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cell-in-cell的研究进展

中国病理生理杂志 2024年第8期40卷 1511-1519页

作者：冯锦丽孙强张家堂解放军总医院第八医学中心神经内科北京100091 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 解放军总医院第一医学中心神经内科医学部北京100093

cell-in-cell(CIC)是指一个或多个活细胞进入到另一个活细胞中,形成细胞套叠结构并产生生物学效应的过程。早在100年前这一现象就已经被发现,但直到近10年才引起重视。随着研究的深入,人们发现CIC现象存在于许多生物系统和疾病中,在进... 详细信息

cell-in-cell(CIC)是指一个或多个活细胞进入到另一个活细胞中,形成细胞套叠结构并产生生物学效应的过程。早在100年前这一现象就已经被发现,但直到近10年才引起重视。随着研究的深入,人们发现CIC现象存在于许多生物系统和疾病中,在进化、发育、稳态和疾病中具有重要的生理和病理意义,尤其在肿瘤中具有重要的临床研究价值。目前有5种已知的CIC结构形式:cell canibalism、phagoptosis、enclysis、entosis和emperipolesis。本文就上述5种CIC结构的细胞构成类型、生物学特性、分子机制、病理生理学特点等进行综述,以期更好地认识这一现象,探讨CIC现象在人类疾病诊断、治疗和预后中潜在的临床意义。

关键词： cell-in-cell 机制病理生理学肿瘤

基质金属蛋白酶响应性脑源性神经营养因子控释材料的合成与表征

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解放军医学杂志 2024年

作者：黑俊如王翠宋梦文谢胜强王秉贤兰晓娟张涵博程岗刘志强杨锡琴张剑宁解放军医学院解放军总医院第一医学中心神经外科医学部军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所解放军总医院第六医学中心神经外科

目的研制基质金属蛋白酶（MMP）响应性透明质酸（HA）基脑源性神经营养因子（BDNF控释材料，以期为创伤性脑损伤的干预及损伤修复提供新的治疗方案。方法 HA经过氨基化处理后，与Sulfo-SMCC羧基缩合成酰胺，再与谷胱甘肽（GSH）进行连... 详细信息

目的研制基质金属蛋白酶（MMP）响应性透明质酸（HA）基脑源性神经营养因子（BDNF控释材料，以期为创伤性脑损伤的干预及损伤修复提供新的治疗方案。方法 HA经过氨基化处理后，与Sulfo-SMCC羧基缩合成酰胺，再与谷胱甘肽（GSH）进行连接，合成HA-GSH；通过分子克隆技术经Bam HI和Eco RI双酶切，DNA测序后构建重组谷胱甘肽S-转移酶（GST）-金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-BDNF表达质粒，在大肠埃希菌原核表达系统中诱导表达GST-TIMP-BDNF重组蛋白，采用离子交换层析分离纯化，Westernblotting验证纯化后的重组蛋白；在MMP稀释液中分别加入PBS、MMP抑制剂Marimastat和不同浓度（0.4、0.6、0.8mg/ml）的GST-TIMP-BDNF或GST-BDNF，采用MMP活性检测试剂盒分析不同组别MMP-2的活性，评价该重组蛋白对MMP的抑制作用。提取大鼠原代神经元，培养后建立谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂（RSL3）诱导神经元铁死亡模型，采用免疫荧光染色检测GSTTIMP-BDNF对神经元损伤的影响。结果 MRI氢谱鉴定结果显示，成功合成了HA-GSH;Western blotting检测结果显示，利用大肠埃希菌原核表达系统成功表达了含GST标签的重组蛋白GST-TIMPBDNF;MMP活性检测结果显示，重组蛋白GST-TIMP-BDNF对MMP-2活性的抑制作用优于GST-BDNF(P<0.05)；免疫荧光染色结果显示，RSL3处理后加入重组蛋白GST-TIMP-BDNF的大鼠神经元荧光强度明显增高（P<0.05）。结论成功研制了一种MMP响应性HA基BDNF控释材料，对神经元损伤具有一定的保护作用。

