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蛋白质稳态在病理性心脏重塑中的作用

中华心血管病杂志 2021年第7期49卷 719-723页

作者：王添乐杨晓王剑军事科学院军事医学研究院生命组学研究所北京102206

病理性心脏重塑是多种心脏疾病的主要病理改变,表现为心肌肥厚和纤维化,并最终导致心力衰竭。心肌细胞作为一种终末分化细胞,增殖再生能力有限,因此蛋白质稳态对于心肌细胞生存和功能极其重要。细胞蛋白质稳态是指蛋白质的合成与降解过... 详细信息

病理性心脏重塑是多种心脏疾病的主要病理改变,表现为心肌肥厚和纤维化,并最终导致心力衰竭。心肌细胞作为一种终末分化细胞,增殖再生能力有限,因此蛋白质稳态对于心肌细胞生存和功能极其重要。细胞蛋白质稳态是指蛋白质的合成与降解过程达到动态平衡,其主要受到包括分子伴侣、泛素蛋白酶体、细胞自噬等3种途径在内的蛋白质质量控制系统的调节。近年的研究表明,心肌细胞蛋白质稳态在心脏稳态维持中发挥重要作用,蛋白质质量控制系统中任一环节出现异常均可能引起蛋白质毒性,从而导致病理性心脏重塑。该文综述了蛋白质稳态在心脏稳态维持中作用的新进展,并展望了通过调节蛋白质稳态治疗心脏疾病的前景。

关键词：心脏重塑蛋白质稳态

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战场疫情防控指挥兵棋推演系统总体设计

军事运筹与评估 2022年第5期37卷 69-75页

作者：李吉曹雪霖贺祯军事科学院军事医学研究院

参考传统作战兵棋和卫勤兵棋，遵循软件开发流程，通过需求分析确定使用对象、主要功能和功能模块，研究设计了战场疫情防控指挥兵棋推演系统。系统总体架构包括推演应用层、推演模型层和基础支撑层三层，由推演想定、推演环境、推演棋... 详细信息

参考传统作战兵棋和卫勤兵棋，遵循软件开发流程，通过需求分析确定使用对象、主要功能和功能模块，研究设计了战场疫情防控指挥兵棋推演系统。系统总体架构包括推演应用层、推演模型层和基础支撑层三层，由推演想定、推演环境、推演棋子、推演动作和推演规则五要素组成。运用该系统对战场疫情防控指挥进行推演，能够评估优化战场疫情防控处置指挥流程和方案。

关键词：联合作战疫情防控兵棋推演生防演习

乙型肝炎病毒稳定转染后宿主细胞高级染色质结构改变分析

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军事医学 2023年第9期47卷 662-667页

作者：江修宇郝晓娟周喆王学军杨骞军事科学院军事医学研究院生物信息中心北京100850

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)对肝细胞三维基因组学空间组织结构的影响。方法使用桥接高通量染色质构象捕获(BL‐Hi‐C)技术,获取HBV稳定转染细胞HepG2.CW与对照细胞HepG2的基因组三维空间互作信息,并联合转录组测序分析差异表达基因。通... 详细信息

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)对肝细胞三维基因组学空间组织结构的影响。方法使用桥接高通量染色质构象捕获(BL‐Hi‐C)技术,获取HBV稳定转染细胞HepG2.CW与对照细胞HepG2的基因组三维空间互作信息,并联合转录组测序分析差异表达基因。通过CCK‐8实验及Kaplan‐Meier生存分析方法分别检测细胞增殖活力,分析差异表达基因功能。结果BL‐Hi‐C实验获取了2株细胞的基因组三维互作信息,在50 kb分辨率下,HBV稳定转染细胞HepG2.CW与HepG2相比,16号染色体与22号染色体发生了染色体易位以及易位点染色体拓扑相关结构域(TAD)的融合变异。结合转录组数据发现,染色体易位点及TAD变异关联区域的22号染色体开放阅读框34(C22ORF34)与肌醇加氧酶(MIOX)出现明显变化。细胞生长曲线表明,HepG2.CW具有更高的细胞增殖活力。生存分析发现C22ORF34及MIOX基因与患者的生存预期密切相关。结论HBV稳定转染可引起HepG2细胞发生染色体易位及三维基因组结构改变,并导致相关区域内C22ORF34和MIOX基因的表达改变。

