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Mettl3通过PI3K/AKT信号通路调控Ang Ⅱ诱导肾脏纤维化的机制研究

中华心血管病杂志 2024年第7期52卷 814-826页

作者：邓熠王艳何平平李娇刘围围袁近松赵鸿彦刘志江沈长银石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科遵义563000

目的:探讨甲基转移酶3(Mettl3)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠,(1)细胞实验中,采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞,并予以1×10 6 mmol/L的Ang ... 详细信息

目的:探讨甲基转移酶3(Mettl3)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠,(1)细胞实验中,采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞,并予以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化,为Ang Ⅱ组;正常培养的周细胞为对照组。采用免疫荧光染色、蛋白质印迹(Western blot)及实时反转录PCR(RT-qPCR)检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以验证转分化成功。采用斑点印迹、RT-qPCR、Western blot检测N6-甲基腺苷(m6A)修饰水平及相关酶[Mettl3、Mettl14、Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)、肥胖相关蛋白(FTO)、ALKB同源蛋白5(ALKBH5)、YTH结构域家族蛋白(YTHDF)1、YTHDF2、YTHDC1、YTHDC2、YTHDC3]的表达水平。采用慢病毒转染Mettl3 shRNA的方法抑制细胞中的Mettl3表达,为sh-Mettl3组、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组;以转染慢病毒空载体作为阴性对照,为Ang Ⅱ+sh-NC组,观察Ang Ⅱ对周细胞转分化的影响,并检测下游磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白的表达,包括PI3K、AKT(丝氨酸磷酸化位点473)[p-AKT(S473)]、AKT(苏氨酸磷酸化位点308)[p-AKT(T308)]等。加入放线菌素D与各组周细胞共培养以抑制PI3K基因的转录,通过检测不同共培养时间残余PI3K mRNA表达量以计算PI3K mRNA半衰期。在Ang Ⅱ+sh-Mettl3组周细胞中加入AKT激动剂SC79,观察是否可逆转Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的作用。(2)动物实验中,分为假手术组(仅给予0.9%无菌生理盐水)、Ang Ⅱ组(泵入Ang Ⅱ溶液)、sh-Mettl3组(注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液)、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组(泵入Ang Ⅱ溶液+注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液)、Ang Ⅱ+sh-Mettl3+SC79组(Ang Ⅱ+sh-Mettl3组处理基础上注射SC79),每组6只。手术前后采用尾夹法测定血压,术后4周测定血清肌酐、尿素含量及尿液白蛋白含量。28 d后取肾脏组织,采用苏木精-伊红(HE)及Masson三色法对组织切片进行染色,检测肾脏纤维化程度。结果:(1)磁珠分选法可获得原代肾脏周细胞,以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ处理周细胞48 h可成功诱导其向肌成纤维细胞转分化。斑点印迹结果显示,Ang Ⅱ组总RNA的m6A修饰水平高于对照组( P<0.05),RT-qPCR及Western blot结果显示,与对照组相比,Ang Ⅱ组中Mettl3 mRNA及蛋白表达水平上调( P均<0.05)。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组细胞中的Mettl3蛋白表达水平低于Ang Ⅱ组,α-SMA、波形蛋白、肌间线蛋白、成纤维细胞激活蛋白a(FAPa)以及Ⅰ型胶原蛋白的表达水平亦低于Ang Ⅱ组( P均<0.05)。与对照组相比,Ang Ⅱ组的PI3K mRNA表达水平上调,且p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白高表达;Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的PI3K mRNA表达水平低于Ang Ⅱ组,p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白表达下调( P均<0.05)。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的半衰期短于Ang Ⅱ+sh-NC组(2.34 h比3.42 h)。而Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的改善作用可被SC79逆转。(2)动物实验结果显示,与假手术组比较,Ang Ⅱ组小鼠的血压更高,血清肌酐、尿素及24 h尿蛋白测量值更高,纤维化面积更大( P均<0.05);而Ang Ⅱ+sh-Mettle3组的纤维化面积小于Ang Ⅱ组( P<0.05),但在加入SC79后肾脏纤维化又加重。结论:Mettl3介导的RNA m6A表观遗传调控参与Ang Ⅱ诱导的肾脏周细胞-肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化,Mettl3可能通过影响PI3K的稳定性,进而影响PI3K/AKT信号通路发挥调控作用。

