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大肠杆菌内毒素(CET)提制方法的改进及对其制剂的评价

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中国兽医学报 1984年第2期 106-110页

作者：赵永昌缪延武俞思炎黄诗旦葛祥元周海银庞洪霞广州军区后勤部军马卫生研究所

本文对大肠杆菌内毒素(CET)的提制方法——“简化热水——酚法”作了如下改进:①直接用湿菌体进行制备,省略了制干菌粉的步骤,使制备周期由13天减少为11天;②透析液加以离心提纯;③提制过程中,把丙酮改用酒精,节省了费用;④最后程序增... 详细信息

本文对大肠杆菌内毒素(CET)的提制方法——“简化热水——酚法”作了如下改进:①直接用湿菌体进行制备,省略了制干菌粉的步骤,使制备周期由13天减少为11天;②透析液加以离心提纯;③提制过程中,把丙酮改用酒精,节省了费用;④最后程序增加一次再溶解和再沉淀。改进后的产品数质量有明显提高:内毒素收获量提高了64％;产品纯度上,粗制品含氮量减少22.86％,含磷量减少61.55％,O.D260/O.D280下降0.305;精制品含氮量0.393％,含磷量1.25％,O.D260/0.D280为1.41;家兔Shwartzman反应半数皮肤预备剂量(SPD50)为改进前的1/16,小于在同等试验条件下的国家参考标准品;对鲎试剂促凝活性优于改进前产品和国家参考标准品;小白鼠LD50为改进前产品的1/2。因此认为,改进的“简化热水——酚法”具有一定的应用和推广价值。

关键词：内毒素大肠杆菌大肠埃希氏菌埃希氏杆菌属提制小白鼠半数致死量 CET

猪丹毒杆菌CKS选择增菌液的研制及其应用效果

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中国预防兽医学报 1987年第3期 41-42页

作者：傅启勇广州军区后勤部军马卫生研究所

Packer最早报导了猪丹毒杆菌的叠氮钠-结晶紫选择培养基,随后Wood结合其他学者的实验结果又研制了抗菌素-血清培养基。我国骆春阳及佘永建等也作过一些研究和改进。我们在前人工作的基础上配制了结晶紫-卡那霉素-马血清选择增

关键词：丹毒杆菌选择培养基检出率叠氮钠小鼠增菌液小家鼠 CKS 打火印人畜共患病猪丹毒

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家畜类鼻疽疫源地调查

中国预防兽医学报 1983年第2期 39-40页

作者：陆振豸张我东朱良其梁家权刘菊桃范翔九广州军区后勤部军马卫生研究所

类鼻疽是热带地区的一种人畜共患传染病,我国华南地区处于热带,具有类鼻疽菌生长的自然条件,为了摸清类鼻疽疫源地在该地区的分布,我们对广东、广西及湖南三省区有关地区的家畜作了血清流行病学调查,并采取水样和家畜脏器病料作了类鼻... 详细信息

类鼻疽是热带地区的一种人畜共患传染病,我国华南地区处于热带,具有类鼻疽菌生长的自然条件,为了摸清类鼻疽疫源地在该地区的分布,我们对广东、广西及湖南三省区有关地区的家畜作了血清流行病学调查,并采取水样和家畜脏器病料作了类鼻疽菌分离,现将结果报告如下。

关键词：类鼻疽人畜共患传染病阳性率马骡伪鼻疽人畜共患病鼻疽菌素诊断液(生物制品) 疫源地调查家畜农畜

利用健馬制造鼻疽补体結合反应标准血清之研究

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畜牧兽医学报 1957年第2期 149-152页

作者：費恩閣傅士福汪宗耀刘俊华长春畜牧兽医大学军马卫生科学研究所

1.利用鼻疽补体结合反应用液体抗原,按2—3日之间隔给健康马接种7—11次,可获得补体结合抗体滴度达60—80倍之高价血清。 2.在免疫过程中免疫血清和抗原与自然鼻疽患马血清和抗原呈现相同之反应域, 抗原滴度不因血清不同而有所变动。 8... 详细信息

