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细菌内抗菌药物积累测定方法研究进展

中国畜牧兽医 2025年 451-460页

作者：孙丽谭冰冰李长琼袁欣怡潘源虎华中农业大学国家兽药残留基准实验室

抗菌药是治疗细菌感染的关键药物,也是现代医学中至关重要的基础药物之一。但当前现有抗菌药物耐药性日益严重以及新抗菌药物发现渠道不足的问题已受到关注并亟需解决。抗菌药透过细菌的外膜屏障且在作用靶点位置蓄积至有效浓度才能发... 详细信息

抗菌药是治疗细菌感染的关键药物,也是现代医学中至关重要的基础药物之一。但当前现有抗菌药物耐药性日益严重以及新抗菌药物发现渠道不足的问题已受到关注并亟需解决。抗菌药透过细菌的外膜屏障且在作用靶点位置蓄积至有效浓度才能发挥抗菌作用。因此,测定细菌内抗菌药物的含量,有助于建立药物在细菌内蓄积特性与其结构之间的关系,为新型抗菌药物设计提供指导。目前,已有多种检测方法被开发用于细菌内抗菌药物浓度测定。笔者首先简要介绍了革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞膜的结构差异,再从早期的放射性测定法、荧光测定法及基于质谱开发的新型方法(包括液相色谱串联质谱检测法、固相萃取-质谱测定法、纳米流体-质谱联用技术、飞行时间二次离子质谱和生物探针与质谱的联合应用)入手,介绍各检测方法及当前的应用,并总结概述了上述方法的优缺点,对其今后的发展进行了展望,以期为后续细菌内抗菌药物积累测定方法的应用提供建议,为设计和发现新的抗菌药物尤其是抗革兰阴性菌新药提供参考。

关键词：抗菌药物抗菌药物摄取检测方法细胞内积累亚细胞定位

猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒三重RT-qPCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2025年

作者：陈千林李绍梅张邑帆牟豪刘明妮杨柳郭庆勇付利芝国家生猪技术创新中心疫病防控研究院新疆农业大学动物医学学院重庆市畜牧科学院兽医兽药研究所

猪肠道冠状病毒（swine enteric coronaviruses， SeCoV），如猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus， PEDV）、传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus， TGEV）和猪德尔塔冠状病毒（porcine delta coronavirus， PDCoV），会引发仔猪严重腹泻，给养猪业造成了巨大的损失。本研究中，我们建立了一种三重实时荧光定量反转录PCR（reverse transcription-quantitative PCR， RT-qPCR）方法，用于同时检测PEDV、TGEV和PDCoV。首先根据PEDV M基因、TGEV ORF 1b基因和PDCoV ORF 1b基因的保守序列分别设计每种病毒的特异性检测引物和探针。优化反应条件后，成功建立了一种能同时检测PEDV、TGEV和PDCoV的三重RT-qPCR方法。该方法对这三种病毒具有良好的特异性，与猪场常见的CSFV、PCV2、PoRVA、PRV和PRRSV等均无交叉反应。对重组质粒pTOPO-PEDV 128、pTOPO-TGEV 116和pTOPO-PDCoV 125线性模板的检测极限分别为16.835、17.61和17.02拷贝/μL。组内、组间变异系数均小于5%，组间差异不显著（P>0.05）。此外，还比较了三重RT-qPCR与标准方法的符合性，结果显示符合率为100%，检测35份组织样本，17份呈PEDV阳性，阳性率为48.57%（17/35），TGEV和PDCoV检测结果均为阴性，未检测到混合感染。综上结果，建立的三重RT-qPCR方法特异、灵敏、稳定、快捷，可同时用于PEDV、TGEV和PDCoV的临床检测和鉴别诊断，为猪腹泻冠状病毒的检测和流行病学调查提供了一种检测方法。

关键词：猪流行性腹泻病毒传染性胃肠炎病毒猪δ冠状病毒 RT-qPCR 检测方法

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抗肝片吸虫新药碘醚柳胺的合成研究

兽医大学学报 1989年第1期9卷 16-20页

作者：戴国华张万义郭凤兰贺尊诗兽医大学中心实验室兽医大学兽药厂长春应化所

以邻二氯苯为起始原料,经硝比、醚化、还原、卤化、缩会等五步反应(总收率约46％),合成了抗肝片吸虫新药碘醚柳胺,并以红外光谱、质谱和元素分析等对此化学结构进行了确证。

关键词：碘醚柳胺肝片吸虫病兽医药制备

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兽用抗菌复方制剂研究进展

中国兽医杂志 2025年第1期61卷 106-114页

作者：王茹寇紫艳田校源黄玲利华中农业大学动物医学院国家兽药残留基准实验室湖北武汉430070 国家兽药安全评价实验室湖北武汉430070 农业农村部兽药残留检测重点实验室湖北武汉430070

随着动物感染性疾病的复杂化和细菌耐药性的发展,兽医临床急需对混合感染和耐药菌有效的新型抗菌药物,但新药开发难度大、费用高、周期长。抗菌药联合使用既可以增加抗菌谱,又可以防止耐药性出现,在疾病治疗中起着重要的作用。复方制剂... 详细信息

