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绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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畜牧与兽医 2024年第7期56卷 78-84页

作者：刘晓艳王永飞邓博文哈尔勒哈·阿曼太蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到... 详细信息

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到30S rpsE基因片段,经NdeⅠ、XhoⅠ酶切纯化后,将其连接到pET-42b载体上,构建原核表达载体pET-42b-30S rpsE,使用不同浓度IPTG诱导蛋白在大肠杆菌BL21中表达;重组蛋白通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用镍层析法纯化蛋白后,与弗氏佐剂1∶1混合注射免疫家兔,然后采取全血,检测血清抗体效价及特异性。结果:经预测30S rpsE蛋白是亲水无信号肽的膜外蛋白,无跨膜结构域,有一个糖基化位点;成功构建了原核表达载体pET-42b-30S rpsE,表达的重组蛋白分子量约为25.9 ku,以包涵体和可溶性的形式存在;免疫家兔后血清抗体效价为1∶25 600,证实30S rpsE蛋白具有较好的免疫原性。

关键词：肺炎支原体 30S rpsE基因原核表达多克隆抗体

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新疆部分地区马粪源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性及毒力基因检测

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 658-665页

作者：李静刘鏊陀海欣于月通马志远王甜吴静张秀萍齐萌塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

为调查新疆4个地区马源大肠杆菌的携带情况,采集56份马粪便样本进行大肠杆菌分离鉴定,采用药敏纸片法和结晶紫微孔板法对分离株进行相关特性测定,并对其毒力基因和耐药基因进行检测。结果显示:从56份样本中分离到41株大肠杆菌,分离率为7... 详细信息

为调查新疆4个地区马源大肠杆菌的携带情况,采集56份马粪便样本进行大肠杆菌分离鉴定,采用药敏纸片法和结晶紫微孔板法对分离株进行相关特性测定,并对其毒力基因和耐药基因进行检测。结果显示:从56份样本中分离到41株大肠杆菌,分离率为73.2%(41/56);分离株对利福平(97.6%)、头孢噻吩(46.3%)、复方新诺明(29.3%)、四环素(24.4%)和氯霉素(19.5%)等表现出不同程度的耐药性;分离株中,生物被膜形成能力中等的有7株(17.1%,7/41),弱的有32株(78.0%,32/41),不形成的有2株(4.9%,2/41);从16种毒力基因中,共检出fim C(87.8%,36/41)、fyuA(58.5%,24/41)、irp2(41.5%,17/41)、sepA(36.6%,15/41)和hlyF(22.0%,9/41)5种毒力基因;从11种耐药基因中,共检出parC、gyrA和gyrB(100.0%,41/41),sul2(31.7%,13/41)、floR(22.0%,9/41)、blaTEM(22.0%,9/41)、blaCTX(12.2%,5/41)和aadA(2.4%,1/41)8种耐药基因。结果表明:新疆4个地区的马源大肠杆菌针对不同抗生素具有不同程度的耐药性,此外,这些菌株可形成生物被膜,并且携带有多种毒力基因和耐药基因。为新疆马源大肠杆菌病的临床用药和防治提供了试验数据。

关键词：大肠杆菌生物被膜形成毒力基因耐药基因马新疆

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禽白血病的病理及分子生物学诊断

中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2671-2679页

作者：肖静万金隆杨江宇杨梦娇焦海宏塔里木大学动物科学与技术学院阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300

【目的】了解新疆某市鸡群E型禽白血病(E-avian leukosis)的感染情况及基因分子特征,为禽白血病的诊断和防控提供参考。【方法】本研究通过病理剖检、病理组织学观察、PCR检测、克隆载体连接等对疑似禽白血病病例进行实验室诊断,并通过D... 详细信息

【目的】了解新疆某市鸡群E型禽白血病(E-avian leukosis)的感染情况及基因分子特征,为禽白血病的诊断和防控提供参考。【方法】本研究通过病理剖检、病理组织学观察、PCR检测、克隆载体连接等对疑似禽白血病病例进行实验室诊断,并通过DNAStar软件将分离株与参考毒株进行env基因核苷酸序列相似性比对、系统进化树构建和变异位点分析。【结果】发病鸡肝脏、心脏、脾脏、肾脏、肺脏等器官肿大,有大小不一的白色结节状病灶。病理组织学观察病灶为大小一致的成淋巴细胞,呈局灶性、弥漫性分布。禽白血病病毒(Avian leukaemia virus, ALV)基因组PCR扩增结果显示,获得大小为302 bp的目的条带,为ALV阳性;对阳性样品进行分型鉴定,阳性样品出现大小为1 074 bp的ALV-E特异性条带,分别命名为AKS2101和AKS2102。序列分析结果显示,分离株与E亚群毒株序列相似性为91.6%~98.6%。系统进化树显示,所得序列与ALV-E亚群参考株处于同一分支,与A、B、C、D、J、K亚群参考株处于不同进化分支,进一步说明该鸡群存在ALV-E感染。基因变异分析显示,分离株存在24处核苷酸变异和17处氨基酸位点变异,且可变位点位于序列高变区。【结论】新疆某市鸡群存在ALV-E感染,本试验为明确该地禽白血病流行情况提供基础数据。