1.利用鼻疽补体结合反应用液体抗原,按2—3日之间隔给健康马接种7—11次,可获得补体结合抗体滴度达60—80倍之高价血清。 2.在免疫过程中免疫血清和抗原与自然鼻疽患马血清和抗原呈现相同之反应域, 抗原滴度不因血清不同而有所变动。 8.人工免疫血清对液体抗原、粉末抗原及马来因等之反应关系与自然鼻疽患马血清完全一致。 4.人工免疫血清之加热试验成绩与自然鼻疽患马血清并无二致,即予65℃加热30分钟后结合价显著减低,70℃加热30分钟则几乎完全消失,75℃加热则消失殆尽。本文承本所赵庆森所长、赵桐朴副所长及朱建璋研究员的热情指导和校阅,特此一并志谢。

关键词：鼻疽抗原人畜共患病反应域血清

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犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究

畜牧兽医学报 2006年第1期37卷 50-55页

作者：闫芳夏咸柱扈荣良谢之景赵忠鹏高玉伟黄耕解放军军需大学军事兽医研究所

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合... 详细信息

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答，免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0．332，而免疫前为0．158；抗CDV中和抗体效价为1：（4～16）；CD4^＋T／CD8^＋T比值为2．05±0．38，而对照组为1．99±0．56；免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0．384和0．356。基因疫苗免疫犬试验中，进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示，基因疫苗免疫3次后，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．296，抗CDV中和抗体效价为1：（8～32）。基因疫苗免疫2次，再使用弱毒疫苗加强免疫1次，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．433，抗CDV中和抗体效价为1：（16～64）。

关键词：犬瘟热基因疫苗犬瘟热病毒H基因犬瘟热病毒F基因犬瘟热病毒N基因

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鹿狂犬病病毒G基因主要功能区的序列分析

中国兽医学报 1997年第3期17卷 209-214页

作者：钱爱东侯世宽张茂林李红卫涂长春侯安祖殷震解放军农牧大学军事兽医研究所

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出了中国鹿狂犬病野毒株（８２０２株）糖蛋白（Ｇ）基因膜外主要功能区的２个片段，共约８００个ｂｐ（３７０～１１７９），含有可以诱导中和抗体的２个抗原决定簇的基因片段和决定毒力... 详细信息

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出了中国鹿狂犬病野毒株（８２０２株）糖蛋白（Ｇ）基因膜外主要功能区的２个片段，共约８００个ｂｐ（３７０～１１７９），含有可以诱导中和抗体的２个抗原决定簇的基因片段和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将２个片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａⅠ位点，采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。将这一序列与国内外已发表的１１株狂犬病病毒的相应序列输入计算机进行比较分析，结果表明８２０２株主要功能区与上述１１个毒株核苷酸序列的同源性在７３．０％～９６．４％之间，氨基酸序列的同源性在８６．４％～９４．４％之间，８２０２株与中国疫苗株无论是核苷酸序列还是氨基酸序列的同源性均最高，而与中国街毒（ＣＤＸ－１）的核苷酸序列同源性最低，与ＣＶＳ株的氨基酸序列的同源性最低。

关键词：鹿狂犬病病毒糖蛋白基因序列分析

鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系建立

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中国兽医科技 1989年第7期19卷 23-24页

作者：乔忠詹丽娥杨静赵秋成孙世兴马丛林刘(王子) 山西省畜牧兽医研究所解放军兽医大学军事兽医研究所

(一)材料 1.病毒:传染性法氏囊病病毒F_(16)(IBDVF_(16))引自哈尔滨兽医研究所;新城疫病毒(NDV)由本所提供。 2.小白鼠骨髓瘤细胞系:NS-1和Sp 2/0均引自解放军兽医大学军事兽医研究所。 3.动物:8～12周龄BALB/C小鼠引自卫生部北京生... 详细信息

(一)材料 1.病毒:传染性法氏囊病病毒F_(16)(IBDVF_(16))引自哈尔滨兽医研究所;新城疫病毒(NDV)由本所提供。 2.小白鼠骨髓瘤细胞系:NS-1和Sp 2/0均引自解放军兽医大学军事兽医研究所。 3.动物:8～12周龄BALB/C小鼠引自卫生部北京生物制品研究所。 (二)抗原制备把IBDV-F_(16)经30日龄公鸡体内增殖后,收集病变明显的法氏囊制成乳剂,测其病毒滴度为10~7TCID_(50)/0.1ml,-30℃保存备用。使用时常规离心、硫酸铵沉淀、高速离心,同时用密度梯度超速离心制备纯化IBDV抗原。提纯后的抗原经磷钨酸负染,JFM—T电镜观察(放大117000倍),病毒粒子呈六角形,大小为60nm。提纯病毒的蛋白含量为3.25mg/ml。

