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肌肽对大鼠失血性休克再灌注后肝组织损伤的保护作用

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中华肝脏病杂志 2006年第12期14卷 942-943页

作者：樊凤艳黄灵芝王广义郑伟王波周虹王字玲北京军事医学科学院野战输血研究所 100850

组织或器官在一定时间缺血缺氧后会造成损伤，血供恢复后损伤进一步加重称为缺血一再灌注损伤（IRI）。在肝外科IRI是造成术后肝功能衰竭的重要原因之一。肌肽是含组氨酸的二肽类物质的代表，因其具有抗氧化、保护膜完整性、鳌合金属离... 详细信息

组织或器官在一定时间缺血缺氧后会造成损伤，血供恢复后损伤进一步加重称为缺血一再灌注损伤（IRI）。在肝外科IRI是造成术后肝功能衰竭的重要原因之一。肌肽是含组氨酸的二肽类物质的代表，因其具有抗氧化、保护膜完整性、鳌合金属离子、质子缓冲、调节巨噬细胞活性等功能，被认为是具有前景的抗缺血损伤药物。研究认为肌肽对肾脏、心脏、脑的IRI具有保护作用，但肌肽抗肝脏IRI的作用研究较少。

关键词：肝再灌注损伤肌肽丙二醛

Lin^-CD_(34)^-与Lin^-CD_(34)^+细胞差异表达基因的鉴定

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中华血液学杂志 2003年第8期24卷 423-425页

作者：王冬梅杨莉李梁冯凯白慈贤陈琳裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的　克隆并鉴定Lin-CD3 4-细胞区别于Lin-CD3 4+细胞的可能与其性状相关的基因。方法　以Lin-CD3 4-细胞作为检测对象 ,Lin-CD3 4+细胞作为驱动细胞 ,应用抑制消减杂交技术构建Lin-CD3 4-细胞的cDNA消减文库。选取部分克隆测序 ,测序... 详细信息

目的　克隆并鉴定Lin-CD3 4-细胞区别于Lin-CD3 4+细胞的可能与其性状相关的基因。方法　以Lin-CD3 4-细胞作为检测对象 ,Lin-CD3 4+细胞作为驱动细胞 ,应用抑制消减杂交技术构建Lin-CD3 4-细胞的cDNA消减文库。选取部分克隆测序 ,测序结果与GenBank进行同源性比较和功能分析。结果　共获得 593个含有插入片段的克隆 ,片段的长度为 30 0～ 50 0bp。随机选取 53条EST进行测序 ,其中 37条EST代表了 1 0个已知基因 ,其余 1 6条EST代表了 4个未知序列。结论　利用抑制消减杂交技术鉴定出部分Lin-CD3 4-细胞特异表达的基因 ,可能与Lin-CD3

关键词： Lin^-CD34^-细胞 Lin^-CD34^+细胞造血干细胞抑制消减杂交技术差异表达基因

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甲氧基聚乙二醇修饰人红细胞血型抗原的研究

中国生物医学工程学报 2006年第1期25卷 1-5页

作者：檀英霞王捷熙李素波王颖丽章扬培军事医学科学院野战输血研究所北京100850

红细胞输注是输血医学的主体,化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)与红细胞膜共价结合后,可遮蔽红细胞表面血型抗原,使红细胞血型抗原呈阴性,即形成通用型红细胞,对临床输血具有重要意义。研究了mPEG修饰对红细胞血型抗原、膜流动性的影响;红... 详细信息

红细胞输注是输血医学的主体,化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)与红细胞膜共价结合后,可遮蔽红细胞表面血型抗原,使红细胞血型抗原呈阴性,即形成通用型红细胞,对临床输血具有重要意义。研究了mPEG修饰对红细胞血型抗原、膜流动性的影响;红细胞被修饰程度;mPEG与红细胞结合的稳定性;mPEG在体内的代谢情况。结果表明,mPEG能遮蔽红细胞上的血型抗原;mPEG与红细胞结合稳定;mPEG修饰红细胞的比率随浓度增高而增大;mPEG在小鼠体内24 h后基本被代谢,且在体内无蓄积。mPEG修饰的红细胞为解决临床急用稀有血型和配型困难(如自身溶血性贫血,AIHA)等问题提供了有意义的参考。