关键词：血管紧张素Ⅱ 周细胞肌成纤维细胞转分化 N6-甲基腺苷甲基转移酶3

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非缺血性心肌病的研究进展及治疗现状

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中国临床研究 2024年第6期37卷 835-838,871页

作者：刘泽恩郭建强内蒙古医科大学附属医院心血管内科内蒙古呼和浩特010000

临床上把心脏扩大、心律失常和心力衰竭三者单独或同时存在为特征的心脏疾病称为心肌病。通常由冠状动脉粥样硬化病变引起的为缺血性心肌病,非缺血性心肌病与之不同,是指由非冠状动脉粥样硬化病变所致,可引起心力衰竭、心律失常、甚至... 详细信息

临床上把心脏扩大、心律失常和心力衰竭三者单独或同时存在为特征的心脏疾病称为心肌病。通常由冠状动脉粥样硬化病变引起的为缺血性心肌病,非缺血性心肌病与之不同,是指由非冠状动脉粥样硬化病变所致,可引起心力衰竭、心律失常、甚至猝死。但对其病因、诊断、治疗方法仍不甚明确,疗效有待进一步探索。本文分析了缺血性心肌病病因学、诊断方面,及当前药物及非药物治疗现状,为此类患者的早期预防提供更多参考资料,为临床上患者的诊断及治疗提供方向。

关键词：非缺血性心肌病扩张型心肌病肥厚型心肌病限制性心肌病心脏再同步化治疗骨髓干细胞移植射频消融术

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轮班工作与心脑血管疾病的孟德尔随机化研究

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现代预防医学 2024年第13期51卷 2305-2311页

作者：安洪鑫夏侯鸾达李云权李伟贵州医科大学附属医院心血管内科

目的使用孟德尔随机化（Mendelian randomization, MR）方法评估轮班工作（shift work）与心脑血管疾病（cardiovascular and cerebrovascular diseases,CCVD）的因果关系。方法从英国生物样本库（UK biobank,UKBB）及欧洲血统最大的全基因组关联研究（GWAS）提取轮班和9个CCVD的汇总统计数据用于MR分析，并使用Finn Gen生物库重复分析进行验证，之后进一步使用meta分析合并发现队列和复制队列以扩大样本量来获得更可靠的因果效应。同时，使用两步MR方法评估CCVD相关危险因素对轮班工作和CCVD之间因果效应的潜在中介作用。多种敏感性分析方法验证结果的可靠性。结果这项研究基于IVW方法显示轮班工作会增加心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）(OR=1.06,95%CI:1.02～1.10,FDR=0.003)、冠心病（coronary heart disease）(OR=1.32,95%CI:1.10～1.60,FDR=0.007)、心肌梗死（myocardial infarction）(OR=1.64,95%CI:1.24～2.20,FDR=0.003)和心绞痛（angina pectoris）(OR=1.40,95%CI:1.15～1.70,FDR=0.003)的发病风险。水平多效性效应（MR-Egger截距和MR-PRESSO全局检验的P值均>0.05）对结果产生偏差的可能性较小。此外，原发性高血压（essential hypertension,EHT）、2型糖尿病（type 2 diabetes,T2DM）、身体质量指数（body mass index,BMI）、抑郁状态、当前吸烟部分介导了轮班工作对CVD、冠心病、心肌梗死及心绞痛的因果效应，其中BMI对CVD、冠心病、心肌梗死的调节比分别为81.7%、47.03%、45.04%;EHT对冠心病、心肌梗死、心绞痛的调节比分别为42.87%、40.72%、57.05%;T2DM对CVD、冠心病、心肌梗死、心绞痛的调节比分别为12.51%、7.58%、5.27%、8.39%；抑郁状态对CVD、冠心病、心肌梗死、心绞痛的调节比分别为237.12%、26.00%、22.06%、32.60%；当前吸烟对CVD的调节比为11.42%。结论这项MR研究提供了可靠的证据支持轮班工作增加CVD、冠心病、心肌梗死及心绞痛的发病风险，EHT、T2DM、BMI、抑郁状态及当前吸烟部分介导了这种作用。

关键词：孟德尔随机化轮班工作心脑血管疾病因果关系

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mRNA的N-甲基腺苷（mA）修饰异常在冠心病中作用的研究进展