关键词：鸡法氏囊病病毒单克隆抗体

大肠杆菌耐热性肠毒素ST_1－LacZ融合基因的构建

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中国兽医学报 1994年第4期14卷 313-319页

作者：许崇波冯书章刘子刘晓明岳军明农牧大学军事兽医研究所

利用含大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１基因的质粒ｐＢＳＴ２－６和含ＬａｃＺ基因（编码β－半乳糖苷酶）的载体ｐＵＣ１８，构建成ＳＴ１－ＬａｃＺ融合基因。将质粒ｐＢＳＴ２－６用限制性内切酶ＢａｍＨＩ和ＢｇｌⅡ消化，经３％琼脂糖... 详细信息

利用含大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１基因的质粒ｐＢＳＴ２－６和含ＬａｃＺ基因（编码β－半乳糖苷酶）的载体ｐＵＣ１８，构建成ＳＴ１－ＬａｃＺ融合基因。将质粒ｐＢＳＴ２－６用限制性内切酶ＢａｍＨＩ和ＢｇｌⅡ消化，经３％琼脂糖凝胶电泳分离、透析袋电洗脱法回收１４７ｂｐＤＮＡ片段，再将载体ｐＵＣ１８用ＢａｍＨＩ消化、碱性磷酸酶处理，最后将处理好的ｐＵＣ１８ＤＮＡ与１４７ｂｐＳＴ１ＤＮＡ通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶进行粘性末端连接，转化至受体菌ＤＨ５ａ中。通过菌落原位杂交筛选，共筛选出５３个为ＳＴ１基因探针杂交阳性的菌落。菌落原位杂交阳性的菌株经培养和抽提纯化质粒后，经限制性内切酶（ＥｃｏＲＩ／ＸｂａＩ和ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ）酶切分析和ＤＮＡ序列分析，证明重组质粒ｐＸＳＴ１含有ＳＴ１基因，而且ＳＴ１基因在重组ＤＮＡ中连接方向是正确的，具有正确的阅读框架。再者，ＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ１）菌株能在含ｘ－Ｇａｌ的ＬＢ平板上长成蓝色菌落，表明该菌株能表达具有β－半乳糖苷酶活性的大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１－β－半乳糖苷酶融合蛋白。ＳＴ１－ＬａｃＺ融合基因的构建，为研究ＳＴ的免疫原性和抗ＳＴ抗体在预防产肠毒素性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）感染中的作用?

关键词：大肠杆菌肠毒素 LacZ 基因融合基因基因克隆

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貉冠状病毒人工感染试验

中国畜禽传染病 1993年第1期15卷 9-10,4页

作者：范泉水武银莲夏咸柱钟志宏刘鼎新吴英平李君阁成都军区后勤部军马防治检验所兽医大学军事兽医研究所兰州军事医学研究所中国农科院哈尔滨兽医研究所

为试验貉冠状病毒的致病性以及与犬冠状病毒的关系,用经电镜观察仅见冠状病毒的肠炎死亡貉粪便提取物,人工感染未吃初乳的新生仔犬2只和经犬瘟热和貉细小病毒弱毒免疫的健康貉2只。结果,4天后,2只仔犬拉稀死亡,剖检呈出血性胃肠炎病理变... 详细信息

为试验貉冠状病毒的致病性以及与犬冠状病毒的关系,用经电镜观察仅见冠状病毒的肠炎死亡貉粪便提取物,人工感染未吃初乳的新生仔犬2只和经犬瘟热和貉细小病毒弱毒免疫的健康貉2只。结果,4天后,2只仔犬拉稀死亡,剖检呈出血性胃肠炎病理变化,肠内容物经电镜负染观察,见有大量冠状病毒;2只试验貉分别于第4天和第5天拉带粘液的稀粥样粪便。粪便提取物电镜负染.见有大量犬冠状病毒样病毒。为进一步试验貉冠状病毒与犬冠状病毒之间的关系,分别用豚鼠抗貉冠状病毒和抗犬冠状病毒血清与提纯的貉冠状病毒作免疫电镜观察。结果,两种抗血清均可将貉冠状病毒凝集,呈阳性免疫电镜结果。

关键词：貉病冠状病毒感染