随着动物感染性疾病的复杂化和细菌耐药性的发展,兽医临床急需对混合感染和耐药菌有效的新型抗菌药物,但新药开发难度大、费用高、周期长。抗菌药联合使用既可以增加抗菌谱,又可以防止耐药性出现,在疾病治疗中起着重要的作用。复方制剂是抗菌药联合使用的简易形式,因此兽用复方制剂研制具有广阔发展空间。本文总结了兽用抗菌复方制剂研发、批准和使用情况的研究进展,提出了兽用抗菌复方制剂研发中存在的主要问题,为今后相关的科学研究和产品研发提供了一定的参考。

关键词：兽药复方制剂抗菌药联合用药

不同来源功能性寡糖对奶牛体外瘤胃发酵产气参数、发酵参数和微生物区系的影响

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动物营养学报 2025年

作者：郭芸芳常帅飞程雨辰李彩琴刘小女徐晓锋张力莉宁夏大学动物科技学院庄浪县畜牧兽医中心

本试验旨在研究不同来源功能性寡糖对奶牛体外瘤胃发酵产气参数、发酵参数和微生物区系的影响。采用体外瘤胃发酵法,以苜蓿干草为发酵底物,选取大豆寡糖、壳寡糖和甘露寡糖,并分别添加0（对照）、0.5%、1.5%和3.0%,每个处理6个重复。结... 详细信息

本试验旨在研究不同来源功能性寡糖对奶牛体外瘤胃发酵产气参数、发酵参数和微生物区系的影响。采用体外瘤胃发酵法,以苜蓿干草为发酵底物,选取大豆寡糖、壳寡糖和甘露寡糖,并分别添加0（对照）、0.5%、1.5%和3.0%,每个处理6个重复。结果表明:1)体外瘤胃发酵48 h产气快速产气部分按甘露寡糖<大豆寡糖<壳寡糖的顺序依次显著升高（P<0.05）,慢速产气部分和潜在产气量按壳寡糖<甘露寡糖<大豆寡糖的顺序依次显著升高（P<0.05）,产气速率按壳寡糖<大豆寡糖<甘露寡糖的顺序依次显著升高（P<0.05）。当添加水平为3.0%时,3种寡糖慢速产气部分、产气速率和潜在产气量均显著高于对照处理（P<0.05）,而快速产气部分显著低于对照处理（P<0.05）。2)3种寡糖的添加水平显著影响体外瘤胃发酵总挥发性脂肪酸（TVFA）和氨态氮（NH3-N）)含量（P<0.05）,当添加水平为3.0%时TVFA含量最高,NH3-N含量最低,显著高于（或低于）对照处理和0.5%添加水平处理（P<0.05）。3)与对照处理相比,添加3.0%大豆寡糖和3.0%壳寡糖显著提高体外瘤胃发酵微生物群落Shannon指数（P<0.05）;添加3.0%壳寡糖和3.0%甘露寡糖均显著提高厚壁菌门相对丰度（P<0.05）,显著降低变形菌门相对丰度（P<0.05）;添加3.0%大豆寡糖和3.0%壳寡糖均显著提高拟杆菌门相对丰度（P<0.05）;添加3.0%的3种寡糖均显著降低埃希氏-志贺氏菌属相对丰度（P<0.05）,添加3.0%大豆寡糖显著提高链球菌属和柠檬酸杆菌属相对丰度（P<0.05）,添加3.0%壳寡糖显著提高月形单胞菌属1相对丰度（P<0.05）,添加3.0%甘露寡糖显著提高瘤胃球菌属、链球菌属和克里斯滕森菌科R-7群相对丰度（P<0.05）。综上所述,在本试验条件下,添加不同来源功能性寡糖对体外瘤胃发酵模式和挥发性脂肪酸生成均产生一定影响,且呈剂量依赖趋势提高瘤胃发酵效率;添加3.0%大豆寡糖、壳寡糖和甘露寡糖能够提高部分纤维降解菌和淀粉降解菌的相对丰度,有利于提高发酵液中乙酸和丙酸含量,提高能量利用效率,同时降低部分有害菌相对丰度。

关键词：功能性寡糖瘤胃产气参数发酵参数微生物区系体外

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“维力康”肉鸡饲料添加剂对比饲养试验

上海畜牧兽医通讯 1989年第4期 14-15页

作者：范煌管鸿德许妙华朱萍上海新杨兽药厂

为满足城市人民食用蛋品需求量的不断增长,上海市已在加速发展蛋鸡生产基地的建设。科学化饲养是确保蛋鸡生产的关键。为此,上海新杨兽药厂开发研制蛋鸡饲料添加剂,目的在为工厂化饲养蛋鸡服务。要求产品达到如下几项指标: (1)在营养上... 详细信息

