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cAMP对人骨髓瘤细胞的IL-6信号转导功能及细胞增殖的抑制作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第3期20卷 244-247页

作者：宋伦黎燕沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所

目的　研究PKA途径激活 (或胞内cAMP水平升高 )后对人骨髓瘤细胞的IL 6信号转导功能及细胞生长的影响。方法　采用PKA途径激动剂Foskolin(FK)和cAMP类似物 8 Br cAMP刺激人骨髓瘤细胞系———Sko 0 0 7,分别通过MTT方法和凝胶阻滞电泳 (... 详细信息

目的　研究PKA途径激活 (或胞内cAMP水平升高 )后对人骨髓瘤细胞的IL 6信号转导功能及细胞生长的影响。方法　采用PKA途径激动剂Foskolin(FK)和cAMP类似物 8 Br cAMP刺激人骨髓瘤细胞系———Sko 0 0 7,分别通过MTT方法和凝胶阻滞电泳 (electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)方法检测FK和 8 Br cAMP对Sko细胞的生长及其IL 6信号转导功能的影响。结果　FK和 8 Br cAMP可对Sko细胞的生长及其IL 6的Jak STAT信号途径的活化起双重抑制作用 ,但对另一条IL 6信号途径———Ras NF IL 6途径的活化无显著影响。结论　 ***途径的激活可调控骨髓瘤细胞系中IL 6的Jak STAT信号转导途径 ;2 .Sko细胞中PKA途径激活所介导的细胞增殖抑制作用与IL 6的Jak STAT信号途径的活化抑制作用相关。

关键词：白细胞介素-6 多发性骨髓瘤信号转导 cAMP

人hCGβ真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第7期26卷 623-626页

作者：张亮王宇江乐阎瑾琦王越胡明明于继云军事医学科学院基础医学研究所

目的：构建人hCGβ真核表达载体，稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，建立稳定表达人hCGβ的小鼠黑色素瘤细胞系。方法：采用PCR方法扩增出人hCGβ全长基因的cDNA编码区序列，利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES—neo中，并... 详细信息

目的：构建人hCGβ真核表达载体，稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，建立稳定表达人hCGβ的小鼠黑色素瘤细胞系。方法：采用PCR方法扩增出人hCGβ全长基因的cDNA编码区序列，利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES—neo中，并加入酶切位点和6×His标签，得到重组表达质粒pIRES—neo—hCGβ-（His）6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，经G418加压筛选出阳性克隆。RT—PCR、Western blot及免疫荧光检测人hCGβ在B16细胞中的表达。结果：经限制性内切酶鉴定及序列分析，pIRES—neo—hCGβ一（His）6重组体构建正确，最终建立的表达人hCGβ基因的B16细胞系阳性率高于90％。结论：成功构建了真核表达载体plRES—neo—hCGβ-（His）6，建立的稳定转染人hCGβ小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达hCGβ基因。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究人hCGβ抗肿瘤基因疫苗的功能提供了良好的实验基础，为hCGβ在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。

关键词： hCGβ 稳定转染小鼠黑色素瘤细胞肿瘤免疫治疗

可溶性gp130和gp130反义核酸对IL-6诱导的靶基因启动子活性的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 1997年第4期17卷 271-275页

作者：倪长源沈倍奋黎燕董家新赖春宁任蕴芳军事医学科学院基础医学研究所

ｇｐ１３０是ＩＬ－６信号转导子，ＩＬ－６介导的信号转导起始于ｇｐ１３０与ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒα形成的复合物。为了研究ｇｐ１３０胞外区的结构与功能，在肝癌细胞ＨｅｐＧ２中建立了检测ＩＬ－６诱导基因表达强弱的方法，并观察... 详细信息

ｇｐ１３０是ＩＬ－６信号转导子，ＩＬ－６介导的信号转导起始于ｇｐ１３０与ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒα形成的复合物。为了研究ｇｐ１３０胞外区的结构与功能，在肝癌细胞ＨｅｐＧ２中建立了检测ＩＬ－６诱导基因表达强弱的方法，并观察了含胞外区全长（５９７个氨基酸）及氨基端３０４个氨基酸残基的ｇｐ１３０突变体，以及ｇｐ１３０反义核酸对ＩＬ－６生物学效应的影响。证明两个突变体和反义核酸均拮抗ＩＬ－６信号，为进一步研究ＩＬ－６受体拮抗剂奠定了基础。