关键词：禽白血病病毒(ALV) E亚型病理分子生物学基因序列诊断

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吉他霉素纳米凝胶制备与评价

中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1737-1745页

作者：马蓓王天扬丁泽董天祯刘盼张耀锋刘俊峰塔里木大学动物科学与技术学院阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300

【目的】制备一种可局部递送吉他霉素用于皮肤创口感染的纳米凝胶。【方法】以京尼平为交联剂在希夫碱作用下,通过凝胶材料之间的静电作用制备壳聚糖/明胶/聚乙烯醇纳米凝胶,并载入药物吉他霉素,对其包封率、载药量、溶胀性能、纳米粒径... 详细信息

【目的】制备一种可局部递送吉他霉素用于皮肤创口感染的纳米凝胶。【方法】以京尼平为交联剂在希夫碱作用下,通过凝胶材料之间的静电作用制备壳聚糖/明胶/聚乙烯醇纳米凝胶,并载入药物吉他霉素,对其包封率、载药量、溶胀性能、纳米粒径、Zeta电位、微观结构扫描等表征结构及生物安全性进行测试,评估纳米凝胶的体外释放效果和伤口愈合活性。【结果】本研究制备的吉他霉素纳米凝胶,在其组方为每25 mL凝胶中含吉他霉素0.25 g、壳聚糖0.4 g、明胶0.3 g、聚乙烯醇0.2 g,京尼平0.2 g,其余量为去离子水时外观性状为淡蓝色纳米凝胶,无沉淀与药物析出,溶胀度高,载药量为13.6%,包封率为83.1%;扫描电镜下可见该纳米凝胶形成孔隙致密且分布均匀的三维网状结构;平均粒径为28.56 nm,Zeta电位为16.33 mV;生物安全性良好;纳米凝胶在体外释放药物可维持48 h,明显长于吉他霉素溶液的释放时间。此外,纳米凝胶还能使小鼠伤口缩小96%,有助于伤口愈合。【结论】本研究成功制备了吉他霉素纳米凝胶,通过体内体外试验评估证明了其潜在的药物控释与促进皮肤伤口愈合的能力。

关键词：吉他霉素纳米凝胶药物控释伤口愈合

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绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 689-699页

作者：王永飞邓博文刘晓艳哈尔勒哈·阿曼太郭嘉栋周正国蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300 阿克苏职业技术学院阿克苏843000

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu... 详细信息

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点,二级结构由无规则卷曲(35.14%)、α-螺旋(26.87%)、延伸链(26.87%)及β-转角(11.11%)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的蛋白大小约为43 ku,蛋白纯化浓度为0.615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000,能够特异性识别EF-Tu融合蛋白,具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了EF-Tu基因的TGA密码子,原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白,制备其多克隆抗体效价为1∶128 000,为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。

关键词：绵羊肺炎支原体重叠延伸PCR EF-Tu基因多克隆抗体

新疆阿克苏地区鸭源鸡杆菌的分离鉴定和生物学特性分析

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中国兽医杂志 2024年第2期60卷 46-53页

作者：郝斌张家浩黎双李雪娇陈鑫刘淑华梁樊鑫侯梦哲李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

为确定引起新疆维吾尔自治区阿克苏地区某鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的原因,本试验对采集自该鸡场病鸡的组织进行细菌分离和培养,对分离菌株进行形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列鉴定,并进行药敏试验和动物回归试验。结果显示,从病鸡... 详细信息

为确定引起新疆维吾尔自治区阿克苏地区某鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的原因,本试验对采集自该鸡场病鸡的组织进行细菌分离和培养,对分离菌株进行形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列鉴定,并进行药敏试验和动物回归试验。结果显示,从病鸡病料中分离获得1株革兰阴性杆菌;生化试验结果显示,该分离菌株能分解乳糖和果糖等,过氧化氢酶、甘露醇和氧化酶等反应呈阳性;16S rRNA基因核苷酸序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鸭源鸡杆菌同源性>99.9%;药敏试验结果显示,该分离菌株对四环素、氯霉素和环丙沙星等10种抗菌药耐药;动物回归试验结果显示,23周龄开产母鸡经生殖道接种分离菌株后采食量减少、产蛋量下降,剖检主要表现为输卵管炎、卵泡充血和变形等生殖道病变,与自然发病鸡一致;同居雏鸡与人工感染雏鸡分别在同居第2天和人工感染后第4天,可从上颚裂中分离出鸭源鸡杆菌,注射高浓度分离菌株可致雏鸡死亡。结果表明,引起该鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的病原为鸭源鸡杆菌。本试验结果为治疗和防控鸭源鸡杆菌提供借鉴,为鸭源鸡杆菌的进一步研究提供了参考材料。

