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丙二醇联合肝细胞生长因子修饰牙髓干细胞外泌体保护人表皮细胞的放射损伤

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中国组织工程研究 2024年第13期28卷 2002-2008页

作者：刘云靳嘉岩刘玉斌李强任博媛刘赫吴祖泽周钢桥靳继德贵州大学医学院贵州省贵阳市550025 军事医学研究院辐射医学研究所北京市100850 空军军医大学基础医学院陕西省西安市710032

背景:肿瘤放疗以及核事故等原因引起的放射性皮肤损伤救治仍旧是一个严重的医学问题,单一的防治手段均难以达到有效的治疗结果,寻找新的综合治疗手段是重要的研究方向。目的:观察丙二醇联合肝细胞生长因子修饰牙髓干细胞来源外泌体对于... 详细信息

背景:肿瘤放疗以及核事故等原因引起的放射性皮肤损伤救治仍旧是一个严重的医学问题,单一的防治手段均难以达到有效的治疗结果,寻找新的综合治疗手段是重要的研究方向。目的:观察丙二醇联合肝细胞生长因子修饰牙髓干细胞来源外泌体对于人表皮放射性损伤细胞模型的保护作用及相关作用机制。方法:①使用携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒感染人牙髓干细胞,超速离心法分离制备外泌体,即*** DPSC-Exo。②通过X射线照射诱导人表皮细胞HaCaT放射损伤,细胞分别于照射前用丙二醇预处理,照射后用*** DPSC-Exo处理。通过CCK-8法测定细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,PCR检测P21和P53的表达水平。结果与结论:丙二醇、***-Exo、***-Exo+丙二醇均可显著改善HaCaT细胞的生长抑制、减少细胞凋亡、提高细胞增殖和迁移能力,显示出较好的辐射防护效果,且***-Exo+丙二醇联合作用效果更好。此外,***-Exo+丙二醇能够减轻细胞G2/M期阻滞,降低细胞周期调控基因P53和P21的表达。综上所述,丙二醇预处理联合***-Exo能够有效保护放射诱导的HaCaT细胞损伤,为辐射性皮肤损伤的防治提供了新的思路和有效方法。

关键词：放射性皮肤损伤辐射保护 1,2-丙二醇干细胞外泌体

谷胱甘肽过氧化物酶3修饰的间充质干细胞通过降低氧化损伤减轻放射性肺损伤

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军事医学 2024年第7期48卷 487-494页

作者：翟瑞台福敏丁可昕葛常辉郑晓飞付汉江安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院放射生物学北京市重点实验室北京100850

目的探讨谷胱甘肽过氧化物酶3(GPx3)修饰的间充质干细胞(MSC)对小鼠放射性肺损伤(RILI)的保护作用及机制。方法20 Gy ^(60)Co单剂量照射C59BL/6小鼠肺部,经尾静脉注射GPx3修饰的MSC,不同时间点收取肺组织,进行切片染色观察病理变化;通... 详细信息

目的探讨谷胱甘肽过氧化物酶3(GPx3)修饰的间充质干细胞(MSC)对小鼠放射性肺损伤(RILI)的保护作用及机制。方法20 Gy ^(60)Co单剂量照射C59BL/6小鼠肺部,经尾静脉注射GPx3修饰的MSC,不同时间点收取肺组织,进行切片染色观察病理变化;通过实时定量PCR(qPCR)检测炎症相关因子表达水平,生化实验检测丙二醛(MDA)、H_(2)O_(2)和8⁃羟基鸟嘌呤(8⁃OHG)含量,反转录阻断联合双引物扩增PCR检测RNA损伤情况。结果GPx3修饰的MSC能够显著改善辐射后肺组织的病理损伤、抑制炎症反应以及纤维化进程,GPx3修饰后MSC能够更好地清除活性氧(ROS),并减少脂质过氧化产物MDA和RNA氧化损伤的8⁃OHG修饰。结论GPx3修饰的MSC通过减少ROS累积以降低氧化损伤进而减轻RILI,GPx3修饰的MSC可以提高RILI的治疗效果。

关键词：谷胱甘肽过氧化物酶3 间充质干细胞氧化损伤放射性肺损伤 8⁃羟基鸟嘌呤

三维培养间充质干细胞来源的分泌组物对海水浸泡合并创伤小鼠海马神经元的保护作用

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解放军医学杂志 2024年

作者：兰晓娟谢胜强王秉贤马文静陈巧汨程岗吕文英张剑宁安徽医科大学第五临床医学院海军临床学院解放军总医院第六医学中心神经外科解放军总医院第一医学中心神经外科医学部军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所南华大学衡阳医学院安徽医科大学基础医学院

