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牛源副结核分枝杆菌MAP3732c基因的原核表达与多克隆抗体的制备

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东北农业大学学报 2024年第4期55卷 42-49页

作者：马聿田李阳李晓宇其勒木格吉林台张文彦希尼尼根内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 鄂尔多斯市动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯017010

为表达副结核分枝杆菌MAP3732c蛋白,研究构建原核表达质粒pET28a-MAP3732c,诱导表达鉴定后采用His标签亲和层析纯化获得MAP3732c重组蛋白,多次免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测其抗体效价。结果表明,成功构建克隆重... 详细信息

为表达副结核分枝杆菌MAP3732c蛋白,研究构建原核表达质粒pET28a-MAP3732c,诱导表达鉴定后采用His标签亲和层析纯化获得MAP3732c重组蛋白,多次免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测其抗体效价。结果表明,成功构建克隆重组质粒T1-MAP3732c与表达重组质粒p ET28a-MAP3732c;在IPTG终浓度为0.5 mmol·L^(-1)、37℃条件下成功诱导MAP3732c重组蛋白表达;SDS-PAGE结果表明,MAP3732c重组蛋白大小约为28 ku,且以包涵体形式存在;Western blot鉴定结果显示,重组蛋白与His抗体和牛源副结核病阳性血清均有良好免疫反应、阴性血清无非特异性结合;ELISA方法检测结果显示,抗MAP3732c多克隆抗体效价为1:204800。研究为副结核分枝杆菌MAP3732c蛋白免疫原性分析及副结核病检测方法建立提供理论参考。

关键词：副结核分枝杆菌 MAP3732c 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

延边地区羊腹泻大肠杆菌分离鉴定、毒力基因与耐药性分析

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内蒙古农业大学学报(自然科学版) 2024年

作者：陈明泽朴春光朴春浩张颖卢世豪崔京花芦静孟凡奇梁晚枫赵达卓延边大学农学院动物医学系和龙动物疫病预防控制中心汪清动物疫病预防控制中心延边州动物疫病预防控制中心南票区动物疫病预防控制中心

（目的）为解决困扰延边地区养殖户的羊大肠杆菌感染引起的腹泻问题，分离鉴定延边地区引起羊腹泻的大肠杆菌，并研究其致病性，耐药性以及毒力基因携带情况，为该病的治疗和预防提供参考依据。（方法）试验采集了反复发病羊场患病羊肛... 详细信息

（目的）为解决困扰延边地区养殖户的羊大肠杆菌感染引起的腹泻问题，分离鉴定延边地区引起羊腹泻的大肠杆菌，并研究其致病性，耐药性以及毒力基因携带情况，为该病的治疗和预防提供参考依据。（方法）试验采集了反复发病羊场患病羊肛拭子10份，对其进行培养、分离、鉴定，并利用荧光PCR 确定其致病性。对分离菌株进行毒力基因检测及K-B 纸片法耐药性分析。（结果）结果显示，从10份样品中分离出的10株大肠杆菌有9 株为致病性大肠杆菌；携带irp2、fyuA、stx1、FimC 等多种致病性较强的毒力因子；对磺胺异噁唑、多西环素、四环素等耐药，且部分分离株对其它药物也存在不同程度的耐药。（结论）延边地区羊腹泻大肠杆菌携带多种毒力基因且耐药性严重，这一现象需引起我们的高度重视，对延边地区养羊业临床上规范和合理使用抗生素治疗大肠杆菌具有指导意义。

关键词：羊大肠杆菌分离鉴定毒力基因耐药性

上海5家宠物医院环境不动杆菌的耐药性检测及一株皮特不动杆菌的测序分析

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微生物学通报 2024年

作者：张玉杰王晓旭徐锋沈莉萍鞠龚讷唐聪圣齐新永徐平王建上海市动物疫病预防控制中心

【背景】不动杆菌属细菌是医院感染常见的条件致病菌，其耐药菌株的出现对公众的健康构成了严重的威胁。【目的】了解上海市宠物医院环境中不动杆菌属的流行现状及耐药性分析。【方法】从上海市5个区的5家宠物医院采集环境样品，经细菌... 详细信息

