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奶牛隐性乳房炎肠球菌的分离、鉴定及药敏试验

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黑龙江畜牧兽医 2019年第12期 79-81,168页

作者：邓凯伟贾世云赵云焕信阳农林学院牧医工程学院/河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心

为了对奶牛隐性乳房炎的肠球菌进行分离、鉴定及其耐药情况分析,试验采用细菌富集、分离纯化、生化鉴定、PCR测定的方法对采集的8个奶牛场26份奶样进行肠球菌的检测,并对分离菌进行药敏试验。结果表明:肠球菌在哥伦比亚血琼脂培养基上... 详细信息

为了对奶牛隐性乳房炎的肠球菌进行分离、鉴定及其耐药情况分析,试验采用细菌富集、分离纯化、生化鉴定、PCR测定的方法对采集的8个奶牛场26份奶样进行肠球菌的检测,并对分离菌进行药敏试验。结果表明:肠球菌在哥伦比亚血琼脂培养基上形成圆形隆起、光滑湿润、乳白色、透明水滴样的半圆形菌落,革兰氏染色为阳性,呈椭圆形双球、短链状或长链状连续排列;待检细菌的生化试验结果符合肠球菌的生化特性;PCR扩增的目的条带大小为1 681 bp,扩增序列在NCBI上通过BLAST进行同源性比对分析,确定为肠球菌;分离的肠球菌对万古霉素、诺氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、呋喃妥因高度敏感,对红霉素中度敏感,对克林霉素、克拉霉素、米诺环素、复方新诺明低度敏感,对大观霉素、四环素、青霉素G、苯唑西林、多黏菌素B耐药。说明通过哥伦比亚血琼脂培养基和PCR技术可以分离与鉴定乳房炎奶样中的肠球菌,可交替使用上述敏感抗生素对由肠球菌引起的奶牛乳房炎进行防治。

关键词：奶牛乳房炎肠球菌 PCR 生化鉴定药敏试验

三种中草药提取物及其复方组合对奶牛隐性乳腺炎病原菌的体外抑菌试验

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黑龙江畜牧兽医 2019年第17期 135-137页

作者：邓凯伟史资聪赵云焕信阳农林学院河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心

为了研究单味中草药提取物及其复方组合对奶牛隐性乳腺炎金黄色葡萄球菌、沙雷氏菌的抑菌效果,选用三种中草药进行单味中药及复方组合体外抑菌效果的研究。结果表明:25. 00 mg/m L的地榆对金黄色葡萄球菌中度敏感;6. 25 mg/m L的半枝莲... 详细信息

为了研究单味中草药提取物及其复方组合对奶牛隐性乳腺炎金黄色葡萄球菌、沙雷氏菌的抑菌效果,选用三种中草药进行单味中药及复方组合体外抑菌效果的研究。结果表明:25. 00 mg/m L的地榆对金黄色葡萄球菌中度敏感;6. 25 mg/m L的半枝莲对沙雷氏菌中度敏感;其余浓度的中草药对金黄色葡萄球菌、沙雷氏菌低度敏感。中草药复方组合抑菌试验中,浓度均为25. 00 mg/m L的半枝莲+地榆组合对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果,其抑菌圈直径为9. 67 mm。说明试验选用的三种单味中草药提取物及复方组合对金黄色葡萄球菌、沙雷氏菌有一定的抑菌效果。

关键词：奶牛隐性乳腺炎中草药抑菌效果复方组合体外抑菌

中草药及复方组合对奶牛隐性乳腺炎源大肠杆菌和阴沟肠杆菌的体外抑菌试验

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黑龙江畜牧兽医 2019年第13期 123-125页

作者：邓凯伟苗磊赵云焕信阳农林学院河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心

为了研究金银花、白头翁、石榴皮及复方组合对引起奶牛隐性乳腺炎的大肠杆菌和阴沟肠杆菌的抑菌效果,试验用2倍稀释法测定中草药的最小抑菌浓度(MIC),采用单味中草药及两种中草药复方组合对大肠杆菌和阴沟肠杆菌进行抑菌试验测定其敏感... 详细信息