关键词：乙型肝炎病毒 HepG2细胞肝细胞癌三维基因组染色质易位拓扑相关结构域

肝细胞生长因子基因治疗促进大鼠放创复合伤愈合

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军事医学 2023年第2期47卷 111-115页

作者：卢育新马琼崔玉芳程晓晨肖凤君张庆林杜丽军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850

目的应用携带肝细胞生长因子(HGF)基因的质粒(pHGF)对大鼠放创复合伤进行基因治疗,探究其促愈作用。方法 120只SPF级雌性Wistar大鼠按体重随机分为单伤组、伤照组、伤照+阳性药(重组人表皮生长因子外用溶液,金因肽)治疗组(JYT组)和伤照... 详细信息

目的应用携带肝细胞生长因子(HGF)基因的质粒(pHGF)对大鼠放创复合伤进行基因治疗,探究其促愈作用。方法 120只SPF级雌性Wistar大鼠按体重随机分为单伤组、伤照组、伤照+阳性药(重组人表皮生长因子外用溶液,金因肽)治疗组(JYT组)和伤照+pHGF治疗组(HGF组),每组30只。大鼠经致伤和照射后建立放创复合伤模型,建模后即刻HGF组在创面一次性给予pHGF质粒,JYT组给予金因肽治疗,伤照组给予等体积的PBS。伤照后3、7、14、21、28和35 d描记伤口面积、检测外周血象和伤口组织羟脯氨酸含量,并进行病理检测和伤口肉芽组织毛细血管计数,研究pHGF对大鼠放创复合伤的促愈作用。结果伤照后3、28及35 d,大鼠体重及外周血白细胞计数显著降低。伤照后11 d内,HGF组伤口相对面积小于或显著小于伤照组(P<0.05)。伤照后7、14 d,HGF组羟脯氨酸含量明显高于JYT组(P<0.05)。毛细血管密度结果显示,伤照后3、7 d,HGF组肉芽组织毛细血管密度明显大于伤照组和JYT组(P<0.05);伤照后14 d,HGF组毛细血管密度小于伤照组(P<0.05)。病理检测结果显示,HGF组大鼠创面肉芽组织出现较早,成纤维细胞增生活跃,肉芽组织和新生毛细血管均较伤照组丰富,且愈合后期创面角质层生成和再上皮化过程明显较伤照组快。结论 pHGF能有效促进伤口区胶原和毛细血管形成、伤口区肉芽组织生成,以及角质形成细胞增殖,可明显促进大鼠放创复合伤的早期愈合。

关键词：放创复合伤肝细胞生长因子质粒基因治疗辐射损伤细胞外基质

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非洲猪瘟实时荧光RPA诊断方法建立及应用

中国农业科学 2022年第1期55卷 197-207页

作者：张静远缪发明陈腾李敏扈荣良宁夏大学生命科学学院军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所

【目的】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)自2018年首次暴发于我国沈阳后,迅速扩散至全国,对我国养猪业造成了沉重打击。研究针对其病原非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)建立一种快速核酸检测技术,为及时发现、准确处理... 详细信息