【背景】不动杆菌属细菌是医院感染常见的条件致病菌，其耐药菌株的出现对公众的健康构成了严重的威胁。【目的】了解上海市宠物医院环境中不动杆菌属的流行现状及耐药性分析。【方法】从上海市5个区的5家宠物医院采集环境样品，经细菌分离、纯化后利用细菌鉴定质谱仪鉴定分离株种属，并通过微量肉汤稀释法检测不动杆菌属分离株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration， MIC)，并对其中1株耐碳青霉烯类分离菌进行基因组测序及遗传特征分析。【结果】730份环境样品共分离获得124株革兰氏阴性菌，经鉴定14株属于不动杆菌属(Acinetobacter spp.)，其中9株为鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)。14株不动杆菌对米诺环素均敏感，但其中2株皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)和2株鲁氏不动杆菌为碳青霉烯类多重耐药不动杆菌，5株鲁氏不动杆菌对复方新诺明耐药，1株约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii)对环丙沙星耐药。基因组测序结果表明，碳青霉烯类多重耐药皮特不动杆菌携带NDM-1、OXA-500和OXA-727等相关耐药基因，多位点序列分型(multilocus sequence typing， MLST)结果表明分离株为ST1037型，单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism， SNP)分析该菌株与来源于浙江省的临床尿液分离株A. pittii AP43的进化距离最近。【结论】上海市5家宠物医院环境中的不动杆菌分离株耐药率较低(<40%)，存在多重耐药现象(5株不动杆菌分别耐≥3种药物)且皮特不动杆菌携带多种耐药基因。

关键词：宠物医院不动杆菌属碳青霉烯耐药性测序

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牛呼吸道多杀性巴氏杆菌的生物学特性分析

中国兽医学报 2024年第7期44卷 1448-1457页

作者：孙月曹金山张志丹尹凯雯韩凯凡郭宇樊宏亮毛伟赵红霞内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古动物疫病预防控制中心内蒙古呼和浩特010010 内蒙古优然牧业有限责任公司内蒙古呼和浩特010010)

为分析牛呼吸道多杀性巴氏杆菌的生物学特性及其在规模化牛场的流行情况,对内蒙古呼和浩特规模化牛场中患呼吸道疾病的病死牛的肺脏、肝脏样品进行细菌分离培养、形态学观察,通过生化试验、16SrRNA基因测序、特异性引物PCR鉴定、荚膜血... 详细信息

为分析牛呼吸道多杀性巴氏杆菌的生物学特性及其在规模化牛场的流行情况,对内蒙古呼和浩特规模化牛场中患呼吸道疾病的病死牛的肺脏、肝脏样品进行细菌分离培养、形态学观察,通过生化试验、16SrRNA基因测序、特异性引物PCR鉴定、荚膜血清型分型、致病性试验、毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测方法对分离株进行研究。结果显示,从病死牛的肺脏中分离鉴定出6株荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,细菌16SrRNA序列测序后比对发现6株多杀性巴氏杆菌与重庆分离株CQ2(CP033599.1)的亲缘关系最为接近。小鼠致病性试验及毒力基因检测结果显示,分离株均有致病性,并携带有exbB、nanB、sodC、oma87等至少16个及以上相关毒力基因,但均未检出hsf1和toxA。药敏试验及耐药基因检测结果显示,分离株对环丙沙星、氧氟沙星、头孢噻肟等抗菌药物有不同程度敏感,对链霉素、克林霉素和林可霉素耐药,检出strA、strB和tet(H)耐药基因。综上,结果表明牛A型多杀性巴氏杆菌的致病性与毒力基因,耐药表型与耐药基因具有一定相关性,临床上推荐使用喹诺酮类(环丙沙星等)和头孢类(头孢噻肟等)抗菌药物,可为牛场防治由多杀性巴氏杆菌引发的呼吸道疾病提供科学依据和防控方案,为牛呼吸道多杀性巴氏杆菌病的流行病学监测奠定基础。

关键词：牛呼吸道疾病多杀性巴氏杆菌分离鉴定毒力基因药敏试验

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管碟法测定硫酸新霉素效价的方法优化

中国抗生素杂志 2024年第6期49卷 667-672页

作者：吴雨珊孙冰清张妤姜芹顾欣张文刚曹莹上海市动物疫病预防控制中心上海201103

目的优化硫酸新霉素含量管碟法测定方法,增大新霉素抑菌圈直径大小,提高检测结果的准确性。方法按照《中国兽药典》2020版一部附录1200抗生素微生物(检定法)的实验基本要求,设置菌液麦氏浊度(0.5、1、2、3和>4 mcf)、培养基pH(7.6、7.8... 详细信息

