检索结果-南通市图书馆

动物医学进展 2018年第12期39卷 80-84页

作者：纪雪邢新月梁冰王诗雨祝令伟刘军郭学军孙诗雯孙洋军事医学研究院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122

为获取长春地区鱼源大肠埃希菌的耐药性情况,采集市场及养殖场淡水鱼样品进行大肠埃希菌的分离鉴定。测定分离株对19种抗菌药物的耐药性,并检测9种耐药基因和25种毒力相关基因,测定ESBLs表型大肠埃希菌分离株的O抗原血清型。结果表明,32... 详细信息

为获取长春地区鱼源大肠埃希菌的耐药性情况,采集市场及养殖场淡水鱼样品进行大肠埃希菌的分离鉴定。测定分离株对19种抗菌药物的耐药性,并检测9种耐药基因和25种毒力相关基因,测定ESBLs表型大肠埃希菌分离株的O抗原血清型。结果表明,322份样品分离获得36株大肠埃希菌,分离率为11.2%,其中18株为A群,其余为B1群。分离株对头孢类抗生素、青霉素类抗生素、四环素和复方新诺明耐药性相对较高,耐药率不低于22%。9株分离株检测到四环素耐药基因tet(A),13株ESBLs表型菌株检测到1群blaCTX-M基因。ESBLs表型菌株的血清型中O164为优势血清型。部分菌株检测到毒力相关基因,包括fimC(94.4%)、ompT(30.6%)和ucD(5.6%)。结果表明,获得了长春地区鱼源大肠埃希菌带菌及耐药性情况,为淡水养殖鱼细菌性疾病的防控提供了一定的参考。

关键词：淡水鱼大肠埃希菌耐药性毒力相关基因

促黄体激素释放激素-TAT-p53融合蛋白制备及其对肿瘤细胞增殖作用的影响

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中国生物制品学杂志 2019年第8期32卷 848-852页

作者：马洪圆田园李泽鸿张国利吴广谋余晓颖陈云雨岳玉环军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118 皖南医学院药学院新药筛选与评价中心安徽芜湖241002

目的制备促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)-TAT-p53融合蛋白,探讨其抗肿瘤作用。方法以重组质粒pET28a-p53为模板,经PCR扩增目的基因,双酶切,克隆至原核表达载体p ET20b中,构建重组表达质粒p ET20b-LHRH... 详细信息

目的制备促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)-TAT-p53融合蛋白,探讨其抗肿瘤作用。方法以重组质粒pET28a-p53为模板,经PCR扩增目的基因,双酶切,克隆至原核表达载体p ET20b中,构建重组表达质粒p ET20b-LHRH-TAT-p53,并在E. coli中IPTG诱导表达,经金属螯合层析、DEAE弱阴离子交换层析纯化目的蛋白。取对数生长期的HeLa、BGC及MDCK细胞进行细胞活性试验,检测pET28a-p53蛋白活性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET20b-LHRH-TAT-p53构建正确;融合蛋白相对分子质量约54 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白55%;HeLa及BGC细胞加入纯化复性的重组蛋白后,细胞变圆、色暗、折光性变差,甚至裂解死亡,细胞死亡数增加,而MDCK细胞无变化;一定浓度范围内(25~120μg/m L)蛋白对HeLa及BGC细胞有明显的抑制作用。结论成功制备了LHRH-TAT-p53融合蛋白,该蛋白具有生物活性,对肿瘤细胞有杀伤作用。本研究为下一步制备靶向LHRH的肿瘤治疗药物提供了参考。

关键词：促黄体激素释放激素 TAT蛋白 p53基因肿瘤增殖

猪伪狂犬病病毒河北变异株的分离鉴定及其gE基因序列分析

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畜牧与兽医 2020年第1期52卷 90-97页

作者：崔欢张诚董世山赵宗正张春茂王中一付莹莹李佳明何笑崔明仙陈立功郭振东河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站河北保定071001 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122 北京农学院北京102206

河北省某猪场猪群已免疫伪狂犬病(pseudorabies,PR)gE基因缺失苗,但仍发生了伪狂犬病疫情。本研究经PCR检测、组织病理学观察、免疫组化染色、病毒分离鉴定、动物试验等,从疑似PR病料中分离鉴定了1株伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PR... 详细信息

河北省某猪场猪群已免疫伪狂犬病(pseudorabies,PR)gE基因缺失苗,但仍发生了伪狂犬病疫情。本研究经PCR检测、组织病理学观察、免疫组化染色、病毒分离鉴定、动物试验等,从疑似PR病料中分离鉴定了1株伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV),并对该病毒进行gE基因序列分析。结果表明,分离毒gE基因的开放阅读框由1 740 bp组成,编码580个氨基酸。该病毒gE基因与23株PRV参考毒株之间具有较高的同源性,核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.5%~99.9%和95.3%~99.7%,与HLJMDJ2013、HeBLP2014、AHSZ-16株核苷酸同源性最高,均为99.9%。与2012年以来分离的变异株(Fa株除外)的gE基因存在相同的独特分子变异特征。遗传进化分析表明,该病毒与其他亚洲毒株同属第1群。动物试验表明该株病毒对兔具有很强的致病性,攻毒组兔全部发生死亡,并能引起兔出现典型的伪狂犬病神经症状。本研究为河北省生猪健康养殖与疾病防疫提供了数据基础和警示预警。