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中华高血压杂志(中英文) 2024年

作者：张艳韦波李伟周海燕贵州医科大学附属医院心血管内科

N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine,m6A）修饰是真核生物mRNA最普遍的内部修饰,占RNA甲基化修饰的80%,m6A修饰存在于病毒、酵母、植物和动物的核糖体RNA（ribosomal RNA,rRNA）、核小RNA（small nuclear RNA,snRNA）和mRNA中,尤其在高等真核生物中特别普遍[1-4]。研究发现,m6A的形成受甲基转移酶（“书写器”,writers）、去甲基化酶（“擦除器”,erasers）和m6A识别蛋白（“阅读器”,readers）调节,且mRNA甲基化的程度和模式可以影响mRNA的剪接、运输、储存、翻译和衰变,可以通过调控RNA的结构和相互作用,进而影响RNA的翻译效率和速率[5],这意味着其可以参与炎症、血管内皮损伤、氧化应激和动脉粥样硬化斑块形成等病理生理过程,进一步影响疾病的发生发展。

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主支药物洗脱支架+分支药物涂层球囊术式治疗真性分叉病变患者的临床预后

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中国心血管杂志 2024年第3期29卷 205-210页

作者：刘文魏芳晶内蒙古医科大学附属医院重症医学科呼和浩特010050 内蒙古医科大学附属医院心血管内科呼和浩特010050

目的探究主支药物洗脱支架(DES)+分支药物涂层球囊(DCB)术式治疗真性分叉病变患者的有效性和安全性,以及DCB治疗分叉病变的临床预后。方法单中心、回顾性研究。连续纳入2019年3月至2021年6月于内蒙古医科大学附属医院接受经皮冠状动... 详细信息

目的探究主支药物洗脱支架(DES)+分支药物涂层球囊(DCB)术式治疗真性分叉病变患者的有效性和安全性,以及DCB治疗分叉病变的临床预后。方法单中心、回顾性研究。连续纳入2019年3月至2021年6月于内蒙古医科大学附属医院接受经皮冠状动脉介入治疗且诊断为真性分叉病变的患者131例。依据接受术式不同将其分组:被动球囊拘禁组43例、主动球囊拘禁组43例和主支DES+分支DCB组45例。比较术后6个月随访时各组的血管晚期管腔丢失,以及术后12个月内各组的主要不良心血管事件(MACE)发生率。结果术后6个月随访时,三组主支血管的晚期管腔丢失比较,差异无统计学意义(P=0.107);而主支DES+分支DCB组分支血管的晚期管腔丢失均低于其他两组(均为P<0.05)。术后12个月随访时,MACE发生率分别为主动球囊拘禁组16.3%、被动球囊拘禁组18.6%和主支DES+分支DCB组4.4%,三组间比较差异无统计学意义(P=0.107)。与普通球囊组(主动球囊拘禁组+被动球囊拘禁组)相比,主支DES+分支DCB组的MACE发生率显著降低(4.4%比17.4%,P=0.036)。结论主支DES+分支DCB术式治疗真性分叉病变时,可有效改善患者预后,使用DCB治疗分叉病变可取得良好的临床预后。

关键词：冠状动脉真性分叉病变经皮冠状动脉介入治疗主动球囊拘禁技术被动球囊拘禁技术药物涂层球囊

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miR-133a-3p修饰的间充质干细胞外泌体促进心肌梗死后大鼠心肌修复

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中华心血管病杂志 2024年第1期52卷 72-78页

作者：孙铃朱文武张健赵鹏程朱叶倩张凤祥南京医科大学第一附属医院、江苏省人民医院心血管内科南京210029 徐州市中心医院心血管内科徐州221000

目的探讨miR-133a-3p修饰的人源脐带血间充质干细胞(ucMSC)衍生的外泌体对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心肌修复的作用。方法体外扩增培养ucMSC,将携带miR-133a-3p的慢病毒载体及阴性对照载体分别转染至ucMSC,分别提取其分泌的外泌体,命名为... 详细信息

