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肾上腺脑白质营养不良分子诊断中假基因干扰的排除

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生物化学与生物物理进展 2004年第6期31卷 572-575页

作者：黄梁浒郑德柱曾健辛娜兰风华南京军区福州总医院全军医学检验中心福州350025

在基因组DNA水平 ,应用基因突变分析的方法对肾上腺脑白质营养不良进行分子诊断十分重要 .由于人体内存在多个肾上腺脑白质营养不良假基因的拷贝 ,应用PCR RFLP和PCR产物直接测序等常规方法难以检测一部分的基因突变 .为了排除基因组DN... 详细信息

在基因组DNA水平 ,应用基因突变分析的方法对肾上腺脑白质营养不良进行分子诊断十分重要 .由于人体内存在多个肾上腺脑白质营养不良假基因的拷贝 ,应用PCR RFLP和PCR产物直接测序等常规方法难以检测一部分的基因突变 .为了排除基因组DNA中假基因的干扰 ,利用扩增阻滞突变系统 ,成功地分析了一个肾上腺脑白质营养不良 (R6 17G突变 )家系成员的基因型 .结果表明 ,扩增阻滞突变系统是排除假基因干扰的有效方法之一 .

关键词：肾上腺脑白质营养不良分子诊断 ABCD1基因假基因扩增阻滞突变系统

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初乳中丙型肝炎病毒标志物的测定

中华妇产科杂志 1997年第3期32卷 138-140页

作者：熊华李保仝武建国杨毓华齐名南京军区南京总医院全军医学检验中心

目的：检测乳汁中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）标志物，探讨丙型肝炎病毒通过母乳传播的可能性。方法：用间接酶联免疫吸附试验同时检测血清和初乳中抗ＨＣＶ－ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ３类抗体；并用逆转录聚合酶链反应检测ＨＣＶＲＮＡ。结... 详细信息

目的：检测乳汁中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）标志物，探讨丙型肝炎病毒通过母乳传播的可能性。方法：用间接酶联免疫吸附试验同时检测血清和初乳中抗ＨＣＶ－ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ３类抗体；并用逆转录聚合酶链反应检测ＨＣＶＲＮＡ。结果：在血清抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性的３５例产妇初乳标本中，抗ＨＣＶ－ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体分别检出１９例、６例及１例。ＨＣＶＲＮＡ在３５份血清中阳性检出率为４０．０％（１４／３５），而初乳中仅检出２例（５．７％；２／３５），两者之间有明显差异（Ｐ＜０．０１）。结论：血清抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性产妇初乳中的抗ＨＣＶ抗体以ＩｇＡ类为主；血清中ＨＣＶＲＮＡ的检出率明显高于初乳。血清抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性的产妇，尤其是初乳中抗ＨＣＶ－ＩｇＡ和ＨＣＶＲＮＡ也为阳性者，有可能通过哺乳而导致婴儿感染ＨＣＶ。

关键词：初乳丙型肝炎病毒标志物测定垂直传播

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免疫学检测技术的某些进展

临床检验杂志 1992年第1期10卷 39-40页

作者：武建国李晓军全军医学检验中心南京军区南京总医院临床免疫科 210002

60年代和70年代初期先后建立的放射免疫分析技术和ELISA 技术,已广泛应用于医学、生物学的各个领域.有关DNA 杂交、生物发光、化学发光、免疫胶体金、免疫转印、免疫斑点技术等在我国也有了不同程度的推广.本文就近年来免疫学检测技术... 详细信息

60年代和70年代初期先后建立的放射免疫分析技术和ELISA 技术,已广泛应用于医学、生物学的各个领域.有关DNA 杂交、生物发光、化学发光、免疫胶体金、免疫转印、免疫斑点技术等在我国也有了不同程度的推广.本文就近年来免疫学检测技术的一些进展作一简要介绍.

关键词：免疫学检测技术

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抗DNA阳性参考血清的制备

现代免疫学 1993年第3期13卷 190-191页

作者：黄邱朝丁庆全军医学检验中心南京军区南京总医院临床免疫科南京 210002 全军医学检验中心南京军区南京总医院临床免疫科

检测抗DNA抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断、病情和预后估计有重要意义。由于DNA种属特异性较差,用实验动物难以诱导出抗体,以至

关键词：血清 DNA 抗体阳性

高效液相色谱法同时测定假尿核苷和肌酐的研究及应用

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分析化学 1993年第9期21卷 993-995页

作者：许丹科谭力袁倚盛南京军区南京总医院全军医学检验中心南京军区南京总医院全军医学检验中心南京 210002

本文用高效液相色谱法同时测定人尿中假尿核苷和肌酐,研究了流动相的pH值变化对色谱行为的影响,方法简便、快速,已成功地用于对正常人、肺部感染及肺癌患者的尿样分析,其结果有显著性差异。

关键词：假尿核苷肌酐高效液相色谱法

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军团菌病及其实验诊断的某些进展

临床检验杂志 1998年第2期16卷 118-123页

作者：武建国南京军区南京总医院全军医学检验中心

军团菌病及其实验诊断的某些进展武建国（南京军区南京总医院全军医学检验中心，南京２１０００２）自从１９７６年美国费城爆发军团菌病流行迄今，２０年已经过去了。我国分离出国内第一株军团菌病杆菌也已过了１５年。但正如美国佛明... 详细信息

军团菌病及其实验诊断的某些进展武建国（南京军区南京总医院全军医学检验中心，南京２１０００２）自从１９７６年美国费城爆发军团菌病流行迄今，２０年已经过去了。我国分离出国内第一株军团菌病杆菌也已过了１５年。但正如美国佛明特大学医学院病理学系的Ｗａｓｈｉｎ...