【目的】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)自2018年首次暴发于我国沈阳后,迅速扩散至全国,对我国养猪业造成了沉重打击。研究针对其病原非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)建立一种快速核酸检测技术,为及时发现、准确处理ASF疫情提供一种快速诊断方法。【方法】针对ASFV保守的B646L(p72)基因,设计并筛选合适的引物、探针组合,利用基于重组酶-聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)的实时荧光RPA方法,对反应体系、反应条件、样品处理步骤等进行优化;利用质控品,对检测方法的特异性和灵敏度进行评价。对1 009份临床样品进行检测,并利用OIE推荐的实时荧光定量PCR方法(qPCR)和病毒分离,进一步验证该方法的检测结果。【结果】筛选得到一套合适的引物、探针,建立了针对ASFV p72基因的实时荧光RPA检测方法,优化后的反应体系总体积为25μL,在实时荧光定量PCR仪器上,最适反应条件为39℃10 s,39℃20 s,40个循环,扩增反应时间约20 min;室温裂解法可取代传统核酸提取方法作为本检测的样品处理方法;使用优化后的条件,可在30 min内实现样品处理、核酸扩增和结果判定的整个过程,特异性评价结果显示本方法对猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、圆环病毒1型/2型(PCV1/2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)样品扩增结果均为阴性;敏感性评价结果显示本方法对基因I型、II型、IX型ASFV的模拟样品均可检出,对II型ASFV阳性模拟血样品可检测至10拷贝/μL,对已知阳性临床组织样品可检至1:103.0稀释度,与OIE推荐的实时荧光定量PCR(qPCR)方法的检测灵敏度一致。通过对1 009份临床样品进行检测,实时荧光RPA诊断方法检出17份阳性,其结果与qPCR方法完全一致;病毒分离获得17份阳性培养物。【结论】建立的实时荧光RPA核酸检测方法操作简便,耗时短,具有较高的灵敏度和特异性,为临床提供了一种新型、简单、特异、快速诊断非洲猪瘟的方法。

关键词：非洲猪瘟病毒重组酶聚合酶扩增实时荧光RPA 核酸检测诊断技术

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类泛素化蛋白酶8对T细胞活化与分化的影响

军事医学 2023年第10期47卷 735-739,747页

作者：徐光磊靳远晗张耀林程道海张纪岩曹俊霞军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所北京100850

目的探讨类泛素化蛋白酶8(SENP8)在T细胞活化和分化过程中的作用。方法C57BL/6背景的Senp8基因打靶小鼠(Senp8F/F小鼠,简称WT小鼠)与同背景的Cd4⁃Cre转基因小鼠交配,获得在T细胞中特异性缺失SENP8的小鼠(Senp8F/F;Cd4⁃Cre小鼠,简称KO小... 详细信息

目的探讨类泛素化蛋白酶8(SENP8)在T细胞活化和分化过程中的作用。方法C57BL/6背景的Senp8基因打靶小鼠(Senp8F/F小鼠,简称WT小鼠)与同背景的Cd4⁃Cre转基因小鼠交配,获得在T细胞中特异性缺失SENP8的小鼠(Senp8F/F;Cd4⁃Cre小鼠,简称KO小鼠),通过鼠尾基因组DNA PCR以及胸腺细胞免疫印迹实验进行基因型鉴定。流式细胞术分析SENP8缺失对稳态T细胞比例和数量的影响,并以李斯特菌尾静脉注射感染WT和KO小鼠,7 d后流式细胞术分析CD8^(+)T细胞活化、扩增、效应因子表达情况。结果PCR鉴定结果揭示,KO小鼠有Cd4⁃Cre基因和纯合的Loxp片段;免疫印迹结果显示,KO小鼠胸腺细胞中的SENP8蛋白表达下降;证明成功构建了T细胞中特异性敲除SENP8的小鼠模型。流式细胞术检测结果表明,CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞在稳态WT和KO小鼠脾脏中的比例和数量并无显著差异。李斯特菌感染7 d后,条件性缺失SENP8不影响CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞数量增加和活化标志分子CD44表达,也不影响CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞中干扰素γ(IFN⁃γ)和颗粒酶B(GzmB)的表达。结论T细胞中缺失SENP8分子不影响T细胞的活化、扩增及李斯特菌感染过程中T细胞的细胞毒作用。

关键词：神经前体细胞表达发育下调蛋白8 类泛素化蛋白酶8 T淋巴细胞淋巴细胞活化细胞分化单核细胞增生李斯特菌

基于内参辅助的新型冠状病毒荧光免疫层析方法

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军事医学 2023年第12期47卷 913-918页

作者：王子仪程小丹杨兴胜荣振王升启军事科学院军事医学研究院生物信息中心北京100850

目的将内参蛋白引入新型冠状病毒(SARS-CoV-2)荧光免疫层析检测体系,以监测样本检测各环节的有效性,提高检测准确率。方法聚乙烯亚胺(PEI)自组装法制备硅核双层量子点微球(SiO2-DQD),分别偶联内参抗体和SARS-CoV-2检测抗体。硝酸纤维... 详细信息