目的探讨miR-133a-3p修饰的人源脐带血间充质干细胞(ucMSC)衍生的外泌体对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心肌修复的作用。方法体外扩增培养ucMSC,将携带miR-133a-3p的慢病毒载体及阴性对照载体分别转染至ucMSC,分别提取其分泌的外泌体,命名为miR-133a-3p-Exo及miR-NC-Exo。采用冠状动脉左前降支结扎术构建大鼠AMI模型,分别于梗死区边缘原位注射miR-133a-3p-Exo或miR-NC-Exo进行干预。干预后28 d,采用超声心动图检测大鼠心功能;采用Masson染色检测大鼠梗死后心肌纤维化面积;采用TUNEL染色评估梗死后大鼠心肌凋亡情况;采用免疫荧光染色评估梗死后大鼠血管新生情况。结果与miR-NC-Exo组相比,miR-133a-3p-Exo组在AMI后28 d左心室射血分数较高[(64.2%±8.9%)比(47.4%±9.8%),P血管的数量均较多[CD31:(13.9±2.0)条比(2.9±0.9)条,α-SMA:(11.0±1.6)条比(3.5±0.9)条,P均血管新生,从而改善AMI后大鼠的心功能。

关键词：微RNAs 间充质干细胞外泌体急性心肌梗死心肌修复

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肌集钙蛋白2与室性心律失常的研究进展

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中华心血管病杂志 2024年第2期52卷 199-204页

作者：陈佳翊武立达王如兴南京医科大学附属无锡人民医院心血管内科无锡214023

室性心律失常是一种常见的心律失常,是导致患者心原性猝死的重要原因。肌集钙蛋白2(Casq2)是Casq家族中的一种,广泛存在于哺乳动物肌肉细胞内质网中。近年来,Casq2通过基因突变和翻译后异常修饰等方式在室性心律失常发生发展中的作用逐... 详细信息

室性心律失常是一种常见的心律失常,是导致患者心原性猝死的重要原因。肌集钙蛋白2(Casq2)是Casq家族中的一种,广泛存在于哺乳动物肌肉细胞内质网中。近年来,Casq2通过基因突变和翻译后异常修饰等方式在室性心律失常发生发展中的作用逐渐为人所知。该文主要综述Casq2的在室性心律失常发生中的作用及机制,为临床室性心律失常的治疗提供潜在新靶点。

关键词：肌集钙蛋白2 兰尼碱受体室性心律失常基因转染

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肾动脉消融治疗高血压——从生理解剖基础谈选择性消融

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中国实用内科杂志 2024年第8期 645-648页

作者：刘航孙英贤殷跃辉重庆医科大学附属第二医院心血管内科中国医科大学附属第一医院心血管内科

经皮去肾神经术（RDN）能够持久有效地降低血压。其临床证据充分，但尚存在降压效果不稳定等问题。近年来对肾脏神经支配和生理功能的认识逐渐加深，尤其是证实肾脏副交感神经的存在。肾脏副交感神经在功能上与交感神经相互拮抗，消融... 详细信息

经皮去肾神经术（RDN）能够持久有效地降低血压。其临床证据充分，但尚存在降压效果不稳定等问题。近年来对肾脏神经支配和生理功能的认识逐渐加深，尤其是证实肾脏副交感神经的存在。肾脏副交感神经在功能上与交感神经相互拮抗，消融过程破坏了肾脏副交感神经可能是当前RDN效果不满意的一个重要原因。肾神经刺激引导的选择性消融可能是RDN技术未来的一个极具潜力的发展方向。

关键词：经皮去肾神经术肾脏副交感神经肾神经刺激选择性消融

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累积液体平衡量对心力衰竭患者容量状态影响的研究

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中华护理杂志 2024年第14期59卷 1691-1698页

作者：王蔚云刘长红孙国珍汤一帆李珍宇苏子雯顾则娟南京医科大学第一附属医院心脏大血管外科南京医科大学第一附属医院心血管内科南京医科大学第一附属医院老年心血管内科南京医科大学第一附属医院手术室210029南京市南京医科大学第一附属医院护理部

目的分析心力衰竭患者入院1～7 d累积液体平衡量与血浆容量升高、淤血症状加重的相关性，探讨累积液体平衡量对预测心力衰竭患者容量负荷过重的应用价值。方法采用便利抽样法，选取江苏省南京市、连云港市以及河南省驻马店市3所三级甲... 详细信息