关键词：白细胞介素-6 gp130 肝肿瘤基因表达

丙型肝炎病毒核心蛋白寡核苷酸适配子的筛选与鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第5期22卷 578-581页

作者：詹林盛孙红琰彭剑淳邵宁生王全立军事医学科学院输血研究所军事医学科学院基础医学研究所

目的　筛选、鉴定抗HCV核心蛋白 (C蛋白 )的寡核苷酸适配子 (aptamers)。方法　利用systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment (SELEX)技术 ,以HCVC蛋白为靶分子 ,从体外合成的 81bp随机单链DNA文库中筛选与HCVC蛋白特异结... 详细信息

目的　筛选、鉴定抗HCV核心蛋白 (C蛋白 )的寡核苷酸适配子 (aptamers)。方法　利用systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment (SELEX)技术 ,以HCVC蛋白为靶分子 ,从体外合成的 81bp随机单链DNA文库中筛选与HCVC蛋白特异结合的寡核苷酸适配子 ,并进行了解离常数 (Kd)测定和适配子序列测定。再分别利用ClustalW软件包和DNAFoldingSever分析适配子的一级结构和二级结构。结果　经过 9轮循环筛选 ,随机ssDNA库与HCVC蛋白的结合率从 0 .5 %上升到32 .5 %。所有的一级结构没有共同的同源序列 ,但可分 5个家族 ,每个家族具有共同的保守序列。二级结构分析表明 ,适配子形成的茎环、凸环结构可能是与HCVC蛋白结合的结构基础。其中寡核苷酸适配子C4与HCVC蛋白特异结合的亲和力最高 ,Kd值为 6 8nmol L。

关键词：丙型肝炎丙型肝炎病毒核心蛋白 SELEX技术寡核苷酸适配子

凋亡蛋白和Nmi的相互作用及作用位点的筛选鉴定

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第3期34卷 369-372页

作者：孙国敬童新董燕梅柱中孙志贤军事医学科学院放射医学研究所军事医学科学院放射医学研究所北京100850

为研究来源于鸡贫血病毒的小分子蛋白质———凋亡蛋白 (apoptin)诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制 ,利用酵母双杂交系统从人白细胞cDNA文库筛选凋亡蛋白相互作用蛋白质 ,核苷酸序列分析及同源性检索表明 ,其中一个约为 1.2kb的克隆与Nmi(N M... 详细信息

为研究来源于鸡贫血病毒的小分子蛋白质———凋亡蛋白 (apoptin)诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制 ,利用酵母双杂交系统从人白细胞cDNA文库筛选凋亡蛋白相互作用蛋白质 ,核苷酸序列分析及同源性检索表明 ,其中一个约为 1.2kb的克隆与Nmi(N Mycinteractionprotein)高度同源。细胞免疫共沉淀实验结果显示 ,在哺乳动物细胞水平仍能够检测到凋亡蛋白与全长Nmi的特异相互作用。利用构建好的分别缺失C端 11个氨基酸、中间 33～46位氨基酸和二者均缺失的 3个凋亡蛋白突变体进行相互作用位点研究 ,结果表明凋亡蛋白的 33～ 46位氨基酸(核外运信号 )对于凋亡蛋白与Nmi的相互作用是必需的 ,而C端核定位信号 /DNA结合序列对于凋亡蛋白与Nmi的相互作用不是充分必要的

关键词：凋亡蛋白酵母双杂交 Nmi 免疫共沉淀

丙型肝炎病毒不同功能区抗体与病毒核糖核酸的相关性

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中华肝脏病杂志 2003年第12期11卷 754-755页

作者：张贺秋王国华陈坤修冰水宋晓国刘荷中凌世淦军事医学科学院基础医学研究所分子病毒学研究室北京100850

目的探讨慢性丙型肝炎患者体内不同功能区抗体的免疫应答及与HCV RNA浓度的关系。方法克隆表达丙型肝炎病毒不同功能区优势表位抗原蛋白(HCV-C、NS_3、NS_4、NS_5和HVR1),建立单片段ELISA法检测抗HCV抗体,并以定量HCV RT—PCR法检测... 详细信息