目的优化硫酸新霉素含量管碟法测定方法,增大新霉素抑菌圈直径大小,提高检测结果的准确性。方法按照《中国兽药典》2020版一部附录1200抗生素微生物(检定法)的实验基本要求,设置菌液麦氏浊度(0.5、1、2、3和>4 mcf)、培养基pH(7.6、7.8、8.0、8.2和8.4)、磷酸盐缓冲液中NaCl添加比例(0、3%、4%、5%、7%和9%)等变量进行含量测定,比较抑菌圈直径大小和可信限率等指标。结果在添加0.5%的菌液麦氏浊度为3 mcf的金黄色葡萄球菌液、培养基p H为8.0、缓冲液添加5%的Na Cl条件下,高剂量抑菌圈直径扩大至20 mm左右,抑菌圈边缘清晰,且符合《中国兽药典》可信限率的要求(不大于5%)。通过多产品多厂家的实样验证此条件稳定可靠。结论优化后的方法可用于硫酸新霉素常规效价含量的测定。

关键词：新霉素抗生素微生物检定法效价测定金黄色葡萄球菌

早期断奶对阿尔巴斯绒山羊增重及血清免疫、生化和微量元素指标的影响

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黑龙江畜牧兽医 2024年第4期 54-59页

作者：董月月苏都汗阿茹娜苏龙嘎斯琴图娜拉哈斯巴雅尔阿拉腾巴根呼格吉乐图内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特015100 鄂托克旗动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯016100

为了研究不同断奶日龄对阿尔巴斯绒山羊增重及血清免疫、生化和微量元素指标的影响,以确定阿尔巴斯绒山羊较适合的早期断奶时间,试验选择出生日龄基本一致、体重接近的健康阿尔巴斯绒山羊公羔24只,随机分成30 d断奶组、40 d断奶组、50 ... 详细信息

为了研究不同断奶日龄对阿尔巴斯绒山羊增重及血清免疫、生化和微量元素指标的影响,以确定阿尔巴斯绒山羊较适合的早期断奶时间,试验选择出生日龄基本一致、体重接近的健康阿尔巴斯绒山羊公羔24只,随机分成30 d断奶组、40 d断奶组、50 d断奶组和60 d断奶对照组,每组6只,其中30 d断奶组、40 d断奶组、50 d断奶组羔羊采用逐渐断奶法(设置10 d过渡期)分别在30,40,50 d断奶,60 d断奶对照组采用直接断奶方式在60 d断奶。各组羔羊从第30天开始,每隔10 d称重1次,统计10 d平均日增重;于第90天晨饲前采血检测血清中免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A、IgG、IgM水平;于第60,90天晨饲前采血测定血清生化指标[总蛋白(TP)、总胆固醇(TC)、肌酐(CREA)、尿素(UREA)、血糖(GLU)、总胆红素(TBIL)、肌酸激酶(CK)、碱性磷酸酶(ALP)]和微量元素指标(铁、镁、锌、镉、铅、铜、锰);分析早期断奶对阿尔巴斯绒山羊增重及血清免疫、生化和微量元素指标的影响。结果表明:在试验31~40 d,40 d断奶组羔羊10 d平均日增重高于30 d断奶组、50 d断奶组和60 d断奶对照组,其中与30 d断奶组、50 d断奶组差异显著(P0.05);在试验41~50 d、51~60 d、61~70 d、71~80 d、81~90 d,各组羔羊10 d平均日增重差异不显著(P>0.05)。在试验第60天时,各组羔羊血清中TP、TC、UREA、GLU、CK、ALP水平均差异不显著(P>0.05),30 d断奶组羔羊CREA、TBIL水平显著低于60 d断奶对照组(P0.05),且除30 d断奶组和40 d断奶组羔羊血清中铁水平低于正常参考值外,其他各组羔羊血清中铁、镁、锌、镉、铅、铜、锰水平均在正常参考值内。在试验第90天时,30 d断奶组羔羊血清中IgA水平高于40 d断奶组、50 d断奶组和60 d断奶对照组,其中与50 d断奶组差异显著(P0.05);各组羔羊血清中IgG、IgM、TP、TC、CREA、UREA、GLU、TBIL、CK、ALP水平均差异不显著(P>0.05);各组羔羊血清中铁、镁、锌、镉、铅、铜、锰水平均差异不显著(P>0.05),且除30 d断奶组羔羊血清中铁水平低于正常参考值外,其他各组羔羊血清中铁、镁、锌、镉、铅、铜、锰水平均在正常参考值内。说明对阿尔巴斯绒山羊羔羊实施早期断奶切实可行,且于40 d断奶效果较好。