目的探究三维培养的间充质干细胞(MSCs)释放的分泌组物对海水浸泡(SW)合并拉伸损伤(SI)神经元的作用，为SW合并创伤性脑损伤(TBI)后的神经元修复提供新思路。方法采用悬滴法培养MSCs，收集含有MSCs释放的分泌组物的条件培养基(CM)。... 详细信息

目的探究三维培养的间充质干细胞(MSCs)释放的分泌组物对海水浸泡(SW)合并拉伸损伤(SI)神经元的作用，为SW合并创伤性脑损伤(TBI)后的神经元修复提供新思路。方法采用悬滴法培养MSCs，收集含有MSCs释放的分泌组物的条件培养基(CM)。采用小鼠海马神经元(HT22细胞)建立SW合并SI细胞模型。将HT22细胞随机分为对照组、SI组、SI+SW组、SI+CM组和SI+SW+CM组。采用CCK-8法检测各组细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，细胞划痕实验观察细胞迁移能力，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-2关联X蛋白(Bax)和铁死亡相关蛋白长链酰基辅酶A合酶4(ACSL4)、环氧化酶-2(Cox-2)的表达水平。结果 15%浓度海水浸泡12 h后，HT22细胞活力明显下降(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示，处理12 h后，与对照组比较，SI组和SI+SW组HT22细胞活力均明显下降(P<0.05)；经MSCs分泌组物处理后，SI+CM组细胞活力明显高于SI组(P<0.0001),SW+SI+CM组细胞活力明显高于SI+SW组(P<0.001)。流式细胞术检测结果显示，SI组和SI+SW组细胞凋亡率明显高于对照组，而SI+CM组细胞凋亡率明显低于SI组，SI+SW+CM组细胞凋亡率明显低于SI+SW组，差异均有统计学意义(P<0.05)。Westernblotting检测结果显示，与对照组比较，SI组和SI+SW组Bcl-2表达水平降低(P<0.01或P<0.0001),Bax、ACSL4和Cox-2表达水平升高(P<0.01或P<0.0001)；与SI组比较，SI+CM组细胞Bcl-2蛋白表达水平增高(P<0.05)，而Bax、ACSL4和Cox-2蛋白表达水平降低(P<0.05)；与SI+SW组比较，SI+SW+CM组细胞Bcl-2表达水平升高(P<0.01),Bax、ACSL4和Cox-2蛋白表达水平降低(P<0.01或P<0.001)。细胞划痕实验结果显示，12h和24h时，SI组和SI+SW组细胞迁移率低于对照组(P<0.01或P<0.0001)，而SI+CM组细胞迁移率高于SI组(P<0.01),SI+SW+CM组细胞迁移率高于SI+SW组(P<0.0001)。结论悬滴法培养的MSCs分泌组物可减轻SW合并TBI神经元的损伤，有望成为SW合并TBI的潜在治疗措施。

关键词：间充质干细胞分泌组物海水浸泡创伤性脑损伤

神经粘附分子CHL1在神经系统中的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2007年第9期34卷 925-928页

作者：黄欣朱玲玲范明军事医学科学院基础医学研究所脑保护和可塑性研究室北京100850

粘附分子通过介导细胞间相互作用发挥其在发育、再生和突触修饰等方面的重要作用.神经细胞粘附分子CHL1(close homologue of L1)是近年发现的粘附分子,属于粘附分子免疫球蛋白超家族,集中表达于神经系统,通过亲异性作用(heterophilic in... 详细信息

粘附分子通过介导细胞间相互作用发挥其在发育、再生和突触修饰等方面的重要作用.神经细胞粘附分子CHL1(close homologue of L1)是近年发现的粘附分子,属于粘附分子免疫球蛋白超家族,集中表达于神经系统,通过亲异性作用(heterophilic interaction)介导细胞与细胞、细胞与胞外基质的相互作用,进而参与神经系统的发育、轴突的生长、迁移及导向等过程.