关键词：透明质酸基质金属蛋白酶脑源性神经营养因子创伤性脑损伤控释

补肾活血方对帕金森病模型小鼠回肠组织TLR/NF-κB通路及肠道菌群的影响

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中医杂志 2024年第10期65卷 1038-1045页

作者：齐小荣郝斐然汤响林黎发根王雨佳王亮谌盈帆杨明会李敏中国人民解放军总医院第六医学中心中医医学部北京海淀100048 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院

目的从肠道菌群探讨补肾活血方治疗帕金森病(PD)的可能作用机制。方法将72只雄性C57/BL6J小鼠随机分为空白组、模型组、美多芭组及补肾活血方低、中、高剂量组,每组12只。空白组小鼠腹腔注射10 ml/kg生理盐水,其余各组小鼠采用腹腔注射... 详细信息

目的从肠道菌群探讨补肾活血方治疗帕金森病(PD)的可能作用机制。方法将72只雄性C57/BL6J小鼠随机分为空白组、模型组、美多芭组及补肾活血方低、中、高剂量组,每组12只。空白组小鼠腹腔注射10 ml/kg生理盐水,其余各组小鼠采用腹腔注射浓度为3 mg/ml的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)30 mg/kg诱导PD小鼠模型,均每天1次,连续7天。造模成功后,补肾活血方低、中、高剂量组分别给予补肾活血方7.5、15、30 g/(kg·d)灌胃,美多芭组给予多美多芭片112.5 mg/(kg·d)灌胃,空白组和模型组予15 ml/(kg·d)蒸馏水灌胃,均每天灌胃1次,连续14天。采用爬杆实验、转棒实验、抓力实验和负重游泳实验评估小鼠行为学指标;16S rRNA高通量测序技术分析各组小鼠肠道菌群改变;Western Blot法测定小鼠回肠组织Toll样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)通路炎症因子[包括Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)]蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠爬杆触底时间延长,抓力减小,转棒持续时间和游泳持续时间缩短,回肠组织中TLR2、TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-17蛋白表达均升高(P<0.01)。与模型组比较,美多芭组和补肾活血方低、中、高剂量组爬杆触底时间缩短,抓力增加,美多芭组和补肾活血方高剂量组转棒持续时间延长,回肠组织TLR2、TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-17蛋白表达均降低,而仅有补肾活血方高剂量组游泳持续时间延长(P<0.05或P<0.01)。与补肾活血方低剂量组比较,补肾活血方中、高剂量组爬杆触底时间缩短(P<0.05或P<0.01);补肾活血方高剂量组抓力增加,TLR2、TLR4、IL-17蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。肠道菌群结果显示,与空白组比较,模型组Dominance指数、Pielou_e指数、Shannon指数、Simpson指数差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,美多芭组Shannon指数、Chao1指数、Observed_otus指数,以及补肾活血方高剂量组Chao1指数、Observed_otus指数、Dominance指数、Pielou_e指数、Shannon指数、Simpson指数差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。在门水平上,各组差异具有统计学意义的菌门相对丰度类别包括变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门(P<0.05或P<0.01);在属水平上,各组差异具有统计学意义的菌属相对丰度类别包括Muribaculaceae、阿克曼菌属、幽门螺杆菌(P<0.05或P<0.01)。结论补肾活血方治疗PD的可能作用机制是通过重构紊乱的肠道菌群结构,减轻炎症反应进而达到改善PD运动功能的目的。

关键词：帕金森病补肾活血方肠道菌群炎症反应 Toll样受体核因子κB

关节镜下经大转子周围间隙横向松解髂胫束治疗外侧弹响髋

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中华骨科杂志 2024年第1期44卷 18-24页

作者：吴毅东于康康李中耀甘露贾琪赵衷源贺仰郭智凯李春宝解放军总医院第四医学中心骨科医学部运动医学科北京100048

目的分析关节镜下经大转子周围间隙横向松解髂胫束治疗外侧弹响髋的临床疗效。方法回顾性分析2021年5月至2022年6月于解放军总医院第四医学中心骨科医学部运动医学科接受关节镜下经大转子周围间隙横向松解髂胫束治疗的双侧外侧弹响髋患... 详细信息