关键词：甲氧基聚乙二醇红细胞血型抗原输血

GST-GP302融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 282-283,287页

作者：苏丽赵敬湘王波张玉华管利东王字玲军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的 :在大肠杆菌中表达血小板糖蛋白GPIbα之vWF结合区(GP30 2 )与谷胱甘肽S 转移酶GST的融合蛋白并制备其抗血清。方法 :将GP30 2片断插入GST融合表达载体 pGEX 4T 1,重组载体酶切鉴定后 ,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST GP30 2... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中表达血小板糖蛋白GPIbα之vWF结合区(GP30 2 )与谷胱甘肽S 转移酶GST的融合蛋白并制备其抗血清。方法 :将GP30 2片断插入GST融合表达载体 pGEX 4T 1,重组载体酶切鉴定后 ,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST GP30 2融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物。包涵体经变性复性后免疫新西兰白兔 ,制备抗血清 ,ELISA、Westernblot检测重组抗原的免疫活性。结果 :重组质粒酶切鉴定表明 ,GP30 2基因已正确插入到 pGEX 4T 1中 ,经IPTG诱导后 ,表达出相对分子质量 (Mr)约为 5 90 0 0的融合蛋白 ,获得了ELISA效价为 1× 10 -5的多克隆抗体。Westernblot证明所制备的多抗可以与血小板糖蛋白特异性结合。结论 :GP30 2片断在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体。

关键词：血小板GPIbα 大肠杆菌表达多克隆抗体

人巨细胞病毒编码US28分子可促进CREB相关转录活性

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第5期25卷 385-388页

作者：温冬青张艳宇吕丽萍周锡鹏闫舫马平许金波军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的:构建人巨细胞病毒(HCMV)编码的趋化因子受体类似物US28基因真核表达载体并观察其对通用转录因子磷酸化的环单磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)的表达量和相关转录活性的影响。方法:从病毒原液中扩增人巨细胞病毒编码US28基因,构建... 详细信息

目的:构建人巨细胞病毒(HCMV)编码的趋化因子受体类似物US28基因真核表达载体并观察其对通用转录因子磷酸化的环单磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)的表达量和相关转录活性的影响。方法:从病毒原液中扩增人巨细胞病毒编码US28基因,构建含US28基因真核表达载体,将该载体与CREB转录活性报告基因和恒定表达的内对照质粒组成的双萤光素酶报告基因系统共转染至HEK293细胞中,Western blot法检测CREB活性形式p-CREB的表达量,并分析US28促使的CREB相关的相对转录活性变化。结果:经PCR鉴定及测序结果证实,所构建的重组载体正确。US28可有效促进p-CREB的表达量与其提升转录的功能活性,揭示了US28与CREB相关转录活性增强的密不可分的关系。结论:人巨细胞病毒可利用宿主通用转录因子CREB增强相关基因转录,从而有可能促进病毒的活化进程。

关键词：人巨细胞病毒 US28 CREB因子人巨细胞病毒活化

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Piwi家族:干细胞分裂中的重要调控基因

生理科学进展 2003年第2期34卷 139-141页

作者：谢小燕裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所北京100850

Piwi是果蝇卵巢中发现的一个对干细胞的分裂有调控作用的基因。Piwi家族蛋白的表达在各种生物中具有广泛的保守性 ,而且大多参与干细胞自我更新的调控。在果蝇卵巢中 ,Piwi对生殖干细胞的调控方式包括外源调控和内源调控两种 ,而高等动... 详细信息

Piwi是果蝇卵巢中发现的一个对干细胞的分裂有调控作用的基因。Piwi家族蛋白的表达在各种生物中具有广泛的保守性 ,而且大多参与干细胞自我更新的调控。在果蝇卵巢中 ,Piwi对生殖干细胞的调控方式包括外源调控和内源调控两种 ,而高等动物中的同源物Hiwi只以自调控的方式控制干细胞的分裂和分化。Piwi家族蛋白含有保守结构域Piwibox和PAZ。

关键词： Piwi家族干细胞分裂调控基因分化

快速测定人血浆中洛匹那韦/利托那韦浓度的LC-MS/MS方法建立

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国际药学研究杂志 2016年第1期43卷 162-166页

作者：时美慧李俭甘慧郑颖孟志云窦桂芳军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的建立LC-MS/MS方法快速测定人血浆中洛匹那韦（lopinavir,LPV）/利托那韦（ritonavir,RTV）（克力芝）的含量。方法血浆样品采用蛋白沉淀法处理后,以甲醇-水（0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 ml/min,色谱柱采用Thermo Hyp... 详细信息