关键词：免疫球蛋白超家族神经粘附分子CHL1 神经系统

基于NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路探讨温阳解郁方调节小鼠海马突触可塑性的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第6期30卷 39-47页

作者：孟丹华佘楷杰孟晓莹巩子汉梁文青王英梁媛岳广欣中国中医科学院中医基础理论研究所北京100700 河南中医药大学基础医学院郑州450000

目的:探讨温阳解郁方改善“母婴分离+束缚应激(MS+RS)”抑郁小鼠神经炎症,保护突触可塑性的作用机制。方法:仔鼠出生第0天(PD0)随机分为空白组和造模组。造模采用母婴分离联合束缚应激21 d建立抑郁模型,PD21离乳后剔除雌鼠,随机分为模... 详细信息

目的:探讨温阳解郁方改善“母婴分离+束缚应激(MS+RS)”抑郁小鼠神经炎症,保护突触可塑性的作用机制。方法:仔鼠出生第0天(PD0)随机分为空白组和造模组。造模采用母婴分离联合束缚应激21 d建立抑郁模型,PD21离乳后剔除雌鼠,随机分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组、氟西汀组,每组15只,PD21~PD111各给药组药混饲料给药,给药剂量分别为5.85、12.03、16.71 g·kg^(-1),2.6 mg·kg^(-1)。糖水偏好、开放旷场、O迷宫及新物体识别行为学实验评估小鼠焦虑抑郁和学习记忆能力;免疫组化法(IHC)观察海马小胶质细胞离子钙接头蛋白-1(Iba-1);高效液相色谱法(HPLC)检测海马去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测海马白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β、突触素(Syn)、突触后致密物95(PSD95)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠糖水偏好率、5 min中央运动时间、运动总距离、开臂停留时间和认知指数明显降低(P可塑性,减轻MS+RS小鼠抑郁样行为,其综合效果优于温阳方和解郁方。

关键词：温阳解郁方 NOD样受体蛋白3(NLRP3) 小胶质细胞神经炎症突触可塑性

基于BDNF/Akt/mTOR信号通路探讨温阳解郁方调控海马神经元凋亡和突触可塑性的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第6期30卷 48-57页

作者：孟丹华佘楷杰孟晓莹巩子汉梁文青王英梁媛岳广欣中国中医科学院中医基础理论研究所北京100700 河南中医药大学基础医学院郑州450000

目的:探讨温阳解郁方调节“母婴分离+束缚应激(MS+RS)”抑郁小鼠海马神经元凋亡改善突触可塑性的机制。方法:仔鼠出生第0天(PD0)随机分为空白组10只和造模组50只。造模采用MS+RS建立抑郁模型,PD21离乳后随机分为模型组、温阳组、解郁组... 详细信息

目的:探讨温阳解郁方调节“母婴分离+束缚应激(MS+RS)”抑郁小鼠海马神经元凋亡改善突触可塑性的机制。方法:仔鼠出生第0天(PD0)随机分为空白组10只和造模组50只。造模采用MS+RS建立抑郁模型,PD21离乳后随机分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组、氟西汀组,每组10只,PD21~PD111分组给药。糖水偏好、开放旷场、O迷宫及新物体识别行为实验评估小鼠焦虑抑郁和学习记忆能力;免疫组化法(IHC)检测小鼠海马突触后致密物95(PSD95)表达情况;原位末端标记法(TUNEL)染色检测小鼠海马神经元凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)、磷酸化酪氨酸蛋白激酶/酪氨酸蛋白激酶(p-TrkB/TrkB)、磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B(p-Akt/Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR/mTOR)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、突触后致密蛋白95(PSD95)、突触素(Syn)蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠糖水偏好程度、中央区停留时间、运动总距离、开臂停留时间和认知指数显著减少(P保护海马突触结构和功能,缓解模型组小鼠抑郁样行为,其综合疗效及分子机制效果优于温阳方和解郁方。

关键词：温阳解郁方脑源性神经营养因子(BDNF)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 海马神经元凋亡突触可塑性

补中益气汤对高原低氧大鼠肠道屏障的保护作用研究

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环球中医药 2024年第8期17卷 1484-1491页

作者：程小玲蒲玲玲徐洪宝王光瑞陈照立李震宇刘伟丽军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所天津300050 山西大学中医药现代研究中心

目的评价补中益气汤对高原低氧暴露大鼠小肠黏膜损伤的调控作用。方法选用7周龄雄性Wistar大鼠18只,适应性饲养7天后采用随机数字表法分成对照组、低氧暴露组、补中益气汤干预组,每组6只。各组动物预先灌胃7天后,除对照组大鼠外,其余采... 详细信息