目的分析关节镜下经大转子周围间隙横向松解髂胫束治疗外侧弹响髋的临床疗效。方法回顾性分析2021年5月至2022年6月于解放军总医院第四医学中心骨科医学部运动医学科接受关节镜下经大转子周围间隙横向松解髂胫束治疗的双侧外侧弹响髋患者30例(大转子周围间隙组),男12例、女18例,年龄(32.5±8.2)岁(范围17~51岁)。选取同期接受关节镜下经髂胫束外表面横向松解髂胫束(髂胫束外表面组)的30例患者作对照,男13例、女17例,年龄(29.5±6.8)岁(范围11~45岁)。比较两组患者术前、术后6个月和末次随访时的疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、改良Harris髋关节评分(modified Harris hip score,mHHS)、臀肌挛缩症功能量化评分(gluteal muscle contracture disability scale,GDS)。结果所有患者均顺利完成手术并获得随访,随访时间为(17.5±3.3)个月(范围12~25个月)。两组患者末次随访的VAS评分均小于术前,差异有统计学意义(P0.05)。不同时间点mHHS评分组间比较的差异均无统计学意义(P>0.05)。大转子周围间隙组术前、术后6个月和末次随访的GDS分别为[47.0(35.8,64.5)]分、[90.0(81.0,94.0)]分、[93.5(89.8,98.0)]分,髂胫束外表面组分别为[51.0(38.0,60.8)]分、[90.0(84.0,94.3)]分、[93.5(89.0,96.0)]分。两组患者GDS评分组内比较的差异均有统计学意义(P0.05)。不同时间点GDS组间比较的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论关节镜下经大转子周围间隙横向松解髂胫束治疗外侧弹响髋可有效减轻髋部疼痛、改善髋关节功能,临床效果满意,可作为经髂胫束外表面横向松解的一种替代治疗。

关键词：髋关节关节镜检查肌筋膜松解疗法治疗结果

有机磷水解酶异源表达纯化及抗乙基对氧磷中毒能力初步评价

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中国药理学与毒理学杂志 2024年

作者：马铭翟亚楠王顺业张中华李前高静军事科学院军事医学研究院中国人民解放军联勤保障部队第988医院药剂科

目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH)，初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株，采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化，对纯化产物进行蛋白质谱鉴定；以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数... 详细信息

目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH)，初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株，采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化，对纯化产物进行蛋白质谱鉴定；以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数Km,Vmax),kcat和kcat/Km;12只SD大鼠随机分为OPH组和溶剂对照组，OPH组按1 mg·kg-1剂量iv给予OPH溶液，对照组给予等体积生理盐水，给药后两组立刻sc给予2倍半数致死量(LD50乙基对氧磷(0.86 mg·kg-1)染毒，观察大鼠状态，对中毒症状进行评分。对存活大鼠每隔24 h重复sc给予2倍LD50乙基对氧磷，根据大鼠存活情况与中毒症状分别绘制生存曲线与症状评分图，评价OPH的抗有机磷中毒能力。结果成功制备了OPH的大肠杆菌表达菌株，经过两步纯化后由十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳表征得单一条带，OPH纯度较高，经蛋白质谱测定制备蛋白与目标蛋白序列一致；以乙基对氧磷为底物时，OPH的Km=7.5×10-5mol·L-1,Vmax=2.2×10-7mol·L-1·s-1,kcat=158.4 s-1,kcat/Km=2.1×106L·mol-1·s-1；对照组大鼠sc给予2倍LD50乙基对氧磷后，出现严重中毒症状，15 min内全部死亡，实验组大鼠在首次染毒后均未出现中毒症状，连续染毒后中毒症状逐渐加重直至第4天全部死亡。结论成功制备高纯度OPH，且OPH在大鼠体内能有效对抗乙基对氧磷中毒。