关键词：军团菌病诊断实验室诊断

CyP A三类Ig自身抗体测定方法的建立与临床应用

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临床检验杂志 1998年第5期16卷 262-265页

作者：虞伟李芳秋赵权武建国南京军区南京总医院全军医学检验中心临床免疫实验室

利用基因重组技术，大肠杆菌表达人环胞菌素Ａ结合蛋白（ｒｈＣｙＰＡ），建立测定抗ＣｙＰＡ自身抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），探讨抗ＣｙＰＡ抗体与临床疾病的关系。重组菌可溶性蛋白经饱和硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈ... 详细信息

利用基因重组技术，大肠杆菌表达人环胞菌素Ａ结合蛋白（ｒｈＣｙＰＡ），建立测定抗ＣｙＰＡ自身抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），探讨抗ＣｙＰＡ抗体与临床疾病的关系。重组菌可溶性蛋白经饱和硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ柱层析，获取ｒｈＣｙＰＡ蛋白，用该纯化物作为抗原，方阵滴定，建立ＥＬＩＳＡ技术，对各类自身免疫病进行评估测定。ｒｈＣｙＰＡ经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，分子量为１８ｋＤ。在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者中，发现有４０．３％的病人检出有抗ＣｙＰＡ自身抗体（５８／１４４），三类Ｉｇ中，又以ＩｇＧ类抗体检出率最为突出，为２８％（４０／１４４）；而其他自身免疫病病人抗ＣｙＰＡ抗体总体检出率为０％～１８．１％。

关键词：环胞素A 结合蛋白自身免疫病自身抗体 CyP-A

人钙调素基因表达载体的构建及在大肠杆菌DH5α中的表达

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中国免疫学杂志 2000年第2期16卷 61-63页

作者：李晓军武建国郭大文徐建平南京军区南京总医院全军医学检验中心免疫室南京210002

目的:构建人钙调素(CaM)基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达人CaM蛋白。方法:用PCR方法获得人钙调素基因Ⅲ(hCaMⅢcDNA),将其插入表达载体pBV220,构建重组表达质粒hCaMⅢ/pBV220,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆。结果:阳... 详细信息

目的:构建人钙调素(CaM)基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达人CaM蛋白。方法:用PCR方法获得人钙调素基因Ⅲ(hCaMⅢcDNA),将其插入表达载体pBV220,构建重组表达质粒hCaMⅢ/pBV220,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆。结果:阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDSPAGE分析,可观察到一分子量与理论值相符(约17kD)的诱导表达条带,其表达量占菌体蛋白总量的20%。进一步分析表达产物的性质表明,CaM主要以可溶性形式表达。Westernblot结果证实,17kD的表达条带可与标准鼠抗CaMMcAb起特异反应。结论:用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达人CaM,为进一步研究CaM的生物学功能及研制抗CaM单克隆抗体奠定基础。

关键词：钙调素基因表达大肠杆菌 DH5α

聚苯乙烯微孔板的表面修饰对酶免疫结果的影响

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临床检验杂志 2005年第4期23卷 269-272页

作者：虞伟林颖武建国南京军区南京总医院全军医学检验中心临床免疫实验室南京210002

目的对聚苯乙烯板(PS)进行适当的修饰处理,以改善酶免疫分析的测定效果。方法以辣根过氧化物酶(HRP)为固相分子,用以观察酶与特异性底物之间的相互作用;用重组人增强肝脏再生因子(rhALR)、双链DNA(dsDNA)、心磷脂为包被抗原,以未氧化型... 详细信息

目的对聚苯乙烯板(PS)进行适当的修饰处理,以改善酶免疫分析的测定效果。方法以辣根过氧化物酶(HRP)为固相分子,用以观察酶与特异性底物之间的相互作用;用重组人增强肝脏再生因子(rhALR)、双链DNA(dsDNA)、心磷脂为包被抗原,以未氧化型与氧化型抗ALR为包被抗体,分别固定于不同修饰的PS板表面进行酶免疫分析,并与未经修饰处理的PS板作对比研究。结果生物分子的固定效果除与固相表面特征不同有关外,还与其本身的性质、所处的物理状态(包括分子的种类、结构、分子量大小和表面电荷等)密切相关。其中APTES与PLL修饰表面可显著改善rhALR、dsDNA、心磷脂抗原及氧化型抗体分子的固相化效果,提高酶免疫分析的吸光度值和测定敏感度。UV辐照PS板用于抗ALR和抗dsDNA抗体,醛基化表面(GA修饰)用于抗心磷脂抗体的测定亦可获得较高的特异信号显示与低背景噪音。AFM表征结果显示:疏水物理吸附的生物分子分布是随机和不规则的,且为聚集成团分布;而电荷引力与共价结合模式固定的生物分子空间取向与分布较为均一,可提高固定生物分子的数量和功能化保留程度。结论PS板经修饰处理后可改善对免疫分子的吸附能力,基于共价键和电荷引力结合模式可获得较为满意的酶免疫测试效果。

关键词：聚苯乙烯微孔板免疫结果表面修饰抗dsDNA抗体酶免疫分析辣根过氧化物酶生物分子抗心磷脂抗体结合模式聚苯乙烯板 rhALR 氧化型相互作用再生因子包被抗原对比研究表面特征固定效果物理状态表面电荷抗体分子