目的建立LC-MS/MS方法快速测定人血浆中洛匹那韦（lopinavir,LPV）/利托那韦（ritonavir,RTV）（克力芝）的含量。方法血浆样品采用蛋白沉淀法处理后,以甲醇-水（0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 ml/min,色谱柱采用Thermo Hypersil GOLD柱（2.1 mm×100 mm,5 mm）,柱温为25℃,采用ESI源以选择反应监测（SRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对为LPV（m/z 629.3→155.0）、RTV（m/z 721.3→268.0）,内标MS275（m/z 377.1→359.2）。结果两药在人血浆中浓度在20~1000 ng/ml时,线性关系良好（r〉0.994）。日内、日间精密度,低浓度〈20%,中高浓度〈15%,回收率为86.5%~96.3%。结论该检测方法简单、快速、灵敏、准确,适用于两药的临床血药浓度监测及其药物代谢动力学研究。

关键词：洛匹那韦利托那韦血药浓度监测液相色谱-质谱联用

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基因工程α-半乳糖苷酶的制备及其性质研究

生物工程学报 2003年第2期19卷 223-226页

作者：高新杨军李素波刘泽澎章扬培军事医学科学院野战输血研究所北京100850

在获得可分泌表达α 半乳糖苷酶基因工程毕赤酵母菌株的基础上 ,尝试了基因工程α 半乳糖苷酶在 5L发酵罐中的表达以及从发酵液中纯化α 半乳糖苷酶的研究。在 4L无机盐培养基中接种 0 .4LpPIC9K Gal GS115培养物 ,最终得到 3 .5L发酵... 详细信息

在获得可分泌表达α 半乳糖苷酶基因工程毕赤酵母菌株的基础上 ,尝试了基因工程α 半乳糖苷酶在 5L发酵罐中的表达以及从发酵液中纯化α 半乳糖苷酶的研究。在 4L无机盐培养基中接种 0 .4LpPIC9K Gal GS115培养物 ,最终得到 3 .5L发酵液。离心所得上清中总蛋白含量为 2 .1g L。根据发酵液中目的蛋白含量高、杂质少等特点 ,设计了如下的纯化流程 :离心→超滤→阳离子交换层析→脱盐→浓缩。纯化后电泳银染结果呈单一蛋白带 ,总回收率 41%。通过测定米氏常数等生化性质对重组酶进行鉴定后 ,完成了人B型红细胞的酶解实验。结果表明 ,从发酵液中纯化的α 半乳糖苷酶可将B型红细胞改造成O型红细胞。本研究同时在数量和质量上为α 半乳糖苷酶在众多领域的广泛应用奠定了基础。

关键词：基因工程 α—半乳糖苷酶制备性质血型改造发酵

丙酮酸钠对失血性休克大鼠缺血/再灌注损伤的保护作用

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中国应用生理学杂志 2007年第3期23卷 264-268页

作者：管利东王字玲赵莲王波王广义魏广智周虹军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的:研究丙酮酸钠对失血性休克后缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:制作失血性休克大鼠模型,回输全血,同时分别给予生理盐水、谷胱甘肽和丙酮酸钠适量,于再灌注后3h处死动物。检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(GOT)的活性、组织丙... 详细信息

目的:研究丙酮酸钠对失血性休克后缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:制作失血性休克大鼠模型,回输全血,同时分别给予生理盐水、谷胱甘肽和丙酮酸钠适量,于再灌注后3h处死动物。检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(GOT)的活性、组织丙二醛(MDA)的含量和髓过氧化物酶(MPO)的活性,观察心、肝、肺和肾组织的病理变化。结果:丙酮酸钠组与生理盐水组相比,血浆LDH和GOT的活性降低,肝、肺和肾组织MDA的含量下降,心、肺和肾组织MPO活性降低,效果优于谷胱甘肽。心、肝、肺和肾组织形态学观察显示,丙酮酸钠使组织损伤减轻。结论:丙酮酸钠对失血性休克后再灌注损伤具有保护作用。其作用机制可能与清除氧自由基、减少中性粒细胞的浸润、减轻炎性反应有关。

关键词：丙酮酸钠失血性休克缺血/再灌注损伤