为了研究金银花、白头翁、石榴皮及复方组合对引起奶牛隐性乳腺炎的大肠杆菌和阴沟肠杆菌的抑菌效果,试验用2倍稀释法测定中草药的最小抑菌浓度(MIC),采用单味中草药及两种中草药复方组合对大肠杆菌和阴沟肠杆菌进行抑菌试验测定其敏感性。结果表明:金银花、白头翁、石榴皮对大肠杆菌的MIC分别为25,20,25 mg/mL,对阴沟肠杆菌的MIC分别为50,40,50 mg/mL。三种单味中草药对大肠杆菌的抑菌效果不明显,抑菌效果依次为金银花>石榴皮>白头翁;三种单味中草药对阴沟肠杆菌的抑菌效果不明显,抑菌效果依次为白头翁>石榴皮>金银花。石榴皮和金银花的中草药组合对大肠杆菌的抑菌圈直径为8.74 mm,敏感;石榴皮和白头翁的中草药组合对阴沟肠杆菌的抑菌圈直径为7.84 mm,不敏感,但有一定程度的抑菌效果;白头翁和金银花的中草药复方组合对两种致病菌均不敏感。说明金银花、白头翁、石榴皮三种单味中草药对大肠杆菌和阴沟肠杆抑菌效果不明显,中草药复方组合的抑菌效果也不理想。

关键词：奶牛隐性乳腺炎中草药大肠杆菌阴沟肠杆菌抑菌效果复方组合

小鼠大肠杆菌乳房炎模型对其卵母细胞发育影响的研究

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黑龙江畜牧兽医 2019年第9期 88-90,182页

作者：邓凯伟王珍珠赵云焕信阳农林学院河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心河南信阳464100

为了研究构建的小鼠大肠杆菌乳房炎模型对生殖机能的影响,试验用浓度为6×10~9个/mL的大肠杆菌按体重19.03 mL/kg注射泌乳母鼠,然后测量体温,检测血液中白细胞数量,PCR扩增泌乳母鼠乳腺中大肠杆菌目的基因片段,观察病理组织切片,采集泌... 详细信息

为了研究构建的小鼠大肠杆菌乳房炎模型对生殖机能的影响,试验用浓度为6×10~9个/mL的大肠杆菌按体重19.03 mL/kg注射泌乳母鼠,然后测量体温,检测血液中白细胞数量,PCR扩增泌乳母鼠乳腺中大肠杆菌目的基因片段,观察病理组织切片,采集泌乳母鼠卵母细胞并进行体外培养。结果表明:人工成功诱导出泌乳母鼠大肠杆菌乳房炎模型;泌乳母鼠注射大肠杆菌菌液后其体温和血液中的白细胞数变化不明显(P>0.05);从泌乳母鼠乳腺组织中扩增出大肠杆菌目的基因片段;泌乳母鼠乳腺腺管及腺泡上皮细胞呈现不同程度的卡他性或化脓性乳腺炎病变;泌乳母鼠的卵母细胞发育到MⅡ期的成熟率显著降低(P<0.05)。说明人工诱导的泌乳母鼠大肠杆菌乳房炎模型对其卵子的发育能力具有一定的抑制作用。

关键词：乳房炎小鼠模型大肠杆菌卵母细胞成熟率

引起奶牛隐性乳房炎的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙雷氏菌的多重PCR检测

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黑龙江畜牧兽医 2019年第8期 90-92页

作者：邓凯伟马德青赵云焕信阳农林学院/河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心河南信阳464100

为了能同时检测奶牛隐性乳房炎中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙雷氏菌三种病原菌,试验设计了3对不同的特异性引物,在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙雷氏菌单重PCR的基础上进行多重PCR扩增。结果表明:扩增体系(50μL)为DNA Polymerase 1... 详细信息