关键词：猪伪狂犬病病毒分离鉴定 gE基因序列分析

猪戊型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2010年第4期30卷 449-452页

作者：邱蜜蜜孟轲音丁壮叶俊青丛彦龙李志杰刘美李少丽王昌庆吴昊吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

根据GenBank中注册的AJ272108等序列,参考有关文献,利用引物设计相关软件在HEV ORF2片段的保守区设计并合成1对引物及探针,采用TaqMan探针建立了荧光定量PCR法。以鉴定正确的质粒为模板建立标准曲线,Ct值线性范围为14.89~27.02,相关系数... 详细信息

根据GenBank中注册的AJ272108等序列,参考有关文献,利用引物设计相关软件在HEV ORF2片段的保守区设计并合成1对引物及探针,采用TaqMan探针建立了荧光定量PCR法。以鉴定正确的质粒为模板建立标准曲线,Ct值线性范围为14.89~27.02,相关系数为0.996。本试验建立的猪戊型肝炎病毒ORF2片段基因实时荧光定量PCR方法扩增效率高、线性范围广,为快速检测猪戊型肝炎病毒的绝对定量分析奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎实时荧光定量PCR TaqMan探针

基因1型狂犬病病毒一步法荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国人兽共患病学报 2011年第4期27卷 297-302,310页

作者：许运斌邵明富范金红孙彦伟席进涂长春吉林大学畜牧兽医学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所长春130122 广东省动物防疫监督总所广州510230

目的在我国狂犬病均由基因1型狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起。本研究针对RV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了检测RV核酸的一步法荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。方法与结果该... 详细信息

目的在我国狂犬病均由基因1型狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起。本研究针对RV N基因保守序列设计并合成了一套简并引物和Taqman探针,在优化反应条件的基础上,建立了检测RV核酸的一步法荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。方法与结果该方法能特异检测基因1型,不能检测基因2-7型和犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病病毒(CAV)、水泡性口炎病毒(VSV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)等5种非狂犬病病原体,其检测灵敏度可达到4.68个TCID50的病毒含量。用该方法对29份新鲜和5份腐败的临床犬脑组织样品进行检测,并与国际金标准确诊方法狂犬病荧光抗体染色法(FAT)和乳鼠脑内接种试验(MIT)及本实验室建立的套式RT-PCR方法进行比较。结果表明所建立的qRT-PCR与套式RT-PCR的符合率为100%,二者均检测出12份阳性的新鲜样品和5份阳性的腐败样品,而FAT只检测出12份阳性的新鲜样品和1份阳性的腐败样品,MIT只检测出12份阳性,未检测出阳性腐败样品。检测中FAT和MIT确诊的所有阳性样品在qRT-PCR检测均是阳性,而在FAT检测为阴性的4份腐败样品在qRT-PCR为阳性,说明所建立的qRT-PCR方法准确性达到了FAT和MIT的水平,而且灵敏度更高,更适合于腐败样品的检测。结论研究结果表明该qRT-PCR方法特异性好、灵敏度高、污染率低、操作简单,在我国动物狂犬病临床诊断上具有巨大的应用价值。

关键词：狂犬病病毒基因Ⅰ型一步法荧光定量RT-PCR

细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统辅助质粒的构建

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中华实验和临床病毒学杂志 2008年第4期22卷 247-250页

作者：黄莹扈荣良唐青吉林大学长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所脑炎室

目的构建细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统中所需的4个结构蛋白辅助质粒。方法利用RT-PCR方法扩增细胞适应株狂犬病毒的核蛋白（N）、磷酸化蛋白（P）、糖蛋白（G）、转录大蛋白（L）基因，测序结果正确后，分别连接表达载体，构建反... 详细信息

目的构建细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统中所需的4个结构蛋白辅助质粒。方法利用RT-PCR方法扩增细胞适应株狂犬病毒的核蛋白（N）、磷酸化蛋白（P）、糖蛋白（G）、转录大蛋白（L）基因，测序结果正确后，分别连接表达载体，构建反向遗传所需的4个功能性蛋白辅助质粒。结果成功扩增4个结构基因，经测序完全正确，并成功构建反向遗传体系中N蛋白、P蛋白、G蛋白、L蛋白的辅助表达质粒，酶切鉴定完全正确。结论成功构建狂犬病病毒拯救系统的4个辅助质粒，为此细胞适应株狂犬病病毒的拯救奠定基础。

