显优于AVMB2溶出率87.862%;紫外光照射6 h降解率为39.074%,优于AVMB2降解率69.986%;对松材线虫48 h的半致死剂量(LC50)为19.743 mg/L,比AVMB2的LC50值37.992 mg/L高1.9倍。[结论]AVMB2@PSQ微球具有优异的缓释和防紫外光降解性能以及提高AVMB2对松材线虫的毒杀活性,为阿维菌素B2应用于防治松材线虫病农业生产提供了参考。

关键词：阿维菌素B2 聚硅氧烷微球松材线虫“ 溶胶-凝胶”法

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斜纹夜蛾高致病力生防真菌的筛选与鉴定

中国生物防治学报 2024年第2期40卷 282-290页

作者：田艺帆张正坤隋丽赵宇路杨孟钊石旺鹏李启云吉林省农业科学院植物保护研究所/农业农村部东北作物有害生物综合治理重点实验室/吉林省农业微生物重点实验室长春130033 中国农业大学植物保护学院北京100083 公主岭市气象局公主岭136100

本研究从斜纹夜蛾幼虫僵虫中分离并纯化虫生真菌,得到6株昆虫病原真菌,利用形态学和分子生物学方法对上述真菌进行鉴定,采用浸渍法测定6株真菌对斜纹夜蛾2龄幼虫的毒力。结果表明,6株虫生真菌分别为2株球孢白僵菌Beauveria bassiana,以... 详细信息

本研究从斜纹夜蛾幼虫僵虫中分离并纯化虫生真菌,得到6株昆虫病原真菌,利用形态学和分子生物学方法对上述真菌进行鉴定,采用浸渍法测定6株真菌对斜纹夜蛾2龄幼虫的毒力。结果表明,6株虫生真菌分别为2株球孢白僵菌Beauveria bassiana,以及莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi,木贼镰刀菌Fusarium equiseti,曲霉菌Aspergillus nomiae和糙孢蓝状菌Talaromyces trachyspermus各1株。在1×10^(8)个孢子/m L浓度下,LT50分别为4.737 d,4.543 d,1.343 d,2.086 d,2.212 d和2.351 d,6株虫生真菌对斜纹夜蛾2龄幼虫均表现出较强致病力,其中莱氏绿僵菌表现最好。本研究首次报道了镰刀菌和曲霉菌能够感染斜纹夜蛾,并首次发现糙孢蓝状菌能够感染昆虫。

关键词：斜纹夜蛾虫生真菌毒力

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