目的分析心力衰竭患者入院1～7 d累积液体平衡量与血浆容量升高、淤血症状加重的相关性，探讨累积液体平衡量对预测心力衰竭患者容量负荷过重的应用价值。方法采用便利抽样法，选取江苏省南京市、连云港市以及河南省驻马店市3所三级甲等综合医院2022年10月至2023年2月住院治疗的235例心力衰竭患者，根据血浆容量和淤血症状，将患者分为血浆容量降低组、血浆容量升高组以及淤血症状减轻组、淤血症状加重组。收集研究对象的一般资料、临床特征及1～7 d累积液体平衡量，比较各组累积液体平衡量的差异。采用Logistic回归分析比较累积液体平衡量对患者血浆容量和淤血症状的影响。采用受试者操作特征曲线分析累积液体平衡量预测血浆容量升高、淤血症状加重的最佳截断值。结果剔除15例提前出院和3例液体出入量记录不准确的患者，共纳入患者217例，累积1 d液体正平衡发生率最低，为65.90%，累积量最少，为（0.235±0.983） L；累积6 d液体正平衡发生率最高，为75.58%，累积量最多，为（2.444±5.445） L。血浆容量升高组累积4～7 d的液体平衡量高于血浆容量降低组，差异具有统计学意义（P<0.05）；累积4～7 d的液体平衡量是血浆容量升高的独立影响因素，累积4～7 d的液体平衡量分别达到2.308、3.361、3.518、3.702 L时，可预测血浆容量升高，受试者操作特征曲线下面积分别为0.686、0.721、0.647、0.766。淤血症状加重组累积4～7 d的液体平衡量均高于淤血症状减轻组，差异具有统计学意义（P<0.05）；累积4～7 d的液体平衡量是淤血症状加重的独立影响因素，累积4～7 d的液体平衡量分别达到2.574、3.383、4.995、4.235 L时，可预测淤血症状加重，受试者操作特征曲线下面积分别为0.640、0.693、0.654、0.720。结论心力衰竭患者累积液体正平衡发生率高，累积液体平衡量能够较好地预测容量负荷加重的发生，血浆容量增加先于淤血症状的出现。建议临床护理人员密切关注累积液体正平衡3 d以上的心力衰竭患者，当累积液体正平衡量超过2.308 L时，及时采取措施排出过多的液体，避免容量负荷过重的发生。

关键词：心力衰竭容量状态累积液体平衡量血浆容量临床淤血评分护理

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表观遗传调控血管平滑肌细胞重塑在主动脉瘤发生发展中的作用

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中国组织工程研究 2024年第4期28卷 602-608页

作者：何远杰陈宇恒赵永超王正龙遵义医科大学附属医院心血管内科贵州省遵义市563000

背景:表观遗传作为重要的基因表达网络的调控方式,已被证明在血管平滑肌细胞重塑介导主动脉瘤的发生发展中发挥重要作用。目的:文章从主动脉瘤发生及进展过程中血管平滑肌细胞重塑的表观遗传调控机制进行综述。方法:以“Aortic aneurysm... 详细信息

背景:表观遗传作为重要的基因表达网络的调控方式,已被证明在血管平滑肌细胞重塑介导主动脉瘤的发生发展中发挥重要作用。目的:文章从主动脉瘤发生及进展过程中血管平滑肌细胞重塑的表观遗传调控机制进行综述。方法:以“Aortic aneurysm,Vascular smooth muscle,Smooth muscle cells,Epigenetic,DNA methylation,Histone modification,Non coding RNA”为英文检索词,以“主动脉瘤,血管平滑肌,平滑肌细胞,表观遗传,DNA甲基化,组蛋白修饰,非编码RNA”为中文检索词,分别检索PubMed、Web of Science以及中国知网数据库1970-2022年发表的相关文献,最终纳入71篇文献进行综述。结果与结论:①表观遗传修饰可通过靶向调节血管平滑肌细胞重塑、细胞外基质降解而影响主动脉瘤的发生进展,可在主动脉瘤治疗、延缓病情及改善预后发挥关键作用。②表观遗传相关酶分子(如DNA甲基化酶和组蛋白修饰酶)可通过调节血管平滑肌重塑如细胞增殖、迁移和凋亡等因素影响主动脉瘤的进展,可作为主动脉瘤药物治疗的参考靶点。③目前表观遗传修饰对主动脉瘤的研究尚处于基础研究阶段,且部分表观遗传修饰机制尚未探究清楚,未来随着此领域研究的不断发展,靶向表观遗传修饰在治疗主动脉瘤以及临床转化过程中有望实现新的突破。

关键词：主动脉瘤血管平滑肌平滑肌细胞表观遗传 DNA甲基化组蛋白修饰非编码RNA 综述

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