目的评价补中益气汤对高原低氧暴露大鼠小肠黏膜损伤的调控作用。方法选用7周龄雄性Wistar大鼠18只,适应性饲养7天后采用随机数字表法分成对照组、低氧暴露组、补中益气汤干预组,每组6只。各组动物预先灌胃7天后,除对照组大鼠外,其余采用低压氧舱模拟海拔高度6000米进行高原低氧暴露诱导肠黏膜损伤。记录大鼠体质量和摄食量的变化;苏木精—伊红染色观察空肠组织形态变化,生化法检测大鼠血清髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性,酶联免疫吸附法检测胃泌素(gastrin,GAS)水平;二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)染色检测空肠组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;硫代巴比妥酸法和比色法检测血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;通过免疫蛋白印迹实验检测空肠组织中紧密连接蛋白闭锁蛋白、闭锁小带-1蛋白及闭合蛋白的表达情况。结果与对照组相比,低氧暴露组大鼠体质量和摄食量明显减少(P所恢复(P<0.01);大鼠血清中的DAO和MPO含量显著降低,GAS分泌增加(P<0.01);大鼠血清中的SOD、GSH-PX含量明显升高,MDA水平降低(P<0.01);大鼠空肠组织紧密连接蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论补中益气汤可显著改善高原低氧暴露导致的肠黏膜损伤,其可能与改善机体氧化应激损伤,提高肠黏膜紧密连接蛋白的表达有关。

关键词：高原低氧补中益气汤氧化应激肠黏膜损伤紧密连接蛋白

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神经黏附分子NB-3在转基因小鼠脑的发育表达

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解剖学报 2009年第2期40卷 183-186页

作者：赵华赵彤黄欣刘朝晖吴丽颖朱玲玲范明军事医学科学院基础医学研究所脑保护和可塑性研究室

目的检测NB-3在小鼠大脑组织中不同时期的表达情况。方法采用带LacZ基因的NB-3基因敲除的杂合子小鼠,分别取E12、E14、E16、E18、P0、P7、P14及成年小鼠的脑组织固定,采用X-gal染色方法检测LacZ基因产物β-半乳糖苷酶的表达以显示NB-3... 详细信息

目的检测NB-3在小鼠大脑组织中不同时期的表达情况。方法采用带LacZ基因的NB-3基因敲除的杂合子小鼠,分别取E12、E14、E16、E18、P0、P7、P14及成年小鼠的脑组织固定,采用X-gal染色方法检测LacZ基因产物β-半乳糖苷酶的表达以显示NB-3的表达及定位。结果***-3在胚胎发育期间从E14开始有微弱的表达,后逐渐在侧脑室周围、皮层、丘脑、下丘脑及海马等部位表达。其中在皮层中的表达主要集中在Ⅱ/Ⅲ、Ⅴ层。***-3在出生后小鼠大脑中的表达明显升高,在P7时表达最高,此后稍有下降直至成年。***-3在成年小鼠大脑组织中的表达分布广泛。表达最强的部位分别是大脑皮层的II/III、V层、梨状皮层、杏仁核周皮质、丘脑、下丘脑以及海马的CA1区等。结论NB-3在发育和成体小鼠中枢神经系统中均有表达,且不同时期的表达量有所不同。提示NB-3在神经系统的发育过程中可能具有重要的作用。

关键词：神经细胞黏附分子 NB-3 中枢神经系统 X-gal染色转基因小鼠

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猴痘病毒蛋白的原核表达及免疫效果评价

病毒学报 2024年第4期40卷 772-778页

作者：王雪琛李涛杨晓岚孙娅坤王慧王凤雪内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室北京100071

猴痘是由猴痘病毒引起的一种人兽共患疾病。研发特异性预防和治疗猴痘的疫苗或药物成为目前全球研究重点之一。本研究以猴痘主要抗原蛋白其中的A29L、E8L、M1R为研究基础,加入His标签构建质粒、原核表达、纯化,并对表达蛋白进行SDS⁃PAGE... 详细信息

猴痘是由猴痘病毒引起的一种人兽共患疾病。研发特异性预防和治疗猴痘的疫苗或药物成为目前全球研究重点之一。本研究以猴痘主要抗原蛋白其中的A29L、E8L、M1R为研究基础,加入His标签构建质粒、原核表达、纯化,并对表达蛋白进行SDS⁃PAGE及Western blot鉴定其特异性。后续将3种抗原蛋白与CpG⁃ODN 1826单佐剂、铝单佐剂或CpG与铝复合佐剂三次免疫小鼠,通过酶联免疫吸附实验及病毒蚀斑减少中和实验测定三价疫苗的结合抗体和中和抗体能力。结果表明,重组蛋白A29L、E8L、M1R诱导后均可溶性表达且表达量及纯度良好。三价疫苗以CpG⁃ODN 1826佐剂联合铝佐剂施行肌肉注射一组表现出较好的结合抗体和中和抗体能力。本研究为研发特异性针对猴痘的疫苗或药物提供基础。

关键词：猴痘猴痘病毒原核表达蛋白纯化佐剂