关键词：鸭源鸡杆菌分离与鉴定 16S rRNA 耐药性分析

南疆规模化养殖场羊产气荚膜梭菌的病原检测及分离鉴定

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现代畜牧兽医 2024年第5期 1-6页

作者：万金隆肖静郭嘉栋杨江宇杨梦娇焦海宏塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

研究旨在了解南疆地区规模化羊场羊梭菌病的流行情况,无菌采集南疆巴州、阿克苏、和田等3个地区9个规模化羊场粪便和青贮饲料样品共421份,并采集3起疑似梭菌病病死羊组织样品6份,通过细菌分离培养、革兰氏染色,挑取纯化后的单菌落进行... 详细信息

研究旨在了解南疆地区规模化羊场羊梭菌病的流行情况,无菌采集南疆巴州、阿克苏、和田等3个地区9个规模化羊场粪便和青贮饲料样品共421份,并采集3起疑似梭菌病病死羊组织样品6份,通过细菌分离培养、革兰氏染色,挑取纯化后的单菌落进行生化鉴定、16S rRNA基因鉴定、细菌分型和药敏试验。结果显示:427份样品中共分离出71株产气荚膜梭菌,总分离率为16.63%。其中119份青贮饲料样品中有25份阳性,检出率为21.01%(25/119);302份羊粪便样品中有40份阳性,检出率为13.24%(40/302);6份临床样品均显示阳性,检出率100.00%。对71株产气荚膜梭菌进行细菌分型鉴定,其中A型产气荚膜梭菌有57株,D型产气荚膜梭菌有4株,F型产气荚膜梭菌10株。药敏试验结果显示,分离株对临床常用药物青霉素等高度敏感,对磺胺异恶唑、多西环素、四环素、庆大霉素和黏菌素B耐药。研究表明,南疆地区规模化羊场产气荚膜梭菌的感染风险较高,需要在饲养管理上引起足够重视。

关键词：南疆规模化羊场羊产气荚膜梭菌毒素基因耐药性

1株马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌致病性分析

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 718-726页

作者：吴自豪蔡依龙陀海欣陈伟塔里木大学生命科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300 塔里木大学动物科学与技术学院阿拉尔843300

国内鲜有马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)相关报道,本研究对1株新疆马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌的致病性进行评估,以期为马乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础数据。使用选择性培养基从新疆健康马乳中分... 详细信息

国内鲜有马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)相关报道,本研究对1株新疆马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌的致病性进行评估,以期为马乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础数据。使用选择性培养基从新疆健康马乳中分离金黄色葡萄球菌,然后通过生化鉴定和分子鉴定方法对金黄色葡萄球菌进行鉴定。对所获得的金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、spa分型、药物敏感性检测、生物被膜形成能力、溶血活性、毒力基因检测、小鼠皮肤脓肿和致病性试验。再对分离株进行小鼠细胞的黏附、侵袭和胞内增殖试验,以评估其致病性。结果显示,从马乳中分离得到1株PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(1/65,1.5%),spa分型为t304。仅对青霉素耐药,无生物被膜形成能力,但携带9种毒力基因(sec、seg、seh、tsst-1、hla、hlb、clfA、clfB和cna),并且具有溶血活性。小鼠皮肤脓肿和致病性试验表明,其可导致小鼠形成皮肤脓肿,并且在高剂量感染时可导致小鼠死亡。ST22型金黄色葡萄球菌可在小鼠巨噬细胞中黏附(4.26%)、侵袭(6.45%)和胞内增殖,并可造成细胞凋亡。综上,马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌具有较强的致病力,可能在宿主致病和公共卫生安全等方面存在隐患。

关键词：马乳 PVL+ ST22型金黄色葡萄球菌致病性

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甘草酸对肉仔鸡免疫性能的影响研究

当代畜牧 2024年第2期 41-44页

作者：万金隆郭嘉栋肖静杨江宇焦海宏塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

为了解甘草酸的活性,探究甘草酸对肉仔鸡免疫的影响,笔者进行了试验。选择体型相近且健康状况良好的实验鸡10只,解剖后剥离腔上囊、脾脏和胸腺器官称重,统计免疫器官所占体重百分比,分析与同期脏器指数的体重差;测定血清中IgA、IgG、Ig... 详细信息

为了解甘草酸的活性,探究甘草酸对肉仔鸡免疫的影响,笔者进行了试验。选择体型相近且健康状况良好的实验鸡10只,解剖后剥离腔上囊、脾脏和胸腺器官称重,统计免疫器官所占体重百分比,分析与同期脏器指数的体重差;测定血清中IgA、IgG、IgM的含量以及抗氧化性能指标。结果表明,甘草酸可有效减少肉仔鸡的免疫应激,从而发挥免疫调节作用。

关键词：甘草酸黄羽肉仔鸡免疫显著性