为了能同时检测奶牛隐性乳房炎中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙雷氏菌三种病原菌,试验设计了3对不同的特异性引物,在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙雷氏菌单重PCR的基础上进行多重PCR扩增。结果表明:扩增体系(50μL)为DNA Polymerase 1μL,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙雷氏菌上、下游引物各1μL,混匀后取混合物5μL,2×Multiplex Buffer 25μL,DNA模板各2μL, ddH_2O 13μL。扩增程序为95℃5 min;95℃30 s, 60℃90 s, 72℃1 min,35个循环;72℃10 min。设计的多重PCR方法可同时扩增出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙雷氏菌的目的基因片段。说明用设计的3对特异性引物进行的多重PCR扩增特异性强,可用于临床。

关键词：奶牛隐性乳房炎多重PCR 金黄色葡萄球菌大肠杆菌沙雷氏菌

过表达MAT2A基因促进猪肌内脂肪细胞分化的研究

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中国畜牧兽医 2018年第9期45卷 2425-2432页

作者：赵存真吴海港唐雪峰焦凤超马云刘纪成信阳农林学院牧医工程学院河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心信阳464000 信阳师范学院生命科学学院信阳464000

本研究通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶2A(methionine adenosyltransferase 2A,MAT2A)基因在猪肌内脂肪细胞分化中的作用。根据GenBank中猪MAT2A基因mRNA序列(登录号:NM_001167650.1)设计引物,提取猪脂肪组... 详细信息

本研究通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶2A(methionine adenosyltransferase 2A,MAT2A)基因在猪肌内脂肪细胞分化中的作用。根据GenBank中猪MAT2A基因mRNA序列(登录号:NM_001167650.1)设计引物,提取猪脂肪组织细胞总RNA并反转录获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增并连接到pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体中,对重组质粒pAd-MAT2A进行测序鉴定;pAd-MAT2A载体经PacⅠ限制酶酶切线性化,经质粒大片段回收纯化后转染293A细胞进行病毒包装;采用实时荧光定量PCR检测MAT2A基因表达情况,并提取蛋白进行Western blotting分析,取分化第8天的细胞进行油红O染色。结果表明,穿梭载体pAdTrack-CMV-MAT2A构建成功,并能与骨架载体pAdEasy-1实现同源重组;腺病毒载体pAd-MAT2A转染293A细胞后,病毒滴度达到1E+6PFU/mL,可满足侵染猪肌内脂肪细胞的需要。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,MAT2A基因mRNA和蛋白水平均显著上调。油红O染色结果显示,过表达MAT2A基因可促进猪肌内脂肪细胞内脂滴聚积。结果表明,腺病毒介导的MAT2A基因过表达在猪肌内脂肪细胞中呈上调趋势,MAT2A基因可促进脂质积累。

关键词：腺苷甲硫氨酸转移酶2A(MAT2A)基因重组腺病毒猪肌内脂肪细胞

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不同清粪方式对分娩猪舍空气质量的影响

黑龙江畜牧兽医 2019年第20期 54-56页

作者：赵云焕张世阳唐雪峰赵聘陈培荣王俊锋信阳农林学院牧医工程学院/河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心/信阳市畜禽养殖与环境控制重点实验室

为了研究不同清粪方式对分娩猪舍内空气质量的影响,试验选择两栋建筑结构相同的分娩猪舍,分别采用水冲式(水冲粪组)和人工干清粪方式(干清粪组),测定猪舍内空气温度、相对湿度、风速、CO2和NH3浓度,连续测定5 d。结果表明:干清粪组NH3... 详细信息

为了研究不同清粪方式对分娩猪舍内空气质量的影响,试验选择两栋建筑结构相同的分娩猪舍,分别采用水冲式(水冲粪组)和人工干清粪方式(干清粪组),测定猪舍内空气温度、相对湿度、风速、CO2和NH3浓度,连续测定5 d。结果表明:干清粪组NH3浓度极显著高于水冲粪组(P0.05)。说明水冲式清粪方式能够降低猪舍NH3浓度、改善空气质量,但同时提高了猪舍的相对湿度,耗水量相对较高,猪场废水处理量相应加大。猪场可以根据自己的实际情况,采取相应的粪便处理方式。