目的将内参蛋白引入新型冠状病毒(SARS-CoV-2)荧光免疫层析检测体系,以监测样本检测各环节的有效性,提高检测准确率。方法聚乙烯亚胺(PEI)自组装法制备硅核双层量子点微球(SiO2-DQD),分别偶联内参抗体和SARS-CoV-2检测抗体。硝酸纤维素膜双检测线上分别包被内参抗体和SARS-CoV-2的捕获抗体。基于双抗夹心免疫检测原理,构建基于内参辅助的SARS-CoV-2荧光免疫层析检测方法。结果荧光信号结果显示,在样本检测结果有效的条件下,该方法对SARS-CoV-2抗原的检测限可达0.01 ng/ml,且具有良好的特异性、稳定性。结论建立了快速的基于内参蛋白检测的SARS-CoV-2荧光免疫层析方法,为SARS-CoV-2抗原检测提供了质控对照,降低检测结果的假阴性率。

关键词：新型冠状病毒内参蛋白免疫层析量子点荧光

5-HT调控抗病毒先天免疫的作用及机制探究

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军事医学 2023年

作者：于希平李森李佩瑶张学敏李慧艳宋增庆军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心

目的探究经典神经递质五羟色胺（5-HT）对抗DNA病毒先天免疫的影响与作用机制。方法使用5-HT ELISA试剂盒检测1型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染后小鼠血液中5-HT含量变化；细胞水平使用5-HT或5-HT转运体抑制剂预处理后进行外源DNA转染或H... 详细信息

目的探究经典神经递质五羟色胺（5-HT）对抗DNA病毒先天免疫的影响与作用机制。方法使用5-HT ELISA试剂盒检测1型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染后小鼠血液中5-HT含量变化；细胞水平使用5-HT或5-HT转运体抑制剂预处理后进行外源DNA转染或HSV-1感染，Western印迹在蛋白质水平检测胞内cGAS-STING通路激活情况，实时定量PCR在mRNA水平检测Ⅰ型干扰素及病毒复制水平。体内使用5-HT给药后进行HSV-1感染，收集血样采用ELISA试剂盒检测血清Ⅰ型干扰素水平，实时定量PCR检测器官中病毒复制量。结果 HSV-1病毒感染小鼠后，小鼠血液内5-HT含量显著上调，在机体或细胞水平给予5-HT预处理均会抑制HSV-1病毒介导的Ⅰ型干扰素产生，同时病毒复制增强；机制研究发现5-HT可能通过5-HT转运体进入胞内发挥作用，抑制cGAS-STING通路关键蛋白磷酸化，进而抑制下游Ⅰ型干扰素基因的表达，从而影响宿主的抗病毒天然免疫能力。结论 5-HT可抑制机体cGAS-STING通路介导的抗DNA病毒先天免疫，有望为抗病毒药物研发找到新的靶点。

关键词：抗病毒免疫 1型单纯疱疹病毒 5-HT Ⅰ型干扰素 cGAS-STING通路

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轻度颅脑损伤诊断研究进展

军事医学 2023年第5期47卷 383-389页

作者：徐振华刘水蓉徐东刚江小霞军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所北京100850

轻度颅脑损伤(mTBI)是一种常见多发疾病。尤其在军队,指战员在军事训练或执行任务时很易发生mTBI,但缺乏标准化的指南用于现场快速诊断并决定是否本级留治或后送。目前检体诊断、神经影像学、电生理技术、实验室生物标志物检测和快速便... 详细信息

轻度颅脑损伤(mTBI)是一种常见多发疾病。尤其在军队,指战员在军事训练或执行任务时很易发生mTBI,但缺乏标准化的指南用于现场快速诊断并决定是否本级留治或后送。目前检体诊断、神经影像学、电生理技术、实验室生物标志物检测和快速便携诊断技术等都广泛应用于mTBI诊断。一些先进产品也相继问世,其中一些方法具有良好应用前景。笔者梳理了这些方法并作简要概括。

关键词：轻度颅脑损伤脑震荡诊断神经影像学电生理技术生物标志物快速便携诊断技术