关键词：有机磷化合物生物清除剂有机磷水解酶乙基对氧磷酶动力学参数

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慢性咳嗽：现状与展望

实用医学杂志 2024年

作者：刘路祝筱姬钟玉绪同济大学附属东方医院胶州医院呼吸内科中国人民解放军军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所

慢性咳嗽（chronic cough,CC）是常见的呼吸道症状，其发病率高达10%～20%。慢性咳嗽的危害包括患者所经历的物理效应（如应激性尿失禁、睡眠障碍、胸痛）、心理后果（如失望、焦虑抑郁状态）以及社交障碍（如社交忧虑/孤立和生活质量... 详细信息

慢性咳嗽（chronic cough,CC）是常见的呼吸道症状，其发病率高达10%～20%。慢性咳嗽的危害包括患者所经历的物理效应（如应激性尿失禁、睡眠障碍、胸痛）、心理后果（如失望、焦虑抑郁状态）以及社交障碍（如社交忧虑/孤立和生活质量下降）。因此，慢性咳嗽一直是困惑患者和临床医生的难题。本文结合国内外文献新理念，就慢性咳嗽概念、流行病学、发病机制、病因构成、临床表现及辅助检查、诊断与鉴别诊断、治疗及展望等方面进行阐述，供同道参考与借鉴，以推动更深入的相关临床研究。

关键词：慢性咳嗽咳嗽高敏综合征诊断/治疗研究进展新理念

特立帕肽治疗骨质疏松性骨折中国专家共识(2024版)

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中华医学杂志 2024年第17期104卷 1456-1465页

作者：中国康复技术转化与发展促进会骨质疏松性骨折加速康复专业委员会中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病委员会骨与关节学组中国医师协会骨科医师分会骨质疏松工作委员会林华徐又佳刘强吕厚辰朱秀芬不详南京大学医学院附属鼓楼医院骨科南京210008 苏州大学附属第二医院骨科苏州215000 山西白求恩医院骨科太原030032 解放军总医院骨科医学部

骨质疏松性骨折是骨质疏松最严重的并发症,是骨骼在骨质疏松病变的基础上发生的一种特殊类型的病理性骨折,具有愈合困难、再骨折风险高、致残致死率高、治疗难度大、治疗时间长的特点,且再骨折具有“级联效应”。各国指南建议,骨质疏松... 详细信息

骨质疏松性骨折是骨质疏松最严重的并发症,是骨骼在骨质疏松病变的基础上发生的一种特殊类型的病理性骨折,具有愈合困难、再骨折风险高、致残致死率高、治疗难度大、治疗时间长的特点,且再骨折具有“级联效应”。各国指南建议,骨质疏松性骨折患者和极高危骨折风险患者应首先考虑促成骨治疗。特立帕肽是中国目前唯一已被批准应用于临床的促成骨类药物,在治疗骨质疏松性骨折时具有促进骨折愈合、降低再骨折风险、改善骨微结构等临床疗效。针对目前特立帕肽临床使用标准与规范的不足,由中国康复技术转化与发展促进会骨质疏松性骨折加速康复专业委员会、中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病委员会骨与关节学组以及中国医师协会骨科医师分会骨质疏松工作委员会联合组织相关学科专家起草制订本共识。本共识制订遵循改良Delphi法,形成8条循证医学推荐意见,旨在提出科学规范应用特立帕肽的方法和注意事项,强调特立帕肽应用对于骨质疏松性骨折患者治疗的重要性。

关键词：骨质疏松骨质疏松性骨折特立帕肽专家共识

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白藜芦醇减轻大鼠胰岛β细胞瘤细胞低氧损伤

营养学报 2024年第1期46卷 69-74页

作者：张岭郑桂玲厉彦超蒲玲玲刘伟丽陈照立军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所天津300050 联勤保障部队第九八三医院天津300142 中国人民解放军32183部队医院白城137000

目的研究白藜芦醇减轻大鼠胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)低氧损伤的作用。方法将INS-1细胞分为三组,即常氧对照组(control)、低氧组(hypoxia)、低氧及白藜芦醇组(hypoxia+RSV);采用正常培养方法培养常氧对照组,用CCK8检测不同低氧时间(6、12... 详细信息