关键词：分娩猪舍水冲式清粪干清粪空气质量温度 NH3 CO2

猪伪狂犬病病毒流行株gE蛋白表达及其多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2021年第2期48卷 631-639页

作者：曲哲会赵瑜张喜文连慧香赵云焕陈斌郭晓秋信阳农林学院牧医工程学院信阳464000 河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心信阳464000 信阳市畜禽养殖与环境控制重点实验室信阳464000

本研究旨在获得重组伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白及其多克隆抗体。利用PCR方法从PRV感染猪的肺脏、脑和扁桃体混合组织中扩增PRV gE基因,连接至克隆载体pMD18-T(pMD-gE)后进行测序与进化树分析。以pMD-gE为模板,利用PCR方法扩增其膜外结构... 详细信息

本研究旨在获得重组伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白及其多克隆抗体。利用PCR方法从PRV感染猪的肺脏、脑和扁桃体混合组织中扩增PRV gE基因,连接至克隆载体pMD18-T(pMD-gE)后进行测序与进化树分析。以pMD-gE为模板,利用PCR方法扩增其膜外结构域部分基因(gE-outside),将其连接至原核表达载体pET-30a(+),转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,构建重组质粒pET-gE-outside。将重组质粒pET-gE-outside转化大肠杆菌Rosetta TM(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting进行表达产物的分析与鉴定。经亲和层析技术纯化重组PRV gE蛋白并免疫小鼠,通过间接ELISA和Western blotting分别进行三免3周血清中鼠抗PRV gE多克隆抗体效价的测定和鉴定。PCR和测序结果表明,本研究成功克隆了PRV gE基因,与国内2011年以后流行毒株属于相同分支。SDS-PAGE和Western blotting结果证实,PRV gE-outside基因在原核表达系统获得正确表达,分子质量约为55 ku,且可与猪抗PRV多克隆抗体发生免疫反应。经亲和层析纯化的gE-outside蛋白浓度为1.23 mg/mL。将其免疫小鼠,三免3周的小鼠血清中鼠抗PRV gE-outside多克隆抗体效价为1∶204800,并可与gE-outside蛋白发生免疫反应。综上,本研究制备了重组PRV gE蛋白和鼠抗PRV gE蛋白多克隆抗体,可为PRV感染机制研究及建立快速、高效免疫学检测技术提供技术指导和材料。

关键词：伪狂犬病病毒(PRV) gE蛋白原核表达多克隆抗体

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复合中药凝胶剂的制备

中国兽医杂志 2019年第3期55卷 50-53页

作者：何敏赵存真李建柱赵云焕吴海港陈敏信阳农林学院牧医工程学院信阳市兽药新制剂研究与创制工程技术中心河南信阳464000 信阳农林学院牧医工程学院河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心河南信阳464000

本试验以天葵子为主药,与蒲公英、苦参、白鲜皮3种中药联合使用制备复方中药凝胶剂。采用水提法提取中药的有效成分,以卡波姆-940、主药、甘油、氮酮的用量为因素,采用正交试验设计,优选复合中药凝胶剂的最佳配比,并根据2015版中国药典... 详细信息

本试验以天葵子为主药,与蒲公英、苦参、白鲜皮3种中药联合使用制备复方中药凝胶剂。采用水提法提取中药的有效成分,以卡波姆-940、主药、甘油、氮酮的用量为因素,采用正交试验设计,优选复合中药凝胶剂的最佳配比,并根据2015版中国药典关于凝胶剂的质量要求,对本试验所制备的复合中药凝胶剂进行质量检查。结果显示,1.5%卡波姆940,15%主药,10%甘油,1.5%氮酮为本试验中复合中药凝胶剂的最佳组合方案。药效学试验表明,本试验所制得的凝胶剂对治疗皮肤炎症具有一定的治疗效果。

关键词：中药凝胶剂基质正交试验设计