为满足城市人民食用蛋品需求量的不断增长,上海市已在加速发展蛋鸡生产基地的建设。科学化饲养是确保蛋鸡生产的关键。为此,上海新杨兽药厂开发研制蛋鸡饲料添加剂,目的在为工厂化饲养蛋鸡服务。要求产品达到如下几项指标: (1)在营养上能部分或全部替代鱼粉,并能改善蛋的品质和口味;

关键词：肉鸡饲料添加剂饲养试验维力康

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氨胆注射液临床应用效果观察

甘肃畜牧兽医 1997年第5期27卷 24-25页

作者：张佩张安祥洛阳市兽药厂

氨胆注射液临床应用效果观察张佩张安祥（洛阳市兽药厂偃师４７１９００）氨胆注射液是新研制的一种兽药产品，是以猪胆汁的总有效成分提出物———胆素（ＢｉｌｉＥｌｅｍｅｎｔ）为基础，配伍氨基比林按水针剂工艺制备，故称氨胆注... 详细信息

氨胆注射液临床应用效果观察张佩张安祥（洛阳市兽药厂偃师４７１９００）氨胆注射液是新研制的一种兽药产品，是以猪胆汁的总有效成分提出物———胆素（ＢｉｌｉＥｌｅｍｅｎｔ）为基础，配伍氨基比林按水针剂工艺制备，故称氨胆注射液。临床应用证明，本品药理功能多...

关键词：兽医氨胆注射液临床应用

牛分枝杆菌分子标识物的筛选及在豚鼠体内的初步评价

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微生物学通报 2025年

作者：辛凌翔孙伟峰王楠李俊平朱良全王豪杰徐磊郭鑫中国农业大学中国兽医药品监察所

【背景】牛结核病（Bovine Tuberculosis， BTB）是一种由结核分枝杆菌复合体中的牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的慢性传染性疾病，对牛群健康、畜牧业经济和公共卫生构成了重大威胁。【方法】利用同位素标记的相对与绝对定量... 详细信息

【背景】牛结核病（Bovine Tuberculosis， BTB）是一种由结核分枝杆菌复合体中的牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的慢性传染性疾病，对牛群健康、畜牧业经济和公共卫生构成了重大威胁。【方法】利用同位素标记的相对与绝对定量技术及结合文献报道筛选出11种蛋白质（Mpb70、GroEL2、HspX、DnaK、Mpb83、EsxW、BfrB、Hrp1、EsxL、AtpD和EsxN）进行制备，并通过豚鼠模型评价其致敏效果。【结果】当重组蛋白量为100μg时，Mpb70、HspX、Mpb83和EsxN可引起明显的迟发型过敏反应，且出现破溃。当使用量为50 μg时，Mpb70、HspX、Mpb83、EsxW、EsxL和EsxN可引起明显的迟发型过敏反应。当使用量低至12.5 μg时，则无法引起豚鼠的迟发型过敏反应。对不同蛋白进行组合使用，EsxW/EsxL /EsxN组合的活性最好，可刺激豚鼠产生明显的迟发型过敏反应；EsxW/EsxL、EsxW/EsxN、EsxL/EsxN组合也可引起迟发型过敏，但其反应程度不如EsxW/EsxL /EsxN组合。【结论】重组蛋白Mpb70、HspX、Mpb83、EsxW、EsxL和EsxN可引起较好的迟发型过敏反应，具有可替代结核菌素的应用前景。

关键词：豚鼠模型迟发型过敏反应重组蛋白结核菌素

稳定表达小反刍兽疫病毒N蛋白的THP-1细胞系的建立与应用

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中国兽医科学 2025年

作者：李玲霞张旭辉令小东韩生义吴锦艳尚佑军青海大学农牧学院青海大学畜牧兽医科学院中国农业科学院兰州兽医研究所

旨在利用慢病毒载体构建一种稳定表达小反刍兽疫病毒（PPRV）N蛋白的THP-1细胞系，并验证该细胞系在PPRV激活炎症反应中的作用。首先采用PCR技术扩增N基因，进而构建慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-Puro-N。随后将该载体与... 详细信息

旨在利用慢病毒载体构建一种稳定表达小反刍兽疫病毒（PPRV）N蛋白的THP-1细胞系，并验证该细胞系在PPRV激活炎症反应中的作用。首先采用PCR技术扩增N基因，进而构建慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-Puro-N。随后将该载体与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共同转染至HEK293T细胞，通过包装获得表达N蛋白的慢病毒。接着将慢病毒感染THP-1细胞，再使用嘌呤霉素筛选，之后利用细胞有限稀释法得到稳定表达N蛋白的THP-1细胞系，最后采用ELISA和Western-blot检测该细胞系对PPRV激活炎症反应的影响。结果表明，成功构建了THP-1-N细胞系，不仅该细胞系活力较好，而且具备稳定传代的能力。且稳定表达N蛋白的THP-1细胞可显著促进由PPRV感染所诱导的IL-1β表达，进而激活炎症反应。综上所述，成功建立了一种能够稳定表达N蛋白的THP-1细胞系，为PPRV感染及致病机制研究提供了重要的生物材料。

关键词：小反刍兽疫病毒 N蛋白慢病毒细胞系炎症小体