关键词：早期断奶阿尔巴斯绒山羊日增重血清生化指标免疫球蛋白微量元素

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4种布鲁氏菌病胶体金试纸条的比较研究

中国动物传染病学报 2024年

作者：黄晓兵杨磊刘爱军倪柏锋孙思琪浙江省动物疫病预防控制中心

旨在对比分析不同厂家布病胶体金法试纸条的检测效果，为牛羊定点屠宰场开展布病自检工作提供参考。本研究采用布病阳性血清标准品测定了4个厂家胶体金试纸条的Cut-off值，并通过对166份结果已知的家畜血清的检测，比较各个厂家试纸条... 详细信息

旨在对比分析不同厂家布病胶体金法试纸条的检测效果，为牛羊定点屠宰场开展布病自检工作提供参考。本研究采用布病阳性血清标准品测定了4个厂家胶体金试纸条的Cut-off值，并通过对166份结果已知的家畜血清的检测，比较各个厂家试纸条的敏感性、特异性等评价指标。结果表明：4个厂家试纸条的Cut-off值为标准血清抗体含量2.5 IU/mL～10 IU/mL，敏感性为8%～100%，特异性为93.10%～100%，符合率为72.29%～96.39%，AUC值为0.54～0.97；配对卡方检验结果显示：除厂家A外，厂家B、C、D的结果与真实结果均有显著性差异（P＜0.05）。A厂家试纸条的检测结果与真实结果符合率为95.18%，成本-效果分析结果表明，4个厂家的C/E值分别为15.76、31.52、19.71和20.75，厂家A试纸条准确诊断1份样品的成本最低。故推荐使用A厂家的胶体金试纸条开展宰前动物布病的筛查工作。

关键词：布鲁氏菌病胶体金法初筛比较分析

猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定及VP2基因的遗传变异分析

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动物医学进展 2024年第8期45卷 28-34页

作者：张启龙李振河程敏姮栗云鹏高晓龙傅彩霞王林高敏余琦周德刚张玮李志军北京市动物疫病预防控制中心北京102629 北京市平谷区动物疫病预防控制中心北京101200

为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,... 详细信息

为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,分离鉴定到1株FPV,命名为FPVBJ-CP/2022株。对决定病毒宿主范围和抗原性的VP2基因系统进化树分析表明,分离株与FPVJF-3株、FPVBeijing-01/2018聚为一支,与FPV疫苗株、CPV群亲缘关系较远。VP2蛋白主要功能位点分析结果显示,VP2蛋白中决定病毒抗原性和宿主嗜性的10个关键位点氨基酸均未发生突变,但该分离株的VP2蛋白序列与GenBank其他FPV毒株的VP2蛋白相比,91位氨基酸由丙氨酸(A)突变为丝氨酸(S),505位氨基酸由天冬酰胺(N)突变为天冬氨酸(D),该突变是否对FPVBJ-CP/2022株VP2蛋白的功能和生物学特性造成改变,有待于进一步研究。论文通过对毒株的遗传变异分析,为更好地预防和控制FPV感染提供了研究基础。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定 VP2基因遗传进化分析

禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒的比较与评估

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中国家禽 2024年第5期46卷 118-124页

作者：刘颖昳胡迪刘倩倩迟盛仁刘琳王传彬顾小雪中国动物疫病预防控制中心北京102618

为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27抗原ELISA检测试剂盒(国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX)进行比较。结果... 详细信息

为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27抗原ELISA检测试剂盒(国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX)进行比较。结果显示:从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2~3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品(DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪)的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。

关键词：禽白血病病毒净化 ELISA p27抗原