目的研究白藜芦醇减轻大鼠胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)低氧损伤的作用。方法将INS-1细胞分为三组,即常氧对照组(control)、低氧组(hypoxia)、低氧及白藜芦醇组(hypoxia+RSV);采用正常培养方法培养常氧对照组,用CCK8检测不同低氧时间(6、12、24、48 h)的细胞增殖情况,选择合适的时间条件构建低氧模型并用于下一步研究;再以不同浓度的白藜芦醇(8、10、12、15μmol/L)提前干预12 h,并进行前期设定的低氧条件处理,用CCK8检测合适的浓度条件,构建白藜芦醇干预模型并用于下一步研究。以组织活性氧试剂盒及线粒体超氧化物试剂盒检测氧化应激水平;线粒体膜电位及ATP水平检测线粒体功能;流式细胞仪分析检测凋亡;胰岛素定量检测试剂盒检测胰岛素分泌量;实时定量反转录检测Sirt1、Pdx1、Glut2的表达水平;蛋白免疫印迹检测相应蛋白水平。结果与常氧对照组相比,低氧组细胞增殖降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.01),线粒体功能降低(P<0.05),胰岛素分泌减少(P<0.05),Sirt1、Pdx1、Glut2基因及其相应蛋白表达水平降低(P<0.05)。而白藜芦醇干预可以明显减轻低氧应激损伤(P<0.05),促进增殖(P<0.05),逆转凋亡(P<0.01),改善线粒体功能(P<0.05),促进胰岛素分泌(P<0.05),促进Sirt1、Pdx1、Glut2基因及其相应蛋白表达水平(P<0.05)。结论白藜芦醇可以保护低氧造成的INS-1细胞氧化应激损伤,改善线粒体功能,抗凋亡,并促进胰岛素功能性基因表达,促进胰岛素分泌。

关键词：白藜芦醇低氧大鼠胰岛β细胞瘤系INS-1细胞

针对副溶血性弧菌toxR基因的RPA-CRISPR/Cas13a荧光快速检测方法的建立及应用

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中华医院感染学杂志 2024年 2081-2086页

作者：侯雅超邢微微王亚楠刘新萍董优优周光陈昌国河北北方学院医学检验学院解放军总医院第六医学中心检验科军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所解放军总医院第一医学中心检验科

目的探讨并建立非专业实验室场景下恒温、快速及简便的检测副溶血性弧菌的方法。方法本研究针对副溶血性弧菌toxR基因设计特异性引物和成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)RNA(crRNA),建立基于重组酶聚合酶扩增(RPA)结合CRISPR及其相... 详细信息

目的探讨并建立非专业实验室场景下恒温、快速及简便的检测副溶血性弧菌的方法。方法本研究针对副溶血性弧菌toxR基因设计特异性引物和成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)RNA(crRNA),建立基于重组酶聚合酶扩增(RPA)结合CRISPR及其相关蛋白13a(CRISPR-Cas13a)的反应体系,采用自配十二烷基硫酸钠(SDS)核酸快速提取试剂提取样本全基因组,并结合荧光法实现检测结果的可视化判读。结果利用副溶血性弧菌菌株ATCC 17802和其他3种非副溶血性弧菌(溶藻弧菌、河流弧菌和梅氏弧菌)以及3种临床上常见腹泻致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌)对RPA-CRISPR/Cas13a荧光法的特异性进行验证,结果显示特异性为100.00%;对副溶血性弧菌基因组DNA进行倍比稀释并检测,该方法最低检出限为10～2 copies/μl。最后,将建立的方法应用于野生型副溶血性弧菌检测,检测结果与TaqMan定量聚合酶链式反应(TaqMan-qPCR)检测结果及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定结果一致。结论本研究建立了一种针对toxR基因的RPA-CRISPR/Cas13a检测方法,具有简便、快速、特异性强、结果判读可视化等优点,为非专业实验室场景下的副溶血性弧菌快速检测提供了较好工具。

关键词：副溶血性弧菌重组酶聚合酶扩增成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a 快速检测可视化