关键词：狂犬病病毒质粒病毒结构蛋白质类

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猪圆环4型病毒Cap蛋白的原核表达

中国兽医学报 2021年第7期41卷 1229-1233页

作者：于成东哈卓王政李凯李秋璇孟媛李亭玉于桐金鑫鲁会军金宁一延边大学农学院吉林延吉133000 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122 扬州大学动物医学学院江苏扬州225000 吉林农业大学动物医学学院吉林长春130122

以本实验室扩增的内蒙猪圆环4型病毒(PCV4)毒株的ORF2基因序列为参考,对其密码子进行优化并送往公司进行质粒合成,通过设计特异性引物,扩增出Cap蛋白基因。将目的基因克隆至pET-28a载体,构建出pET28a-PCV4-Cap重组表达质粒。将重组质粒... 详细信息

以本实验室扩增的内蒙猪圆环4型病毒(PCV4)毒株的ORF2基因序列为参考,对其密码子进行优化并送往公司进行质粒合成,通过设计特异性引物,扩增出Cap蛋白基因。将目的基因克隆至pET-28a载体,构建出pET28a-PCV4-Cap重组表达质粒。将重组质粒转化至表达宿主菌BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达,制备PCV4 Cap重组蛋白。优化表达条件和SDS-PAGE分析结果显示,Cap重组蛋白能够在沉淀中大量表达且在IPTG终浓度为0.2 mmol/L、37℃诱导6 h条件下表达量最高,其约为27 kDa。经Western blot验证,条带单一,与预期结果相同。本试验结果为了解PCV4 Cap蛋白及建立PCV4血清流行病学快速检测方法奠定了基础。

关键词：猪圆环4型病毒(PCV4) 原核表达 Cap蛋白

22L毒株朊蛋白错误折叠循环扩增方法的建立

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中国畜牧兽医 2010年第2期37卷 71-75页

作者：李建疆李泽鸿万家余高宏伟吉林农业大学长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

参考Saborio和Soto创建的名为蛋白质错误折叠循环扩增(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)的方法建立一种22L毒株系朊蛋白错误折叠循环扩增方法,以便研究22L毒株系异常朊蛋白(scrapie PrP,PrPSc)的合成机制。在阴离子去污... 详细信息

参考Saborio和Soto创建的名为蛋白质错误折叠循环扩增(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)的方法建立一种22L毒株系朊蛋白错误折叠循环扩增方法,以便研究22L毒株系异常朊蛋白(scrapie PrP,PrPSc)的合成机制。在阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)存在的条件下,这种方法可以通过超声降解从而重复扩增产物,并在仓鼠脑匀浆中快速有效的模仿体内朊病毒PrPSc的复制,因此可以在几个小时内高浓度扩增PrPSc。已有试验结果发现,PrPSc体外转化率在使用粗提的脑组织匀浆时比使用纯化重组PrP更高,这个发现暗示着高效率的PrPSc转化可能还需要探索其他未知的宿主因素。研究结果表明,建立的这种改良的PMCA技术可用于研究PrPSc合成的生物化学机制,以此来进行诊断与治疗方法的研究。

关键词：朊病毒 22L毒株蛋白质错误折叠循环扩增技术

狂犬病病毒糖蛋白基因重组慢病毒载体的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2011年第2期24卷 130-132,140页

作者：房丽君黄世威王颖刘晔张守峰扈荣良吉林大学畜牧兽医学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130062

目的构建狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组慢病毒表达载体,并进行鉴定。方法将狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因克隆至慢病毒载体pLVX-ZsGreen-IRES上,筛选阳性重组克隆。将质粒pLVX-ZsGreen-IRES-SRV9G、包膜质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2共转... 详细信息

目的构建狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组慢病毒表达载体,并进行鉴定。方法将狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因克隆至慢病毒载体pLVX-ZsGreen-IRES上,筛选阳性重组克隆。将质粒pLVX-ZsGreen-IRES-SRV9G、包膜质粒pMD2.G和包装质粒psPAX2共转染293T包装细胞系,通过荧光显微镜观察报告基因表达情况。收集上清,经浓缩后接种293T细胞,进行重组慢病毒感染细胞的鉴定;用限制性内切酶切除质粒pLVX-ZsGreen-IRES-SRV9G绿色荧光蛋白基因,采用直接免疫荧光试验检测狂犬病病毒糖蛋白的表达情况。结果重组慢病毒表达载体经酶切和测序证明构建正确。荧光显微镜下可见重组慢病毒感染的293T细胞有大量绿色荧光出现,病毒滴度为3×107 IU/ml;直接免疫荧光检测表明,糖蛋白基因在293T细胞内获得有效表达。结论成功构建了狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组慢病毒载体,为狂犬病基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白类慢病毒绿色荧光蛋白质类