目的探讨慢性丙型肝炎患者体内不同功能区抗体的免疫应答及与HCV RNA浓度的关系。方法克隆表达丙型肝炎病毒不同功能区优势表位抗原蛋白(HCV-C、NS_3、NS_4、NS_5和HVR1),建立单片段ELISA法检测抗HCV抗体,并以定量HCV RT—PCR法检测患者血清中HCV RNA浓度。结果慢性丙型肝炎患者体内HCV不同功能区抗体检出有较大的差异,HCV-C、HVR1检出最高,其次为NS_3、NS_4和NS_5。结论 HCV—C、NS_3、NS_4、和HVR1抗体滴度与HCV RNA浓度均有较好的相关性。

关键词：丙型肝炎病毒抗体病毒核糖核酸相关性免疫应答 ELISA法 RT-PCR法

重组人FK506结合蛋白12的基体辅助激光解析电离飞行时间质谱分析

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分析化学 2001年第2期29卷 125-127页

作者：王红霞张学敏杨松成裴武红李松军事医学科学院国家生物医学分析中心!北京100850 军事医学科学院基础医学研究所!北京100850 军事医学科学院毒物药物研究所!北京100850

用ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ测定了具有生物活性的重组人ＦＫ５０６（结合蛋白１２（ｒｈＦＫＢＰ１２）的分子量和胰蛋白酶酶解的肽质量指纹谱，实验测定结果与理论计算值一致。证明其一级结构是正确的，在表达、复性和纯化过程中没... 详细信息

用ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ测定了具有生物活性的重组人ＦＫ５０６（结合蛋白１２（ｒｈＦＫＢＰ１２）的分子量和胰蛋白酶酶解的肽质量指纹谱，实验测定结果与理论计算值一致。证明其一级结构是正确的，在表达、复性和纯化过程中没有氨基酸的丢失、变异和修饰。

关键词： FK结合蛋白12 基体辅助激光解析电离飞行时间质谱肽质量指纹谱

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B细胞激活因子在免疫调节中的作用

中国实验血液学杂志 2006年第3期14卷 631-634页

作者：杜建芳王嘉玺徐东刚军事医学科学院基础医学研究所分子遗传研究室北京100850

B细胞激活因子(BAFF)是调节B淋巴细胞存活和成熟的细胞因子,属于TNF家族成员。BAFF有三个受体,分别为BCMA,TACI和BAFF-R。近几年来的研究表明,BAFF及其受体在抗体类型转换、生发中心维持、T细胞共刺激等方面发挥着重要的免疫调节作用,... 详细信息

B细胞激活因子(BAFF)是调节B淋巴细胞存活和成熟的细胞因子,属于TNF家族成员。BAFF有三个受体,分别为BCMA,TACI和BAFF-R。近几年来的研究表明,BAFF及其受体在抗体类型转换、生发中心维持、T细胞共刺激等方面发挥着重要的免疫调节作用,对自身免疫疾病、淋巴瘤和B细胞免疫缺陷的治疗具有潜在的应用前景。本文就BAFF的结构与表达,BAFF受体,生物学功能及其临床应用作一综述。

关键词： B细胞激活因子 B细胞激活因子受体免疫调节

小鼠Foxp3基因慢病毒载体构建及其在DC2.4细胞的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第7期27卷 721-724页

作者：宫玉波黄一飞黎燕韩根成刘勇王大江杜改萍余继锋解放军总医院眼科北京100853 军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室北京100850

目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pGC... 详细信息

目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pGC-FU-Foxp3与pHelper1.0质粒和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,制备携带Foxp3基因的慢病毒Lentivirus-Foxp3。Lentivirus-Foxp3感染体外培养的DC细胞,流式细胞术(FCM)检测感染后的DC细胞Foxp3表达。结果:构建的慢病毒载体pGC-FU-Foxp3经PCR鉴定和测序正确,包装慢病毒Lentivirus-Foxp3滴度为2×108TU/mL。慢病毒Lentivirus-Foxp3感染DC2.4细胞后Foxp3表达明显增加。结论:成功构建了小鼠Foxp3基因的慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-Foxp3能有效感染DC细胞。

关键词： Foxp3 慢病毒 DC2.4